磁性聚乙烯醇微球固定化α-淀粉酶的研究

磁性聚乙烯醇微球为载体,采用戊二醛交联法固定化α-淀粉酶,并对固定化酶的理化性质等进行了研究。结果表明,磁性固定化α-淀粉酶的总活力、蛋白载量、比活、活性回收率分别为1107.89U/g微球、125.36mg/g微球、8.84U/mg蛋白质和37.96%;固定化α-淀粉酶的反应最适温度和最适pH分别为110℃和7.0;固定化α-淀粉酶对金属离子Mg2+、Fe2+、Zn2+和Cu2+的抑制作用的忍耐性比自由酶的明显提高;α-淀粉酶被固定化后其热稳定性、操作稳定性、pH稳定性均比自由酶的明显提高。固定化α-淀粉酶在4℃,pH7.0的缓冲液中保存30d,其活力仍保持最初活力的91.6%,这比其自由酶的高12.3%。     

黑曲霉5143脂肪酶离子注入诱变及酶学性质的研究

以产脂肪酶菌株黑曲霉Aspergillus niger51-43为出发菌株,经氮离子注入技术对其进行诱变,筛选获得酶活力有较大提高且传代稳定的正突变菌株L7,其脂肪酶活力达29.17U/mL,较原初酶活力19.28U/mL提高了151.3%。在此基础上,对该酶的酶学性质进行了研究。结果表明,高产突变株L7所产脂肪酶的最适作用温度为30℃,最适作用pH8.0,在50℃和pH6.0～9.0之间有很好的稳定性。Ca2+、Na+、Mg2+对该酶有一定的激活作用,而Cu2+、Mn2+、Fe2+、Co2+、Zn2+则抑制该酶的活性。     

磁性聚乙烯醇微球固定化β-淀粉酶的研究

磁性聚乙烯醇微球为载体,采用戊二醛交联法固定化β-淀粉酶,并对固定化酶的理化性质等进行了研究。结果表明,磁性固定化β-淀粉酶的总活力、蛋白载量、比活、活性回收率分别为7207.62 U/g,157.21 mg/g,45.85 U/mg和52.38%;固定化β-淀粉酶的反应最适温度和最适pH分别为70℃和5.O;Fe~(2+)和Cu~(2+)对β-淀粉酶有较强的抑制作用,而Zn~(2+)对其有很强的激活作用,Mg~(2+)则不影响β-淀粉酶的活性;β-淀粉酶被固定化后其热稳定性(在水介质中)、操作稳定性、pH稳定性均比自由酶的明显提高。固定化β-淀粉酶在4℃,pH 4.5的缓冲液中保存31 d,其活力仍保持最初活力的98.3%,这比其自由酶的提高26%。     

磁性壳聚糖微球固定化脂肪酶研究

以磁性壳聚糖微球为载体,通过戊二醛交联进行脂肪酶固定化,对影响脂肪酶固定化各种因素进行考察,确定最佳条件,并比较游离酶与固定化酶pH和热稳定性。结果表明,固定化适宜条件为:脂肪酶加入量5.0 mg/100 mg载体、温度40℃、时间5 h、pH 8.04、戊二醛浓度10%、最高固载率可达90.56%,酶活4034 U/g载体;与游离酶相比,固定化酶pH和热稳定性都有较宽适用范围。     

壳聚糖微球固定化脂肪酶的制备工艺及应用性质研究

以壳聚糖微球为载体,采用乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亚胺盐酸盐(EDC)活化羟基固定Candida rugosa脂肪酶,测定了不同EDC浓度、给酶量以及固定化时间对固定化脂肪酶活性的影响,并与戊二醛固定化脂肪酶性质作了对比分析.研究结果表明,用EDC活化固定化脂肪酶,当缓冲液pH为7,加酶量达到30 mg,EDc浓度为0.2%,交联时间6 h,固定化脂肪酶最大比活力为26.1 U/mg蛋白、活力回收最高为65.5%.固定化酶的热稳定性、pH稳定性和重复使用稳定性都有较大提高.壳聚糖微球固定化酶合成油酸乙酯循环使用次数达6次,油酸乙酯转化率从66.4%降至26.5%.     

