酶解改性对大豆蛋白抗原性的影响研究

大豆蛋白营养价值很高,但其是八大类食物过敏原之一,会对过敏人群造成危害,而酶解是一种较好的蛋白改性方法。选用风味蛋白酶处理大豆分离蛋白,采用间接竞争ELISA法测定酶解产物中β-伴大豆球蛋白的抗原性,并利用响应面法优化最佳酶解条件。结果表明,风味蛋白酶可以显著降低β-伴大豆球蛋白的抗原性,且其抗原性与水解度具有负相关关系。风味蛋白酶在酶解时间30 min、加酶量1 500 U/g、温度60℃、p H 6.5条件下,酶解产物中β-伴大豆球蛋白抗原抑制率达到最低,为21.79%,比大豆分离蛋白降低了76.60%。SDS-PAGE结果表明,风味蛋白酶能够将β-伴大豆球蛋白酶解成低相对分子质量的肽段,从而降低其抗原性。     

热处理对β-伴大豆球蛋白结构及免疫活性的影响

以脱脂豆粉为原料,利用碱溶酸沉法分离提取β-伴大豆球蛋白,采用间接竞争ELISA法测定不同温度、加热时间、反应浓度下β-伴大豆球蛋白的抗原性变化,并对热处理后产物的溶解度、免疫原性及结构特性进行分析。结果表明:热处理能显著影响β-伴大豆球蛋白的抗原性。热处理后,样品蛋白的溶解度随温度升高呈先上升后下降的趋势。免疫印迹结果显示:热处理后β-伴大豆球蛋白的免疫原性有一定程度的降低,但不能完全消除。傅里叶红外光谱结果表明:热处理之后样品蛋白中的α-螺旋和β-折叠的含量减少,β-转角含量和无规则卷曲含量增加。     

β-伴大豆球蛋白鼠源多克隆抗血清的制备及其免疫学特性鉴定

用抗原免疫动物获取血清是常规的抗体制备方法。β-伴大豆球蛋白作为大豆蛋白中最主要的致敏蛋白之一,制备相关抗体是建立其免疫学快速检测方法的基础。将提取的天然β-伴大豆球蛋白与弗氏佐剂混合,乳化后皮下多点注射Balb/c小鼠,每3周加强免疫1次,免疫后第10天对所制备多抗血清的免疫学特性进行鉴定。结果表明,5次免疫后6只小鼠多抗血清效价均达1∶6 400以上,其中6号小鼠的多抗血清敏感性最强,其半数抑制浓度IC50为718 ng·mL-1。此多抗血清与芝麻蛋白、麦胚球蛋白无交叉反应,与花生蛋白、大豆球蛋白交叉反应率低于10%。本试验成功制得了效价高、敏感性强、特异性好的鼠源多抗血清。     

β-伴大豆球蛋白的分离纯化及免疫活性鉴定

β-伴大豆球蛋白是7S球蛋白的主要成分,是重要的大豆贮藏蛋白。利用等电点沉淀、分级盐析和凝胶过滤分离纯化大豆中的β-伴大豆球蛋白。SDS-PAGE和免疫印迹的结果表明,所提取的β-伴大豆球蛋白纯度较高,可以与β-伴大豆球蛋白抗血清特异性结合,具有较好的免疫活性。     

使用Mg^2＋取代Ca^2＋对大豆球蛋白及伊伴球蛋白进行分级与表征

使用一种简单的两步沉淀方法研究了Mg^2＋和Ca^2＋对大豆球蛋白及β-伴球蛋白级分分级的影响,并对所得产品的某些理化性质进行了表征．结果表明,加入5mM Mg^2＋是优化的条件;使用5mM Mg^2＋得到的大豆球蛋白和β-伴球蛋白级分的植酸含量分别是0．4％和1．3％;加入5mM Ca^2＋却使球蛋白级分植酸含量较高,为1．3％;植酸-镁复合物要比植酸-钙复合物的溶解性要高许多;使用Mg^2＋所获得的β-伴球蛋白级分的热稳定性获得了提高,使用Mg^2＋得到的富含球蛋白的级分的可溶性在pH〈4．5下显著高于使用Ca^2＋得到的相应级分．排阻色谱（SEC-HPLC）实验结果表明高植酸含量会引起球蛋白的聚合．     

