考马斯亮蓝法测定蛋白含量的研究

采用考马斯亮蓝G-250染色法对蛋白质含量进行了测定,建立了快速、灵敏的检测蛋白质的方法。结果表明,考马斯亮蓝G-250染色法简单、迅速,且相对较为准确,是测定低浓度蛋白质含量的有效方法。     

考马斯法测定棉籽蛋白发酵液中蛋白质含量

介绍了利用生物法来发酵棉籽蛋白,并使用考马斯亮蓝法测定酵液中蛋白质含量的方法.利用蛋白质与考马斯亮蓝显色原理,用紫外分光光度法测定蛋白质含量,检测波长为595 nm,蛋白质含量在0～ 16.67 mg/L时与吸光度有良好的线性关系,测定所得标准曲线方程为y=0.044x+0.09,其中R=0.999.结果表明:这种方法...     

考马斯亮蓝法测定青霉素发酵液中可溶性蛋白质含量

以青霉素发酵液为原料,利用蛋白质与考马斯亮蓝显色原理,测定发酵液中蛋白质含量,并对检测方法进行验证,检测波长为595 nm。蛋白质含量在0～30μg/mL时与吸光度有良好的线性关系,测定所需标准曲线方程为y=0.003 9 x＋0.048 8。采用考马斯亮蓝法测定青霉素发酵液中蛋白含量具有速度快、精确度高、重现性好等特点。     

考马斯法测定棉籽蛋白发酵液中蛋白质含量

介绍了利用生物法来发酵棉籽蛋白,并使用考马斯亮蓝法测定酵液中蛋白质含量的方法。利用蛋白质与考马斯亮蓝显色原理,用紫外分光光度法测定蛋白质含量,检测波长为595 nm,蛋白质含量在0～16.67 mg/L时与吸光度有良好的线性关系,测定所得标准曲线方程为y=0.044 x+0.09,其中R=0.999。结果表明:这种方法快速、简便,RSD=3.86%(n=6),相对标准偏差小于4%,回收率>90%,该法用于实际样品测定取得了令人满意的结果。     

应用考马斯亮蓝法测定总蛋白含量

目的　应用考马斯亮蓝法检测总蛋白含量。方法　应用考马斯亮蓝法与凯氏法和Ｌｏｗｒｙ法同时 进行不同生物制品的总蛋含量检测。结果　考马斯亮蓝法操作简便,灵敏度高,重复性好,测定蛋白的线性范围为 ５～２５ｕｇ,ｒ＝ ０．９９９５,ｎ＝５,平均回收率为１０１．３％。结论　考马斯亮蓝法是检测生物制品总蛋白含量的理想方法。     

考马斯法测定棉籽蛋白发酵液中蛋白质含量

介绍了利用生物法来发酵棉籽蛋白,并使用考马斯亮蓝法测定酵液中蛋白质含量的方法。利用蛋白质与考马斯亮蓝显色原理,用紫外分光光度法测定蛋白质含量,检测波长为595nm,蛋白质含量在0—16．67mg／L时与吸光度有良好的线性关系,测定所得标准曲线方程为Y=0．044x＋0．09,其中R=0．999。结果表明：这种方法快速、简便,RSD=3．86％（n=6）,相对标准偏差小于4％,回收率〉90％,该法用于实际样品测定取得了令人满意的结果。     

蛋白质含量测定方法

蛋白质与生命的起源、存在和进化都密切相关,蛋白质测定涉及到生产和科研的众多领域。本实验用定氮法、紫外吸收法、双缩脲法、考马斯亮蓝法分别对牛奶、酸奶、豆浆进行蛋白质含量的测定。依此分析比较各种测定蛋白质的方法,总结出各方法的特点及适用条件。     

青霉素工业盐中蛋白质的检测

为了对青霉素工业盐中蛋白质浓度进行检测,监控产品质量,采用考马斯亮蓝（Coomassie Brilliant Blue）法对青霉素工业盐中蛋白质浓度进行检测,并对检测方法进行验证,检测波长为595 nm。蛋白质含量在0.000～100.000μg范围内成良好线性,相关系数r=0.998 1,平均回收率为99.28%（n=3）。采用考马斯亮蓝法对青霉素工业盐进行检测,灵敏度高,准确、可靠,可作为青霉素工业盐的质量控制方法。     

磁性微球用于蛋白-抑制剂复合物解离常数的快速测定

以凝血酶与其选择特异性抑制剂阿加曲班为模型,应用磁性微球(MM)建立了一种快速测定蛋白-抑制剂复合物解离常数(Kd)的方法。该方法以四氧化三铁磁性微球为载体,在EDC/NHS偶联作用下制备了凝血酶包覆的磁性微球(Thrombin-MM),考马斯亮蓝G-250蛋白定量法间接测定蛋白键合量为4.1 mg/g,取5 mg Thrombin-MM与400μL一系列不同浓度的阿加曲班溶液混合振荡,应用高效液相色谱法通过测定平衡吸附前后药物浓度,代入Scat-chard模型,即得Kd值,与蛋白质数据库中值一致。吸附药物后的Thrombin-MM用含10%甲醇的PBS缓冲液洗脱,回收率约84%,Thrombin-MM可重复利用。     

阿莫西林中蛋白质含量的测定

采用考马斯亮蓝G-250法测定阿莫西林中微量蛋白质含量。该法具有良好的准确度、灵敏度、稳定性和重现性,蛋白质浓度与吸光度具有很好的线性关系,符合阿莫西林中蛋白质的测定要求。     

