广东虫草多糖的醇沉及凝胶渗透色谱法表征其分子量分布的研究

采用浓度为30%、50%、70%、90%的乙醇对广东虫草多糖(CGP)进行分级醇沉(GEP)和分步醇沉(SEP)处理.并利用凝胶渗透色谱法(GPC)测定各醇沉组分的保留时间1R、重均分子量Mw、多分散性PD以及各组分的相对含量,以表征不同醇沉方法所得多糖组分的分子量分布.结果表明:不同乙醇浓度醇沉得到的多糖组分的分子量大小有很大差异,且不同分子量范围的多糖在不同醇浓度下的含量也不一致;要获取更多的大分子量虫草多糖,宜采用分步醇沉法,乙醇浓度应从30%逐渐增大到70%;若采用分级醇沉法,则乙醇的浓度应选择在50%～70%.     

黄芪多糖的分子量分布

本文通过分级醇沉、分步醇沉和超滤方法研究黄芪多糖的分子量分布。结果表明:分级醇沉浓度对应的得率随醇浓度的升高而呈增加趋势;糖的含量变化起伏较大,醇浓度为60%时所得多糖含量比较低,醇浓度为30%和70%时所得多糖含量较高;分步醇沉的醇浓度为10%时沉淀下来的多糖所占比例最大,醇浓度达到80%时大部分多糖都可以沉淀下来;而所得多糖含量除90%醇浓度时较低外,其余相差不大;超滤后黄芪多糖大部分分布在离心沉淀和截留分子量150千道尔顿(150kDa)以上部分,两者占了57.6%;其含量除3kDa以下和6kDa至50kDa部分较低外,其它部分含量相差不大。黄芪多糖的分布很不均匀,大分子量和小分子量的多糖较多,而3kDa至150kDa这一段的多糖只占总多糖的13.2%。     

蛹、米虫草多糖含量及抗氧化活性比较研究

旨在研究不同来源北虫草子实体多糖的含量差异以及分级醇沉各组分的抗氧化活性差异。通过热水浸提、分级醇沉法分别获得蛹虫草多糖(Cordyceps militaris polysaccharide,CMP)、米虫草多糖(Cordyceps oryzae polysaccharide,COP);以DPPH自由基清除率、羟基自由基(·OH)清除率和铁离子还原能力法(ferric reducing antioxidant power,FRAP)评价两种多糖的体外抗氧化活性;构建H_2O_2致PC12细胞氧化损伤模型,比较两种虫草多糖对氧化损伤的PC12细胞的保护作用。不同乙醇浓度沉淀获得的虫草多糖中,米虫草多糖提取率及含量高于蛹虫草多糖;米虫草多糖对DPPH自由基、·OH清除率分别可达66.43%、69.22%,蛹虫草多糖可达73.69%、73.50%;FRAP法测得蛹虫草多糖抗氧化能力较强。细胞试验结果表明,氧化损伤的PC12细胞经两种多糖处理后细胞存活率皆有不同程度的提升,呈浓度依赖性,蛹虫草多糖组细胞存活率最高可达90.45%,米虫草多糖组细胞存活率最高可达82.62%。以蚕蛹为培养基的蛹虫草在多糖提取率及含量方面低于以大米为培养基的米虫草,但其多糖对自由基清除能力及PC12细胞保护作用优于米虫草多糖,具有较好的抗氧化能力。     

蛹虫草乙醇分级多糖生理功能研究

为了探讨不同浓度乙醇分级虫草多糖的生理功能,以蛹虫草为材料通过液态深层发酵获得发酵液和菌丝体,用水浸提,以不同浓度的乙醇沉淀来获得蛹虫草胞内、胞外多糖,同时以果蝇为材料测定了不同浓度的乙醇分级虫草胞内、胞外多糖的抗氧化性、抗菌性等生理功能。结果表明,70%的醇沉多糖量最多,可使胞内、胞外多糖的得率分别为1.513 mg/mL、0.483 mg/mL;70%的醇沉胞外多糖具有较好的抗氧化性,可使果蝇体内的SOD值达到1.261 U/mgprot,比对照组高13.13%,使MDA值达到0.019 nmol/mgprot,比对照组低67.2%;70%的醇沉胞内多糖抗菌性最好,可使黑曲霉的抑菌圈直径达13.4 mm、大肠杆菌的抑菌圈直径达11.3mm,分别是对照组直径的2.19和1.85倍。     

