Rhizopus chinensis 12^#发酵产生纤溶酶的分离提纯

分离自南方小酒药的华根霉12^#(Rhizopus chinensis 12^#)以豆粕和麸皮为原料固体发酵可产生多种纤溶活性组分．采用饱和度40％--70％的硫酸铵溶液分步盐析、Octyl Sepharose Fast Flow疏水层析、Q-Sepharose High Performance离子交换层析和Sephacryl S-100凝胶层析方法对活性组分进行分离提纯，得到电泳纯的纤溶酶．SDS—PAGE方法测定该酶相对分子质量为18 000，凝胶过滤方法测定相对分子质量为16 600，表明该酶由单亚基组成。     

大蒜中硫代亚磺酸酯的提取工艺

硫代亚磺酸酯是大蒜中的活性成分，由大蒜中非蛋白质氨基酸——蒜氨酸(alliin)经内源酶蒜氨酸酶(alliinase，蒜氨酸裂舍酶，EC4．4．1．4)的酶解作用而生成．作者采用溶剂法以温和的条件提取大蒜中硫代亚磺酸酯，研究了乙醇提取前的酶解过程以及乙醇提取中各因素对硫代亚磺酸酯提取率的影响，采用响应面分析得到醇提硫代亚磺酸酯的最佳工艺条件．     

从乳化体系中分离纯化短杆菌产胆固醇氧化酶

添加剂W对酶的分离纯化造成很大困难，用异丙醇沉淀发酵液的同时加入(NH4)2SO4能够有效地破除乳化体系，去除添加剂W，酶收率达到90％，在pH值为8．0的条件下用Sepharose DEAE Fast Flow离子交换透析酶液，比酶活从3．21U／mg提高到29．21U／mg，酶收率达70．1％。     

白头翁皂苷糖苷酶的纯化及其酶学性质

本实验对由Absidiasp.B00菌产的白头翁皂苷糖苷酶进行了分离纯化,得到了电泳纯酶蛋白,并对该酶的酶学性质进行了研究。结果表明,该酶的分子质量约为79 ku,酶反应的最适pH和温度分别为5.0和40℃,在40℃以下,pH 3.0~7.0条件下稳定性较好;金属离子Na+、K+、Mg2+、Ca2+对酶反应的影响不大,而Fe3+、Zn2+、Cu2+对其有很明显的抑制作用;酶反应动力学研究表明,vmax=0.16 mmol/(L.h),km=7.17 mmol/L。     

大肠杆菌表达的重组新蛭素的生产工艺

为建立可产业化的大肠杆菌表达的重组新蛭素(neorudin,EH)生产工艺,主要采取从低密度到高密度发酵的优化思路,优化了发酵罐培养基和诱导时间;比较了超声破碎和反复冻融的目的蛋白提取方法;纯化工艺采用离子交换层析2步法进行:SP Sepharose Fast Flow阳离子交换层析和Source 15Q阴离子交换层析;所得产品用免疫印迹法鉴定,经HPLC检测纯度,凝块法检测抗凝比活性;最后对纯化产品进行结构确证,包括高分辨率质谱、C-末端测序、N-末端测序、二硫键分析.结果显示:优化后的发酵工艺确定基于TB培养基的高密度发酵工艺,菌体OD600可达40左右,每升菌体湿质量可达70 g左右,目的蛋白表达量约400 mg/L;菌体反复冻融离心上清经过纯化获得的目的蛋白HPLC纯度均大于97％,纯化收率为26.12％,抗凝比活性为1 024 ATU/mg,用高分辨率质谱检测其分子质量约为7 415.188 0 ku,N-末端、C-末端和二硫键均与理论相符.建立了EH在大肠杆菌中的高密度发酵和纯化工艺.     

白头翁皂苷H3糖苷酶的分离纯化及酶性质

对Absidiasp.P39r所产白头翁皂苷H3糖苷酶进行了分离纯化,得到了电泳纯的酶蛋白,并对其性质做了进一步研究。结果表明,该酶分子质量约为40ku;最适反应温度为40℃,最适反应pH为5.0;在pH 4.0~7.0,温度低于40℃条件下具有相对稳定的酶活力;金属离子Na+、K+、Mg2+对酶反应无显著影响,而Fe3+、Cu2+、Zn2+对其有较强的抑制作用;米氏常数为17.01mmol/L,最大反应速度为0.38mmol/(L·min)。     

G8r菌产人参皂苷糖苷酶的酶性质及酶水解作用

对由Absidia sp.G8r菌产的人参皂苷糖苷酶(Glc8)进行了分离纯化,并对其酶性质和酶水解作用进行了研究.结果表明,该酶的分子质量约为72 ku,酶反应的最适温度和pH分别为30 ℃和5.0,在20～60 ℃、pH 3.0～7.0条件下稳定性较好.该酶水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷C-K,水解过程是分步进行的...     