重组日本血吸虫14-3-3蛋白的纯化和鉴定

目的观察两次切胶、两次电洗脱的方法纯化重组日本血吸虫14-3-3(Sj14-3-3)蛋白的效果。方法采用两次切胶、两次电洗脱的方法(与经典的切胶、电洗脱有所不同),纯化Sj14-3-3蛋白,并与柱层析纯化方法进行比较。结果采用两次切胶、两次电洗脱方法纯化的目的蛋白条带单一,浓度达3mg/ml,而柱层析法纯化的蛋白浓度仅为1mg/ml。Western blot证实纯化目的蛋白的特异性。结论两次切胶、两次电洗脱法可获得高纯度、高特异性的目的蛋白,不失为一种经济有效的蛋白纯化方法。     

Candida sp.脂肪酶的纯化及其性质

采用简单的两步法-离子交换层析和疏水层析法,对Candida sp. 99-125脂肪酶进行了纯化,比活提高了10.0倍,达到27200 U/mg,回收率为35.5%. SDS-PAGE电泳分析显示该酶的分子量约为38 kDa. 酶学性质研究表明,该酶最适反应温度为40℃,最适反应pH值为8.5,在室温下具有良好的稳定性. 钙离子和Tween80能够促进提高脂肪酶的活性,而铁离子、铜离子和SDS对其有明显的抑制作用.     

发酵透明质酸蛋白脱除方法的比较研究

以发酵的透明质酸(HA)粗品为纯化对象,以改良的咔唑法和考马斯亮蓝法为检测手段,比较了Sevage法、固定化蛋白酶-Sevage法、Sevage-CPC法、冻融-Sevage法脱除HA粗品中蛋白的效果.研究了有机相比例、振摇时间、HA粗品浓度对Sevage法脱除蛋白的影响,结果表明,Sevage法脱除蛋白的最优条件为:HA粗品浓度10 g·L-1、正丁醇和三氯甲烷的体积比1:4、振摇时间30 min.通过比较,发现Sevage法HA损失率低但蛋白脱除效果差;固定化蛋白酶-Sevage法蛋白脱除效果好,操作简便,适于工业化;冻融-Sevage法操作简单,蛋白脱除效果好,但成本高,适于小批量生产;Sevage-CPC法可得到最纯的HA,但成本高、工艺繁琐, CPC不能回收,有待于进一步的研究.     

偶氮胭脂红G结合共振光散射法测定人血清样品中的总蛋白

研究了在pH为2.5的BR缓冲酸性介质中,偶氮胭脂红G与牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)、鸡蛋白蛋白(OVA)及免疫球蛋白(γ-IgG)等蛋白质作用产生共振光散射(RLS)增强信号,最大散射峰位于594nm处。在最佳实验条件下,增强RLS强度在594 nm处与蛋白质浓度呈线性关系,检出限在0.025~0.406μg/mL之间,生物体液中大部分常见物质均不产生干扰。该法应用于人血清样品测定,测定结果与考马斯亮蓝法一致。     

Purification of Glucose Oxidase and β‐Galactosidase by Partitioning in a PEG‐Salt Aqueous Two‐Phase System in the Presence of PEG‐Derivatives

Abstract

Purification of glucose oxidase from Aspergillus niger and that of β‐galactosidase from Kluyveromyces lactis have been attempted using poly(ethylene glycol) (PEG)‐sodium sulfate aqueous two phase system (ATPS) in the presence of PEG‐derivatives, i.e. PEG‐Coomassie brilliant blue G‐250 and PEG‐benzoate, PEG‐palmitate and PEG‐TMA, respectively. The enzymes showed poor partitioning towards the PEG phase in comparison with other proteins in ATPS containing no ligands. Selective partitioning of other proteins was observed towards the PEG phase in the presence of PEG‐benzoate and PEG‐palmitate enriching β‐galactosidase in the salt phase whereas in the case of glucose oxidase, PEG‐Coomassie brilliant blue G‐250 derivative worked as a better affinity ligand for other proteins. A 19‐fold purification was obtained with the PEG dye derivative after 5 stage cross extractions with 80% recovery of glucose oxidase and an enrichment factor upto ～7 for β‐galactosidase with the PEG‐TMA derivative. The interaction of PEG‐benzoate and PEG‐TMA ligands with the active site of β‐galactosidase has been evaluated by molecular modeling. The effect of the molecular weight of glucose oxidase on its partitioning was confirmed as the molecular simulation shows strong affinity interaction of PEG‐glucoside with the enzyme.     

3-氯-2-甲基苯胺的气相色谱法定量分析探讨

用气相色谱进行分析时,色谱柱的选择及柱温的确定对分析结果起着很重要的作用.文中以3-氯-2-甲基苯胺为例,采用气相色谱法对类似的氯产品定量分析进行了详细的探讨,对生产过程中的控制及产品质量检验提供了可行的方法.     

壳聚糖/聚丙烯酸共聚物微球的制备及性能

以环己烷为油相,壳聚糖溶液为水相,运用反相乳液聚合法制得了具有pH敏感性的壳聚糖/聚丙烯酸共聚物微球。讨论了微球在pH=1～10缓冲溶液中的溶胀率变化,研究表明,微球在强酸性(pH≈1)和碱性(pH>7)条件下,溶胀率均在10倍以上;而在pH=2～6时溶胀较差,当pH=4时出现最低值,溶胀率低于1倍。光学显微镜所观察到的微球粒径均在40μm以内,且大小均匀。采用傅里叶红外光谱仪分析了不同配比样品特征峰的峰值和峰面积的变化。用722光栅分光光度计研究了共聚物微球包埋考马斯亮蓝的溶胀释放过程。