大豆球蛋白兔源多克隆抗血清的制备及其免疫学特性鉴定

为建立大豆球蛋白致敏原检测方法和蛋白致敏性亚基的表位定位,从脱脂豆粉中分离纯化大豆球蛋白,制备多克隆抗血清,并进行免疫学特性分析。大豆球蛋白等电点pH值为6.4,采用碱溶酸沉法对大豆球蛋白进行粗提,用Sepharose CL-6B层析纯化大豆球蛋白粗提物,用SDS-PAGE检测蛋白纯度,免疫新西兰兔制备多抗血清,并对血清进行免疫学特性鉴定。结果表明:1号兔效价达到1∶6×10^4,由间接竞争ELISA抑制曲线可知,半数抑制率IC50为527 ng/mL,1号兔的多抗血清敏感性最高。特异性测定结果表明,该多抗血清除了与β-伴大豆球蛋白和花生蛋白的交叉反应率为8.6%和4.6%,与其他蛋白交叉反应率均小于0.2%。制备的兔源多抗血清效价高、敏感性强、特异性好,为大豆球蛋白单克隆抗体的制备及大豆蛋白致敏性亚分子结构的定位奠定了基础。     

黑豆7S球蛋白提取工艺及抑制淀粉酶特性研究

为探究黑豆中7S球蛋白在抑制α-淀粉酶活性方面的作用,采用碱提酸沉法提取黑豆7S球蛋白,运用Box-Behnken响应面试验优化提取工艺,并探究其在温度及酸碱度等方面的稳定特性。结果表明：在提取液料比13∶1(mL/g)、pH 4.8、氯化钠浓度0.16 mol/L条件下,黑豆7S球蛋白对α-淀粉酶的抑制效果最好。该蛋白为热敏性蛋白,30～60℃时对α-淀粉酶有良好的抑制活性,pH 3～9时具有较好的酸碱耐受性。7S球蛋白质量浓度为0～20 mg/mL时,对α-淀粉酶的抑制率表现出线性正相关性;淀粉质量浓度对α-淀粉酶抑制活性的影响不大,这可能跟黑豆7S球蛋白对α-淀粉酶的抑制类型有关。黑豆7S球蛋白可作为一种天然活性物质用于抑制淀粉酶活性方面的研究。     

高压均质与酶法联合改性对大豆蛋白抗原性及结构的影响

大豆蛋白营养价值高应用广泛,但是引发的过敏反应会给人体带来危害,高压均质和酶解联合处理是一种比较有效的改性方法。大豆分离蛋白经不同的高压均质条件处理后利用碱性蛋白酶和中性蛋白酶进行复合酶解。结果表明:高压均质联合酶解能显著降低大豆主要抗原蛋白的抗原性。ELISA结果表明高压均质联合酶解处理后β-伴大豆球蛋白的抗原抑制率降低了44.38%,大豆球蛋白的抗原抑制率降低了19.93%;傅里叶红外结果表明处理后的样品二级结构中α-螺旋含量减少、无规则卷曲含量增加;表面疏水性结果表明大豆蛋白的空间结构发生改变,蛋白质的三、四级结构被破坏。蛋白质氨基酸序列及空间结构的改变能够引起抗原表位的隐藏或掩盖进而影响抗原性。     

大豆球蛋白吸附在空气-水界面上的流变学研究

采用轴对称滴形分析法研究了大豆球蛋白吸附在空气-水界面上的界面流变特性，主要检测了在有代表性的浓度和pH值条件下其表面张力和表面膨胀特征参数随吸附时间的变化。试验表明，随着吸附时间的延长，大豆球蛋白吸附在空气-水界面上的表面张力降低，膨胀模量增大而相角减小，这主要与蛋白质在界面上的吸附、展开和（或）蛋白质间的相互作用有关。大豆球蛋白在空气-水界面上的吸附随着初始体相蛋白浓度的增加而加快，受体相pH值的影响很大。从流变学的角度分析，大豆球蛋白吸附到空气-水界面上所形成的粘弹性的吸附膜实际上是弹性的。     