红参药渣中多糖的提取及其醇沉性质分析

在一系列单因素实验的基础上,通过四因素三水平正交试验对红参药渣中人参多糖的提取工艺进行了优化,结果表明:最佳提取工艺参数为提取温度100℃,提取时间2 h,料液比为1∶40 g/m L,提取次数2次。在此基础之上,通过分级和分步醇沉的方法考察了人参多糖的分布规律,分级醇沉结果表明人参多糖得率随醇沉浓度的升高而增加,多糖的含量变化起伏较大,基本符合二次多项式函数关系。分步醇沉结果表明了人参多糖的分子量分布广泛且不均匀,以高、中分子量的多糖为主。     

玉竹多糖分离纯化及自由基清除能力研究

利用分步醇沉对玉竹多糖分子量分布以及醇沉物清除自由基能力进行了研究,并探讨了大孔树脂AB-8对多糖的吸附性能及影响因素.分步醇沉实验结果表明,以70%~90%醇浓度沉淀出的中等分子量和低分子量的多糖比例最多,高分子量多糖比例较少.不同分子量的玉竹多糖对自由基清除能力是不同的,70%醇沉多糖对超氧自由基和羟自由基的抑制效果最好.以流速为1mL/min,多糖浓度为6mg/mL组合上柱,大孔树脂AB-8对多糖的吸附效果最好.     

不同醇沉竹荪多糖组分对青春双歧杆菌体外增殖作用的影响

本文以竹荪为原料提取多糖成分并以乙醇分级制备竹荪多糖(DPs)不同组分,通过青春双歧杆菌体外增殖试验初步评价竹荪多糖及其分级醇沉组分的益生元功效。结果显示在α-淀粉酶溶液中水解4 h后,20%、40%、50%、60%竹荪多糖醇沉组分水解度分别为9.10%、8.02%、8.88%、11.67%,与对照组菊粉(水解度13.15%)相比差异显著(P<0.05);80%竹荪多糖醇沉组分、未分级醇沉组分与菊粉对照组相比差异不显著(P>0.05)。在模拟胃液中水解6 h后,20%、40%、50%竹荪多糖醇沉组分水解度分别为17.30%、14.52%、9.61%,与对照组菊粉(水解度5.72%)相比差异显著(P<0.05);60%竹荪多糖醇沉组分、80%竹荪多糖醇沉组分、未分级醇沉组分水解度与对照组相比无显著差异(P>0.05)。随着竹荪多糖添加量的增加,青春双歧杆菌的菌体浓度呈现先增大而后不断减小的趋势。分级醇沉浓度达到80%的竹荪多糖组分和未分级的多糖组分,青春双歧杆菌体外增殖作用与pH下降显著且效果优于菊粉(P<0.05),并在20 h的发酵时间内两者表现出相似的效果。不同竹荪多糖醇沉组分对青春双歧杆菌均有增殖效果,且不同竹荪多糖醇沉组分的增殖效果和抗水解能力随乙醇浓度的增加而增强,未分级的多糖组分同样可以加强青春双歧杆菌增殖能力,具有益生元潜力。     

蛹虫草多糖的纯化及其分子量的测定

以蛹虫草子实体为材料,对水提醇沉、硫酸锌盐去蛋白后获得蛹虫草粗多糖（CP）进行分离纯化。采用膜分离技术、DEAE．52柱层析及SephadexG-100柱层析对CP进行分离纯化,并使用高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）测定各组分多糖分子量,以表征不同路径所得多糖的分子量分布。结果表明：CP经膜过滤、DEAE-52柱层析及SephadexG-100进一步柱层析得到多糖组分CP2-c2-s2,经HPGPC法鉴定,CP2-c2-s2为均一多糖组分,其平均分子量为20200Da。     

铜绿微囊藻(Microcystic aeruginosa)胞外和胞内酸性多糖分离、纯化方法的比较及产物的鉴定

铜绿微囊藻(Microcystic aeruginosa)属于蓝藻,是水华爆发的主体藻类。本实验在不同pH值和温度条件下分别提取其胞内和胞外多糖的粗制品,采用DEAE-纤维素离子交换柱层析,分离出其中含有醛酸基团的酸性组分,再用具分子筛效应的SephadexG-150和G-100进一步纯化出具HPLC单一对称峰的两个胞外酸性多糖组分和一个胞内酸性多糖组分。分别测定和分析三种酸性多糖的分子量、糖醛酸及单糖的组成。     

蛹虫草胞外锌多糖抗氧化能力的研究

以蛹虫草为材料通过液体深层富锌培养获得胞外富锌多糖,测定了蛹虫草胞外富锌多糖的锌含量和抗氧化性能,即清除氧自由基、羟自由基和DPPH的能力。实验结果表明:蛹虫草富锌培养基内ZnSO4浓度在150μg/mL下,可以显著提高胞外锌多糖的有机锌含量(P<0.01),使有机锌含量达到0.87mg/g,比对照提高295%。有机锌对提高胞外锌多糖清除自由基的能力有显著的促进作用(P<0.01),清除氧自由基、羟自由基和DPPH的能力分别是对照的7.05%、23.5%和17.49%;胞外锌多糖对自由基的清除能力与多糖浓度呈明显的剂量-效应关系(P<0.01)。     