乙酸异戊酯高产菌脂肪酶的特性研究

以乙酸异戊酯高产菌株Loq-c为试验材料,从菌体中提取制备脂肪酶,研究其酶学特性,结果表明：该酶催化反应的最适温度在30 ℃左右,在40 ℃以下具有良好的热稳定性;催化体系的pH在6.0～7.0时,酶的相对活力和稳定性较高,而当pH≤4.0时酶表现得不稳定,酶活力低。金属离子Mg2+和Ca2+能明显促进酶的催化能力,Cu2+和Ag+能明显抑制酶的催化能力,Na+、K+和Zn2+对酶催化的影响不显著。正交试验结果表明,菌株Loq-c脂肪酶最佳酶活条件为：温度在30 ℃,pH值为7.0,Mg2+浓度为5.0 mmol/L。在此最佳条件下,酶活力高达535.8 U/mL。     

造纸用碱性脂肪酶的固定化研究

利用改性壳聚糖微球对脂肪酶进行固定化处理,以实现造纸过程中碱性脂肪酶的回收利用,详细考察了固定化脂肪酶的酶学性质。研究结果表明,利用先进行碳二亚胺盐酸盐(EDC)活化然后进行戊二醛交联壳聚糖微球的方法固定化脂肪酶,可使固定化脂肪酶的酶活和蛋白质含量达到最高,其酶活可达到64.6 U/g,蛋白质含量为253.7μg/g,比酶活可达254.6 U/mg。经过固定化后,脂肪酶的最适反应温度由50℃升至55℃,最适pH值由7.5升至8.5。脂肪酶操作稳定性得到明显提高,固定化脂肪酶连续使用5次后其酶活仍保持在70%。     

沙蒿胶磁性微球固定化脂肪酶及部分理化性质的研究

以沙蒿多糖-壳聚糖复合磁性微球为载体,采用物理吸附法固定化脂肪酶,对固定化过程中对酶活力有影响的各种因素做了研究,同时对固定化酶的部分理化性质、最适pH、最适温度、酶的热稳定性以及表现米氏常数与游离酶做了比较.固定化酶的Km小于游离酶的Km,其最适pH和最适温度分别为8.0和50℃,而且固定化脂肪酶具有良好的热稳定性、可应用性和重复使用性.     

根霉凝乳酶的分离纯化及其酶学特性研究

采用70%乙醇对凝乳酶进行粗提,回收率为52.65%.采用DE-52和Sephadex G-75柱进行纯化,经冷冻干燥成酶粉,其活力1813.74 U/mg,回收率为11.25%.该酶的最适反应pH为5.7,在pH 5～7.5范围酶活力保持稳定;最适反应温度45℃,60℃保持20min,酶完全失活.Ca2+、Fe2+、Mg2+、Cu2+、Zn2+、Al3+对该酶的活力有不同程度的促进作用,其中以Al3+和Ca2+的促进作用最显著,Na+和K+对该酶的活力有抑制作用.通过SDS-PAGE测定,该酶的分子质量约35kDa.     

新型磁性纳米粒子固定脂肪酶的研究

用无皂乳液聚合制备了P(AM-co-St)一Gb(Ⅲ)磁性高分子纳米微球,在此基础上通过共价键合固定脂肪酶.结果表明:固定脂肪酶后的磁性纳米微球具有优异的磁分离能力;钆离子对固定化酶有明显的激活作用,当钆离子质量分数为1.4%时,偶联率和活力回收率分别提高88%和71%;脂肪酶被固定化后其pH值稳定性、操作稳定性均比自由酶明显提高.     

气单胞菌属JH菌株脂肪酶酶学特性的研究

从JH菌体中提取脂肪酶,并在不同的反应条件下对其酶学性质进行研究。该脂肪酶最佳反应温度和缓冲液pH制分别为40℃和7．0。该酶具有较强的热稳定性和pH稳定性：经过30℃、40℃处理60rain仍然保持90％以上的酶活;用pH3．5～9缓冲液处珲该酶,仍然保持80％以上的酶活。Ca2＋、Mg2＋对该脂肪酶具有明显的激活作用,尤其是Mg2＋作用最为显著,与对照组相比提高了38．8％,Zn2＋、Fe2＋对该脂肪酶有显著的抑制作用,Cu2＋对脂肪酶的影响不显著。用双倒数法作图得到Vmax=2．13×10^-2mol／L,Km=0．639（mmol／mL）min-1。表面活性剂吐温-80对脂肪酶有促进作用。该菌株产生的脂肪酶町以往温和的反应条件下作用。     

嗜酸乳杆菌胆盐水解酶的分离纯化及酶学性质

对嗜酸乳杆菌La-XH1产生的胆盐水解酶进行分离纯化,并对其部分酶学性质进行研究。结果表明：嗜酸乳杆菌La-XH1胆盐水解酶的粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose CL-6B柱层析后的酶比活力分别为47.82 U/mg和115.85 U/mg,纯化倍数分别为4.46 倍和10.82 倍,酶的回收率分别为59.89%和25.11%;通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）电泳分析,该酶的分子质量约为43 kD,最适温度为40 ℃,最适pH值为6.0,Fe3+、Ca2+、Mg2+、Mn2+、Zn2+对该酶有激活作用,其中Fe3+的激活作用最强,Na+、K+对该酶几乎无作用,而Cu2+、Ba2+对该酶有很强的抑制作用。     