超高压处理对β-伴大豆球蛋白抗原性及结构的影响

探究超高压处理对β-伴大豆球蛋白抗原性及结构的影响,为大豆蛋白的脱敏提供方法。通过等电点冷沉法提取β-伴大豆球蛋白,设置不同的超高压条件对β-伴大豆球蛋白进行处理,利用免疫印迹法(Western-Blot)与ELISA法分析β-伴大豆球蛋白的免疫活性,通过SDS-PAGE、傅里叶变换红外光谱(FTIR)与荧光光谱表征β-伴大豆球蛋白的结构变化。结果表明:超高压处理能够显著改变β-伴大豆球蛋白的抗原性和结构。400 MPa超高压处理能最大程度地降低β-伴大豆球蛋白的免疫活性,且蛋白质二、三级结构发生显著变化,α-螺旋与β-转角含量下降,无规则卷曲和β-折叠含量上升,大量疏水性区域暴露。超高压处理改变了β-伴大豆球蛋白的空间结构,可能破坏或掩盖原有的抗原表位,进而降低抗原性。     

以大豆分离蛋白为壁材制备α-亚麻酸乙酯微胶囊的工艺研究

以大豆分离蛋白为壁材,α-亚麻酸乙酯为芯材,在单因素试验基础上,利用响应面法对α-亚麻酸乙酯微胶囊化的工艺进行优化.选取试验因素与水平,依据回归分析确定各工艺条件的影响,以微胶囊包埋率为响应值作响应面和等高线.在分析各个因素的显著性和交互作用后,得出微胶囊化的最佳工艺条件为:固形物含量10%、芯壁比1∶2、喷雾干燥进口温度168℃.在此条件下,α-亚麻酸乙酯微胶囊的包埋率为52.62%.     

用响应面法优化碱性蛋白酶制备生物活性大豆肽的条件

深入研究了地衣芽孢杆菌20203产碱性蛋白酶水解大豆分离蛋白制备大豆肽,分析了底物浓度、温度、酶浓度和时间对水解度的影响.在单因素试验的基础上,采用4因素3水平的响应面分析法,以大豆蛋白的水解度为响应值,对影响大豆分离蛋白水解度的因素进行研究分析,得到了最佳水解条件为:加酶量10 000 u/g,时间6h,pH值9.5,温度55℃.此条件下水解度为17.35％.     

菠萝蛋白酶水解醇法大豆浓缩蛋白的研究

用菠萝蛋白酶对醇法大豆浓缩蛋白进行酶法改性,提高醇法大豆浓缩蛋白的溶解性.在单因素分析的基础上采用响应面分析方法对酶解条件进行优化,酶解的最佳条件为pH6.5,反应温度48℃,底物浓度6%,加酶量607 U/g.此条件下水解4 h,水解度可达11.07%.     

β-乳球蛋白IgG抗原决定簇的识别

以β-乳球蛋白氨基酸序列为模板,错位合成β-乳球蛋白多肽,以收集到的牛乳过敏患者血清为抗体,鉴定β-乳球蛋白IgG抗原决定簇,探讨牛乳过敏机理．结果表明,β-乳球蛋白IgG抗原决定簇有2条,它们在β-乳球蛋白中的氨基酸序列定位分别为aa22—36和aa127—141．结果表明通过特异性水解抗原决定簇实现牛奶脱敏的方法是可行的．     

活性炭对β-丙氨酸生物转化液脱色效果研究

用活性炭为脱色剂,以透光率、β-丙氨酸吸附率及综合指标为考察指标,通过单因素试验和正交试验,研究不同奈件(料液初始pH值、活性炭质量浓度、温度及作用时间)下活性炭作用于β-丙氨酸转化液的脱色规律,为活性炭处理生物料液提供一定的科学依据.试验结果显示:pH3.0时,透光率达到56.66%,β-丙氨酸吸附率为13.56%.β-丙氨酸转化液最佳活性炭脱色工艺条件:温度为60℃,活性炭投入量为0.03g/mL,脱色时间60 min,在此条件下透光率达到60.20%;β-丙氨酸吸附率最小,为12.66%,综合指标比值为476%.     