蛹虫草多糖对紫外线诱发蚕豆根尖细胞微核的影响

目的：研究蛹虫草多糖对紫外线诱发的蚕豆根尖细胞微核的影响。方法：采用蚕豆根尖细胞微核试验。结果：浓度为30、50、80、100μg/ml 的蛹虫草胞内、胞外多糖对蚕豆根尖微核率与阳性对照组相比均具有极显著差异(p ＜ 0.01),浓度为100μg/ml 的蛹虫草胞内、胞外多糖对根尖微核的抑制率分别为47.68%、43.04%。蛹虫草胞内、胞外多糖每种样品的不同浓度之间对微核的影响存在极显著的差异(p ＜ 0.01),且蚕豆微核率随多糖浓度的提高而降低。结论：蛹虫草胞内、胞外多糖均可有效抑制紫外线诱发的蚕豆根尖细胞微核的产生。     

红毛菜多糖的分离、纯化及纯度鉴定

将红毛菜经过脱脂后用热水抽提可溶性多糖,经脱蛋白后得粗多糖,用DEAE-32纤维素和SephadaxG-100对粗多糖进行柱层析分离提纯,得组分PY1和PY2;利用紫外光谱和红外光谱,对组分进行鉴定纯度。     

桑黄菌丝体多糖的分离纯化及抗氧化、抗肿瘤活性分析

采用水提醇沉法制备桑黄菌丝体粗多糖，分别用终浓度为30%、45%和60%的硫酸铵溶液对桑黄菌丝体中粗多糖进行粗分离，并比较所得各多糖组分的抗氧化、抗肿瘤活性。对其中活性强的组分采用离子交换树脂柱色谱纯化，采用高效排阻色谱-折光示差检测器-多角度光散射仪对纯化多糖进行均一性分析和分子量测定。结果显示，45%硫酸铵分离多糖IPS45显示最强的抗肿瘤活性及较好的清除超氧阴离子活性，IPS45经DEAE-52纤维素离子交换柱纯化得到四个级分，经高效排阻色谱分析，其中蒸馏水洗脱级分（IPS45-W）为均一多糖，重均分子量为79.1 kDa；气相色谱分析其单糖组成为甘露糖:葡萄糖:半乳糖:未知单糖，摩尔比为1.57:8.38:1.09:1.00。IPS45-W可抑制HepG2细胞生长，当浓度为50μg/mL时，对HepG2细胞的抑制率为56.74%，高于前期研究的乙醇沉淀分离所得桑黄菌丝体均一多糖同浓度下11%～35%的抑制率。该结果为不同组成的桑黄多糖的分离和应用提供依据。     

小麦麸皮中戊聚糖的纯化分级及组成分析

用乙醇逐步沉淀和离子交换柱层析方法对麸皮中制备的水溶戊聚糖(WSP)和水不溶戊聚糖 (AEP)进行分级纯化 ,并对各组分的组成进行了分析 .结果表明 ,用乙醇逐步沉淀时 ,随着乙醇体积分数的增加 ,所得分级组分具有较高的分支 ;用离子交换柱层析时 ,WSP可分级为 2个组分 ,AEP可分级为 3个组分 ,并且用NaCl较H2 O洗脱的组分具有较高的分支和较高的相对分子质量     

灵芝发酵液的超滤提取及其抗氧化活性的研究

考察了超滤浓缩醇沉法提取发酵灵芝胞外多糖,超滤条件:截留分子量10000,压差0.2MPa,料液浓度12.20mg/mL。超滤浓缩法与传统的减压浓缩法相比,多糖含量、多糖得率均高于后者,所得多糖的品质得到提高,相应减轻了后道多糖纯化的负担。灵芝胞外多糖对羟自由基·OH(HFR)有较好的清除能力,在一定范围内清除率与浓度呈正相关,超滤浓缩醇沉法提取灵芝胞外多糖的·OH清除率高于减压浓缩醇沉法。     

香薷多糖的提取与纯化研究

利用热水浸提、乙醇醇沉提取水溶性香薷粗多糖,脱蛋白、除色素后所得的精制多糖经DEAE-52 纤维素阴离子交换色谱得两个组分Ⅰ和Ⅱ。主要组分Ⅱ经Sephacryl S-300 葡聚糖凝胶色谱进一步纯化,得单一多糖组分,命名为HMP Ⅱ。经高效凝胶渗透色谱检测其纯度为93.55%。     

