三步沉淀法纯化鸡卵类黏蛋白

鸡卵类黏蛋白（hen’s egg ovomucoid,HOVM）是鸡蛋清中最重要的过敏原蛋白,探讨三步沉淀（一步三氯乙酸沉淀以及两步硫酸铵盐析沉淀）从鸡蛋清中提取并纯化HOVM的工艺条件,并利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳以及高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）技术检测纯化效果。结果表明：用等体积去离子水稀释的鸡卵清液加入质量分数10%三氯乙酸去除大部分杂蛋白后,所得上清液加入硫酸铵至终饱和度50%,盐析沉淀进一步去除非HOVM的杂蛋白,上清液中最后再追加硫酸铵至终饱和度80%,离心所得沉淀再经过透析冻干即为高纯度的HOVM;HPLC（检测波长220 nm）检测所获HOVM的纯度为99.202%,此工艺条件下得到HOVM的提取率约为27.05%。     

鸡卵类黏蛋白结构与性质研究进展

鸡卵类黏蛋白是鸡蛋中最主要也是过敏原性最强的过敏原蛋白。本文总结该蛋白的结构,包括氨基酸序列、糖基组成、二硫键位置、二级结构以及组成该蛋白的3 个结构域,并描述其理化性质,最后着重分析讨论其过敏原性,特别是其分子结构中二硫键、糖基和结构域等因素与过敏原性之间的内在联系。     

虾蛋白过敏实验动物模型的建立

以卵白蛋白为阳性对照,以平衡盐溶液(PBS)为阴性对照,观察虾蛋白的全身过敏反应。同时,观察虾蛋白对致敏豚鼠离体回肠平滑肌过敏性收缩反应(Schultz-Dale 反应)的影响,以建立虾蛋白过敏实验动物模型。结果显示,用0.01～2g/100mL 卵白蛋白致敏并激发后,100% 豚鼠呈全身过敏反应阳性,0.1g/100mL 卵白蛋白组的豚鼠100% 死亡。相似质量浓度虾蛋白(0.01～1g/100mL)的全身过敏反应与卵白蛋白相近(与卵白蛋白组比较,P ＞ 0.05);Schultz-Dale 反应的实验结果与全身过敏反应结果相似。由此,初步建立虾蛋白过敏实验的动物模型。     

色谱法在鸡蛋清主要过敏原分离纯化中研究进展

鸡蛋营养丰富,同时也是引起人体过敏的主要食物之一。蛋清中含有4种主要过敏原,包括卵白蛋白、卵转铁蛋白、卵类黏蛋白和溶菌酶。概述了鸡蛋中4种主要过敏原的理化特性及色谱法纯化过敏原的研究进展,旨在为规模化分离得到高纯度和高活性的过敏原提供参考。     

加热对鸡卵类黏蛋白结构及其与IgG结合能力的影响

鸡卵类黏蛋白(hen's egg ovomucoid,HOVM)是存在于鸡蛋卵清中的一种致敏蛋白,而热处理是常用的一种蛋制品的加工方式。通过间接酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法、圆二色谱法、8-苯胺-1-萘磺酸(8-anilino-1-naphthalenesulfonic acid,ANS)荧光探针法以及相关性分析法解释热处理对HOVM与免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)结合能力和结构的影响。结果表明:随着热处理强度(包括温度和时间)的增加,HOVM与IgG的结合能力不断下降,二级结构中的α-螺旋和β-折叠含量呈下降趋势,β-转角和无规则卷曲的含量呈上升趋势,表面疏水性指数在处理强度较低的情况下会提高,处理强度较高的情况下会下降,HOVM结合ANS后的最大荧光波长数(λmax)出现蓝移以及数值变化显示HOVM结构在热处理的作用下先变得松散,随后处理温度的攀升可能会进一步导致HOVM蛋白发生凝聚。     