响应面法提取景天三七β-谷甾醇的工艺研究

以景天三七为原料,采用紫外-可见吸收光谱法分析β-谷甾醇的含量,以β-谷甾醇提取率为指标,分别研究了乙醇浓度、液料比、超声时间、超声温度对景天三七中β-谷甾醇得率的影响.通过响应面实验优化了提取工艺,最佳提取工艺条件是乙醇浓度90%,液料比12 1 m L/g,超声温度为55℃,超声时间19 min,景天三七中β-谷甾醇的提取率为0.152%.此提取工艺可为工业提取β-谷甾醇提供一定的依据.     

大豆球蛋白间接竞争ELISA检测方法的建立

建立了大豆球蛋白间接竞争酶联免疫检测法(ELISA),为食品中主要的大豆蛋白过敏原的检测提供技术基础.以纯品大豆球蛋白免疫新西兰大白兔,自制得到兔抗大豆球蛋白的多克隆抗体,并以大豆球蛋白包被抗原、自制抗体作为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为酶标二抗,四甲基联苯胺(TMB)显色液为底物,建立了大豆过敏原中大豆球蛋白的间接竞争ELISA检测方法.确定了抗原的包被浓度为0.025μg/mL,一抗最佳稀释度为1∶3 200,酶标二抗稀释度为1∶10 000.检测结果达到板内误差3.82%,板间误差10.22%,在允许的误差范围之内;其检测的线性范围为0.01~0.05μg/mL.结果表明本试验所建的大豆球蛋白间接ELISA方法具有一定的重复性和灵敏度,可用于大豆蛋白制品过敏原的检测.     

水溶性大豆多糖对酸性花生蛋白溶液稳定性影响

以实验室自制的水溶性大豆多糖（SSPS）为原料,研究其在酸性环境下对花生蛋白溶液稳定性影响。本实验选取水溶性大豆多糖添加量、花生蛋白浓度、pH值和蔗糖添加量4个因素进行研究。通过单因素和正交实验,得出最佳工艺为：花生蛋白质量分数为1.5%,pH值为4.0,蔗糖质量分数为10%时,水溶性大豆多质量分数为0.40%。在此条件下,酸性花生蛋白溶液稳定性良好。     

双酶酶解11S球蛋白的工艺优化研究

以大豆分离蛋白为原料,采用等电点冷沉法提取11S大豆球蛋白,选用碱性蛋白酶、胃蛋白酶对11S大豆球蛋白进行双酶酶解。以水解度为指标,考察酶添加量、温度、p H和时间对酶解液水解度的影响,通过单因素试验和正交试验得到最佳水解工艺条件。在单酶水解的基础上,组合碱性蛋白酶和胃蛋白酶,按照分步水解的方式对11S大豆球蛋白进行复合酶解,得到的最优参数为:胃蛋白酶在温度35℃、p H 3.0、酶添加量1 500 U/g的条件下水解1 h,碱性蛋白酶在温度50℃、p H 10、酶添加量12 000 U/g的条件下水解5 h,得到的11S球蛋白酶解物水解度为19.65%,比碱性蛋白酶单酶水解时高14%。     

应用分子对接方法筛选桑椹红色素微胶囊壁材

基于分子对接方法,对桑椹红色素微胶囊壁材的选择进行研究。采用对接评分和氢键评价候选蛋白质与桑椹红色素主要成分矢车菊素3-O-(6″-O-α-鼠李糖基-β-半乳糖苷)的结合能力,对筛选出的蛋白质,通过实验验证其用作桑椹红色素微胶囊壁材的适宜性。主要结果如下:大豆蛋白（大豆球蛋白和大豆H-2铁蛋白）与矢车菊素3-O-(6″-O-α-鼠李糖基-β-半乳糖苷)的结合能力强于鸡蛋蛋白（未裂解卵清蛋白和S-卵清蛋白）和牛奶蛋白（α-乳清蛋白和β-乳球蛋白）;以大豆分离蛋白与β-环糊精为壁材的微胶囊,桑椹红色素的包埋率随大豆分离蛋白的比例增加而增加;适宜工艺参数为大豆分离蛋白和β-环糊精质量比8∶2、芯材壁材质量比1∶10;按此制备的桑椹红色素微胶囊,在500、250 nm分辨率下的显微图像中具有完整的包合结构,对热、光的稳定性明显提高。分子对接方法在筛选食品与药品原辅料方面具有可行性和应用潜力。