DEAE-52纤维素静态法分离纯化桦褐孔菌多糖的工艺优化

为了能高效快速的分离纯化桦褐孔菌子实体多糖,使用DEAE-52纤维素静态法,分别研究了静态吸附过程中多糖的样品浓度、吸附时间、吸附温度和吸附振荡转速等因素对多糖吸附量的影响及解吸过程中洗脱时间和洗脱液量对多糖解吸量的影响,确定了多糖分离纯化优化工艺条件。结果表明:多糖浓度为40 mg/mL时,在30 ℃,120 r/min转速下吸附处理90 min,此时DEAE-52纤维素对多糖吸附效果最好。而分别以12倍体积的去离子水洗脱90 min后,采用11倍体积的0.2 mol/L NaCl溶液洗脱60 min时,能达到最好的解吸效果,其中去离子水洗脱多糖浓度为0.56 mg/mL,0.2 mol/L NaCl洗脱多糖浓度为0.38 mg/mL。静态洗脱出的两种多糖组分均为分子量均一分布的多糖组分,与DEAE-52纤维素柱层析分离效果一致。因此采用DEAE-52纤维素静态法分离纯化桦褐孔菌子实体多糖是可行的。     

冬枣多糖的分离纯化及抗氧化活性研究

目的：分离纯化冬枣多糖,并研究其组分、结构特征和抗氧化活性。方法：采用水提醇沉、脱蛋白脱色、DEAE-52纤维素柱和Sephadex G-100凝胶色谱柱分离纯化冬枣多糖;利用Sephadex G-100凝胶色谱柱进行纯度鉴定和分子质量的测定;通过紫外光谱、红外光谱、气相色谱法进行了初步结构分析;采用邻二氮菲法和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）体系对纯化多糖进行抗氧化活性的研究。结果：冬枣多糖经DEAE-52分离和Sephadex G-100纯化得到2 个组分DPA和DPB,经Sephadex G-100鉴定均为均一组分,DPA和DPB分子质量分别为1.04×104、3.02×105 D,不含蛋白质和核酸,为吡喃型糖苷环骨架,DPA的单糖组成为阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,其物质的量比为6.66∶1.00∶6.75∶2.09;DPB的单糖组成为鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,其物质的量比为4.33∶10.90∶1.00∶3.25∶4.78;DPA和DPB均具有一定的抗氧化活性,随着多糖质量浓度的增加,其抗氧化活性增强,在质量浓度为8 mg/mL时对羟自由基清除率分别为28.52%、78.79%,在质量浓度为0.4 mg/mL时对DPPH自由基清除率分别为9.97%、24.54%。结论：DPA和DPB均具有一定的抗氧化活性。     

桑黄菌丝体多糖的分离纯化及理化性质分析

研究桑黄粗多糖的分离和纯化工艺,并对多糖组分进行理化性质分析。结果表明：经DEAE-52纤维素离子交换层析和Sephadex G-100凝胶过滤层析得到两个组分P-47000和P-8700;经高效液相色谱分析证明,两组分均为纯品,且不含蛋白质、核酸,为非淀粉类多糖,分子质量分别为4.74×104D和8.71×103D,均由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖组成,P-47000中各单糖物质的量比为3.47:1.99:1:63.27:13.44,P-8700中各单糖物质的量比为10.46:1:1.03:182.75:30.94。     

两种石耳中多糖的提取与分离纯化及其单糖组成分析

目的:对网脊石耳(Umbilicaria decussate(Vill.)Zahlbr.)和淡肤根石耳(Umbilicaria virginis Schaer.)多糖中的单糖组成进行研究。方法:两种石耳经水提、醇沉、冷冻干燥得水溶性多糖,经DEAE-52离子交换层析柱和SephadexG-150凝胶柱进行分离纯化得纯化多糖。气相色谱分析所得多糖的单糖组成。结果:淡肤根石耳精制多糖的单糖组为甘露糖、葡萄糖、半乳糖,其含量之比为16.00:50.96:6.17、淡肤根石耳纯化多糖的单糖组成为甘露糖、葡萄糖、半乳糖,其含量之比为2.97:17.70:1.52;网脊石耳精制多糖的单糖组成为甘露糖、葡萄糖、半乳糖,其含量之比为3.90:38.086:2.00、网脊石耳纯化多糖只含葡萄糖,含量为5.37%。结论:网脊石耳和淡肤根石耳都含有葡萄糖,含有少量的甘露糖和半乳糖。