基于高压结合酶法制备的低敏虾制品体内体外致敏性检测的差异性分析

采用高压结合酶法处理凡纳滨对虾的虾蛋白、虾仁泥（虾肉）和虾仁,获得3 种低敏虾制品;采用酶联免疫吸附法检测3 种虾制品的过敏原性,采用全身性过敏反应（过敏性休克模型）及致敏离体回肠平滑肌收缩实验（Schultz-Dale反应）检测3 种低敏虾制品的致敏性,以分析体内与体外方法检测虾制品致敏性的差异性。结果显示：处理前的3 种原料过敏原性极高。经高压结合酶法处理的虾蛋白、虾肉和虾仁的过敏原性分别消减97.0%、94.1%和94.5%。而在动物实验中（以磷酸缓冲盐溶液为阴性对照,未处理虾蛋白为阳性对照,以豚鼠为受试对象）,未处理虾蛋白组的过敏反应发生率与死亡率均为100%,3 种低敏虾制品的过敏反应发生率也为100%,死亡率分别为16.7%（虾蛋白产物）、50%（虾肉产物）和83.3%（虾仁产物）。致敏的离体回肠受到3 种低敏虾制品攻击后,收缩力也明显增强,分别达到376.9%、766.2%和1 004.4%。上述结果表明,对高压结合酶法制备的低敏虾制品过敏原性的检测,体外检测与体内检测存在一定的差异性。     

鸡卵清白蛋白多肽抗皮肤光老化的功能研究

本文以昆明小鼠和鸡卵清白蛋白多肽为研究对象,研究了鸡卵清白蛋白多肽对紫外线损伤的小鼠光老化皮肤的保护作用。实验动物随机分为正常对照组、模型对照组、Vc阳性对照组、卵清白蛋白多肽低剂量组、卵清白蛋白多肽高剂量组五组。除正常对照组外,运用紫外灯管模拟紫外线长期照射各组小鼠皮肤的无毛部分,建立小鼠皮肤光老化模型。同时,用5％Vc溶液、10％的鸡卵清白蛋白多肽溶液、40％的鸡卵清白蛋白多肽溶液分别外涂于Vc阳性对照组、卵清白蛋白多肽低剂量组、卵清白蛋白多肽高剂量组小鼠背部无毛皮肤,正常对照组和模型对照组涂抹蒸馏水。60天后,观察各组小鼠皮肤的表观特征并测定相关生化指标。结果显示,与模型对照组相比,鸡卵清白蛋白多肽高、低剂量组小鼠皮肤光滑,褶皱较浅,富有弹性,红斑极少,接近正常对照组小鼠皮肤;皮肤重量均显著降低（p〈0．01,p〈0．01）,羟脯氨酸（HPY）含量均显著降低（p〈0．01,p〈0．05）,丙二醛（MDA）含量存在显著差异（p〈0．05,p〈0．05）,超氧化物歧化酶（SOD）活力显著增强（p〈0．05,p〈0．05）。说明鸡卵清白蛋白多肽对小鼠光老化皮肤有明显的保护作用。     

干热提高蛋清粉凝胶性过程中美拉德反应的研究

葡萄糖与卵白蛋白在不同的干热条件下进行反应(温度:55,65 ℃;相对湿度:51.4%、65%、78.9%),研究不同的反应条件下卵白蛋白-葡萄糖(OVA-Glu)反应体系的褐变程度、游离氨基、溶解度及蛋白聚合物变化趋势.OVA-Glu体系在不同的温度与湿度条件下反应4 d,对反应后的样品研究发现:样品褐变程度随着时间呈线性升高;温度和湿度对游离氨基数量的影响都非常明显,其总体的变化趋势随时间呈指数关系曲线下降;OVA-Glu反应体系在干热过程中蛋白溶解度明显下降.OVA单体蛋白聚合成二聚体是在反应1 d内出现的,随时间延长其数量明显增多,二聚体主要是通过二硫键连接的,温度对提高聚合物的数量起明显的促进作用.     

糖基化卵清蛋白的凝胶性与凝胶稳定性

以卵清蛋白为对照,以糖基化卵清蛋白为研究对象,研究二者所成凝胶在贮藏期间质构、持水性以及微观结构的变化。结果表明:糖基化卵清蛋白的凝胶硬度、弹性、凝聚性与持水性比卵清蛋白高146%、7%、24%和61%。4℃条件下贮藏180d时,糖基化卵清蛋白的凝胶硬度与凝聚性均降低2%,凝胶弹性与持水性增加1.3%、0.6%,卵清蛋白的凝胶硬度降低9%,凝胶弹性、凝聚性与持水性增加0.6%、3%和5.2%。在500倍扫描电子显微镜(SEM)下观察,糖基化卵清蛋白所成凝胶的结构较紧密、均匀,且随贮藏时间的延长无明显变化,而卵清蛋白所成凝胶的间隙较大,随贮藏时间的延长其空间结构变得更加疏松。研究结果证明,糖基化可以明显提高卵清蛋白的凝胶性与凝胶稳定性。     