不同温度下GS0202菌产酶差异的研究

利用电泳法及DEAE-Cellulose DE-52离子交换柱层析法对Arthrobacter chloropHenolicusGS0202菌分别在20和60℃下培养时产两种不同的酶进行研究。结果表明,20℃下培养所产的酶能水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷F2,60℃下培养所产的酶能水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷Rg3;找到了4条差异蛋白带,它们的分子质量分别约为66、47、35、22 ku;将60℃下培养得到的酶分离提纯,其纯酶的分子质量经电泳鉴定约为66 ku,与1号差异带的分子质量吻合。     

不同温度下GS0202菌产酶差异的研究

利用电泳法及DEAE-Cellulose DE-52离子交换柱层析法对Arthrobacter chloropHenolicusGS0202菌分别在20和60℃下培养时产两种不同的酶进行研究。结果表明,20℃下培养所产的酶能水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷F2,60℃下培养所产的酶能水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷Rg3;找到了4条差异蛋白带,它们的分子质量分别约为66、47、35、22 ku;将60℃下培养得到的酶分离提纯,其纯酶的分子质量经电泳鉴定约为66 ku,与1号差异带的分子质量吻合。     

两种人参皂苷糖苷酶的酶性质比较

利用DEAE-Cellulose DE52离子交换柱层析法及电泳法对由菌株Absidia sp.G8r在发酵培养中产生的人参皂苷糖苷酶(Glc8)和Absidia sp.G4r在发酵培养中产生的人参皂苷糖苷酶(Glc4)进行了分离纯化,并采用TLC法和分光光度计法对其酶反应条件和酶反应特性进行了比较.结果显示,两种酶的分子质量均在71～72 ku,最适酶反应pH是5.0,最适酶反应温度30 ℃,金属离子K+、Na+、Mg2+、Zn2+、Ca2+对酶反应的影响不大,Cu2+对人参皂苷糖苷酶有很明显的抑制作用.两种酶均具有专一性水解母环侧链末端的α-Gal、β-Glc键的特异性.实验结果表明,两种菌种产的两种人参皂苷糖苷酶是同一种人参皂苷糖苷酶.     

背散射谱学及其应用

在离子束与物质的相互作用的基础上建立起来的背散射谱学,近十多年来在理论和应用两方面都得到了很大的发展。背散射技术是现代材料科学中的无损伤探测的重要手段。本文对背散射谱学的基本概念和理论、实验方法和分辨率作了综合性的阐述,同时对此项技术在膜的厚度的测定、杂质     

X－射线荧光光谱法分析麦饭石及其浸出物成分

用Ｘ－射线荧光光谱（ＸＲＦ）法测定了山西某地麦饭石及其浸出物的成分，给出了ＸＲＦ测试条件。     

微乳液进样-火焰原子吸收光谱测定食用油中的钙

提出了以微乳液进样-火焰原子吸收光谱测定食用油中痕量钙的新方法.以OP-乳化剂为表面活性剂、正丁醇为助表面活性剂,以花生油、芝麻油为研究对象,优化了微乳液的形成条件及火焰原子吸收的测定参数.结果表明:V(油样)∶V(水相)∶V(OP-乳化剂)∶V(正丁醇)=1∶0.5∶0.6∶7.9时,能形成稳定的微乳液体系.以微乳液进样-火焰原子吸收光谱(标准加入法)测定花生油、芝麻油中的痕量钙,其回收率在96%~116%之间;采用微乳液进样的测定结果与干灰化法消化样品后的测定结果吻合良好.     