海洋葡甘聚糖酶菌株的分离鉴定及酶学性质研究

以海泥和海水为样品,采用稀释涂布平板法初筛、摇瓶发酵复筛,得到一株葡甘聚糖酶高产菌Q1,测得酶活为187.68 U/mL。通过形态学、生理生化特征及16S rDNA序列分析,鉴定菌株Q1为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),其所产酶最适作用温度为35 ℃,热稳定性较差;最适作用pH值为6.0,碱性条件下,pH稳定性较差;Cu2+、Fe2+、乙二胺四乙酸(EDTA)对该酶抑制性较强,Mg2+对该酶抑制性较弱,NH4+对该酶的活性影响不明显,Na+对该酶激活作用较弱,Mn2+对该酶激活作用较强。该酶只在外源诱导物存在时,才能大量合成,说明该酶是诱导酶。     

山杏黄色素的提取及稳定性研究

本文对山杏黄色素的提取及稳定性进行了系统研究,结果表明:山杏黄色素的最大吸收波长λmax=450nm,最适宜的提取剂为乙醇,最佳的提取条件为:提取剂浓度为70%,提取剂pH为4,提取温度为60℃。该色素耐光、耐热,抗氧化、抗还原性强,常用的食品添加剂蔗糖、食用香精、VC以及浓度小于0.1%的金属离子Mg2+、Al3+、Ca2+、Cu2+、Fe3+等对色素无明显影响。     

Penicilium expansum PED-03固态发酵产脂肪酶及酶学性质研究

利用Penicilium expansum PED03固态发酵产脂肪酶,选用麸皮为碳源、豆粕为氮源,m(麸皮)/m(豆粕)比为1∶4,适宜含水量为50%(V/W),在24℃下发酵4d,脂肪酶活力可达1596U/g。该酶的最适温度为35℃,在50℃以下较为稳定;最适pH值为9.5,在pH6.0～10.0范围内有明显的催化活性;适宜浓度的Na+、Ca+2、Mg+2对酶反应有促进作用,而Cu2+、Fe2+和Mn2+等对酶反应有不同程度的抑制作用。利用P.expansumPED03脂肪酶在非水相中对外消旋烯丙醇酮(4羟基3甲基2(2烯丙基)2环戊烯1酮,allethrolone)进行酶法拆分,35℃反应36h时转化率(C)可达理论值的96%,产物的对映体过量值(eep)可达99%,显示了良好的应用潜力。     

醋酸菌中乙醛脱氢酶的分离纯化及酶学性质

以实验室筛选得到的醋酸菌(Acetobacter pomorum)为实验菌株发酵产酶,通过细胞破壁,采用(NH₄)₂SO₄沉淀、透析、DEAE-Sepharose 离子交换层析及 Superdex G-75凝胶过滤层析分离纯化得到乙醛脱氢酶的酶液,并考察其酶学性质。该酶分子质量为221.60 kDa,单个亚基分子质量约为54.41 kDa,为四聚体结构;纯酶液比活力20.25 U/mg,纯化倍数为10.16倍,乙醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase,ALDH)的回收率为6.53%。酶学性质研究表明,ALDH促进乙醛分解的最适温度为50 ℃,40~50 ℃相对酶活力稳定性好;该酶的最适pH为7.0,当pH在5.5~7.5内酶活力表现稳定;金属离子对酶活性的影响实验表明,Na+、K+、Zn2+、Ba2+对该酶酶有不同程度抑制作用,而Mg2+、Ca2+、Al3+、Li+、Cu2+具有促进作用;ALDH的最适底物为乙醛,相对偏好直链醛类。ALDH活性较大,为后期表达和深入研究其生物学功能提供理论和数据支持。     

海洋低温淀粉酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质研究

以大连黄海海泥和海水为样品,采用稀释涂布平板透明圈法初筛、摇瓶发酵复筛,得到一株淀粉酶高产菌ZXS-5,测得酶活为6.25 U/mL。通过形态学、生理生化及16S rDNA序列鉴定,菌株ZXS-5为荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）。该酶的最适作用温度为25 ℃,酶的热稳定性相对较差;最适作用pH值为8.0,属于碱性酶,该酶在酸性条件下稳定性较差;Ba2+、Cu2+、乙二胺四乙酸（EDTA）对该酶抑制性较强,Fe2+、Zn2+、Mn2+对该酶的活性影响不明显,Mg2+、Na+对该酶激活作用较弱,Ca2+对该酶激活作用较强。