己糖修饰的糖基化卵清蛋白产物及其致敏性分析

研究了不同己糖修饰的糖基化卵清蛋白的接枝度、表面疏水性、紫外光谱、荧光光谱及致敏性变化。结果表明:半乳糖修饰的卵清蛋白糖基化程度最高,果糖修饰的最低;糖基化反应使卵清蛋白表面疏水性降低;紫外光谱和荧光光谱构象表征表明,糖基化过程中的热处理以及分子基团的改变破坏了卵清蛋白原有构象,使芳香族氨基酸外露,且半乳糖对卵清蛋白构象的破坏程度最高;糖基化反应使卵清蛋白致敏性降低,但果糖修饰的卵清蛋白的IgG/IgE结合力下降轻微,远低于半乳糖和葡萄糖的。     

裙带菜多糖体外和体内降血脂活性

目的:采用体外和体内法研究裙带菜多糖(Undaria pinnatifida polysaccharide,PUP)降血脂功能.方法:模拟人体胃肠环境,体外法测定PUP对牛磺胆酸盐的结合能力及其对胰脂肪酶的抑制作用,以此来评价其体外降血脂功能;通过高脂饮食诱导C57BL/6J小鼠建立高脂血症模型,利用PUP灌胃干预,比...     

乳源生物活性肽QEPV体内外的吸收转运

发酵乳作为一种长寿食品备受关注。多肽Gln-Glu-Pro-Val（QEPV）是一种来源于发酵乳,具有免疫调节 作用的生物活性肽。通过Caco-2细胞单层膜模型及小鼠模型,研究乳源性生物活性肽QEPV在体外和体内的转运吸 收情况。结果表明：乳源性生物活性肽QEPV具有非常好的稳定性,且能够穿过由Caco-2细胞形成的转运模型,但 当QEPV质量浓度高于3.00 mg/mL时穿膜速率趋于稳定。流式细胞术和超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱结果 表明Caco-2细胞不能吸收QEPV,由于QEPV是不具有空间结构的小肽,可以初步推测出QEPV主要通过胞旁转运方 式透过Caco-2细胞单层膜模型的结论。同时,QEPV可以经过腹腔注射和灌胃方式被小鼠吸收,但肠道吸收效率较 差,腹腔吸收效率较好。     

The allergenicity of ovomucoid and the effect of its elimination from hen's egg white

In order to remove the ovomucoid from hen's egg white, chitin and hydrazide polystyrene beads were used as affinity ligands with 8.9 and 7.1 mg trypsin g^?1 ligand respectively. Ovomucoid was successfully depleted using the trypsin affinity column without hydrolysation of the other egg white constituents. The components of the egg white were purified by high‐performance liquid chromatography, and then the allergenicity of each of these components was compared with that of pooled human serum derived from patients who are allergic to hen's eggs. The importance of using pure protein for studies of the allergenicity of egg white is highlighted, and it was determined (using an enzyme‐immunosorbent assay) that ovomucoid and ovalbumin are major allergenic proteins in egg white. The ovomucoid‐eliminated egg white preparation exhibited significantly less IgE‐binding activity than normal egg white. The ovomucoid‐specific IgE antibodies may have important implications with regard to the egg‐allergic reaction in humans. © 2001 Society of Chemical Industry     

潮霉素磷酸转移酶的致敏性评价研究

潮霉素磷酸转移酶基因广泛用于转基因生物的基因转化过程中,该基因(hpt)编码的蛋白属于无食用和食物过敏史的处源目的蛋白。根据IFBC-ILSI 制定的转基因食品致过敏性评价方法,进行了与已知的过敏蛋白的氨基酸序列相似性比较、消化稳定性实验以及动物模型实验。结果表明,未发现连续8 个氨基酸序列相同;该蛋白在80℃加热10min 左右时已全部降解,不具有热稳定性;体外模拟消化实验表明,消化20min 时,SDS-PAGE 和WesternBlotting 已检测不出Hpt 蛋白。实验采用BN 大鼠作为过敏模型,ELISA 检测特异IgG、IgE 以及组胺水平,Hpt 蛋白与阳性存在显著性差异(p ＜ 0.05),与阴性无显著性差异。综合结果表明,Hpt 蛋白潜在致敏性很低。本研究可为进一步开展以hpt 基因为标记性基因的作物上市前安全性的评价提供基础数据。