用荧光光谱法研究多元胶束络合物性质及反应机理

本文以DBPF-CTMAB-Pd三元体系为例,提出了用荧光光谱法研究多元胶束络合物性质及反应机理的新方法。利用荧光光谱,结合离子交换树酯实验,研究了溶液中胶束的电荷性质、荧光试剂的存在状态以及三元体系的反应机理。本文提出的新方法直观、简便、快速,可较广泛地应用于离子型表面活性剂所形成的胶束体系。     

面粉中砷和硒的微波消解-氢化物发生原子荧光测定法研究

用微波消解-氢化物发生原子荧光法对面粉中砷、硒的测定方法进行了研究.选定了最佳微波消解条件和测定条件,检出限As:0.23 ng/mL,Se:0.15 ng/mL,线性范围As:0～50 ng/mL,Se:0～20 ng/mL,线性系数大于0.999 3,回收率分别为砷94.3%～104.5%,硒89.6%～107.2%,RSD小于6%.该方法简便快速、灵敏准确.对市售小麦粉精粉和玉米面进行测定,结果满意.     

用三元络合物萃取-火焰原子吸收法测定食品中痕量镉

建立了一种测定食品中痕量镉的新方法.以茜素黄R和邻菲罗啉为螯合剂,以甲基异丁基甲酮为萃取剂,直接以有机相进样测定,提高了测定的选择性和灵敏度.考察了介质酸度、缓冲溶液及螯合剂的用量等对测定的影响,优化了测定条件.详细研究了常见元素对镉元素测定的干扰情况,用酒石酸钾钠做掩蔽剂,可以消除大量共存组分的影响.在最佳工作条件下,镉离子质量浓度在3.0×10-3 ～0.25 μg·mL-1范围内线性关系良好,方法的检出限为1.7×10-3 μg· mL-1,对0.2 μg· mL-1的镉标准溶液进行9次平行测定,相对标准偏差为1.1％,检出限低,重现性好.该法用于食品中镉的测定,结果满意.     

浊点萃取-火焰原子吸收光谱法测定大米样品中的痕量镉

以Triton X-114为表面活性剂,基于甲基绿(MG)与CdI42-形成疏水性离子缔合物的浊点萃取新体系.详细考察了pH值、KI及MG溶液浓度、Triton X-114体积分数等因素对浊点萃取的影响,建立了浊点萃取-火焰原子吸收光谱法测定大米样品中痕量镉的新方法.在最佳条件下,该法检测限(3σ)为0.90 ng/mL,相对标准偏差RSD为4.2%(c=50.0 ng/mL,n=7).将该法成功应用于大米样品中痕量镉的测定,其回收率在91.0%~107.0%.     

采用分散固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定鹌鹑蛋及肉中多种喹诺酮类药物残留

应用分散固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱建立鹌鹑蛋及肉中22种喹诺酮类药物残留的检测方法。样品经过酸化乙腈提取,以氨丙基硅胶为净化剂进行基质分散固相净化,经Acquity UPLC BEH Shield RP18(100 mm×2.1 mm,1.7μm)分离,以甲醇和0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,双通道MRM信号采集模式,22种喹诺酮类药物能在9 min内快速分离,方法的最低定量限均低于10.0μg/kg,在10.0~50.0μg/kg范围内,22种喹诺酮类药物线性良好,相关系数均在0.99以上;对10、20、50 g/kg 3个水平的加标回收试验表明,鹌鹑蛋中喹诺酮类药物残留的回收率在60.3%~113%,RSD值为0.750%~12.7%,鹌鹑肉中喹诺酮类药物残留的回收率在64.9%~111%,RSD值为0.450%~10.1%。该方法前处理简单,结果准确可靠,能全面筛查和确证鹌鹑蛋及肉中多种喹诺酮类药物残留,对防范非法添加,保障消费者食品安全具有一定的参考价值。     

稻谷中镉的石墨炉原子吸收测定方法优化及其分布

对GB/T 5009.15-2003中石墨炉原子吸收光谱测定法进行了优化,并对稻谷中镉的分布进行了初步分析.结果显示:石墨炉最佳升温程序为:干燥温度110℃,27 s;灰化温度300℃,20 s;原子化温度1 700℃,2 s;除残温度2 100℃,2 s.稻谷中,糙米皮层镉含量最高,糙米次之,标一米略低于糙米,稻壳最低.     

全自动红外吸收鉴定法研究

本文利用红外光谱理论和计算机技术研究了一种全自动检测化学产品用料真伪的方法。