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枯草芽孢杆菌内切木聚糖酶的纯化与性质研究 总被引:5,自引:0,他引:5
建立了一种快速、简便分离纯化木聚糖酶的方法。采用活性聚丙烯酰胺凝胶电泳和均质提取法相结合 ,从枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)固态培养基发酵产物中分离得到了 2种内切木聚糖酶 ,分别定义为xylⅠ和xylⅡ ,它们水解桦木木聚糖的主要产物有木二糖、木三糖和聚合度更高的木聚寡糖 ,没有木糖。SDS PAGE显示内切木聚糖酶xylⅡ为单肽链结构 ,分子质量为 98 8ku。内切木聚糖酶xylⅡ的酶反应最适温度为 5 0℃ ,酶反应的最适 pH为 7 0。Mn2 + 对xylⅡ酶反应具有促进作用 ,将酶活提高了 2 7倍 ,而Fe3+ 对该酶反应起完全抑制作用。 相似文献
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木聚糖酶是主要工业用酶制剂之一,在食品行业应用广泛.将编码枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis B2)木聚糖酶XYN的基因克隆到pPIC9K载体中,构建了分泌型表达载体pPIC9K-XYN,载体经线性化后转化Pichia pastoris GS115,G筛选获得了分泌表达XYN的重组毕赤酵母工程菌GS115/pPIC9K-XYN.初步研究表明:以山毛榉木聚糖为底物时,重组毕赤酵母工程菌摇瓶水平发酵上清液中木聚糖酶酶活可迭1542.6 U/mL,重组木聚糖酶最适温度为50℃,最适pH值为6.0,并显示出较好的热稳定性和宽pH适应性. 相似文献
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本文以小麦麸皮为原料,采用碱法和酶法制备阿魏酸,通过正交试验确定出制备阿魏酸的最佳工艺参数,碱液浸提法阿魏酸最高释放量为3.08mg/g麦麸,最优组合是碱液浓度为1%,温度为80℃,提取时间为4h,麸皮粒度为80目;酶法提取的最高释放量为3、35mg/g麦麸,最优组合是料液比1:20.混合酶浓度1%。混合酶作用时间3h。另外,碱处理后的反应液颜色为深棕色,褐变较为严重;混合酶处理后反应液颜色较浅。酶法提取效果较佳。 相似文献
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研究了不同的营养条件下短小芽孢杆菌WL-11产蛋白酶和木聚糖酶的情况。结果表明,碳源对WL-11木聚糖酶的合成具有诱导或抑制作用,对其蛋白酶的合成影响并不显著;氮源对WL-11木聚糖酶的合成不具有直接的调节作用,而可能通过调节其蛋白酶的合成量来间接影响其木聚糖酶的合成,且两者的合成量之间存在一定的正相关。 相似文献
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为获得适应于酒糟酸性环境的木聚糖酶,将内源微生物耐酸性环境的野生Bacillus velezensis P7木聚糖酶基因克隆到枯草芽孢杆菌WB800中,纯化后通过SDS-PAGE电泳显示出约40 ku的蛋白多肽。为增加枯草芽孢WB800-P7工程菌株在高密度发酵中细胞外分泌木聚糖酶的产量,进行诱导和培养条件优化,用正交试验分析得出温度对产酶影响最大,确定菌株分泌重组蛋白的条件结果表明:最佳诱导条件为OD600 0.8、IPTG 1.2 mmol/L,最佳发酵条件为pH 6.0、培养温度35 ℃、接种量2%、摇床转速160 r/min。在该条件下发酵16 h,经重复验证,酶活力达到4.21 IU,与优化前相比,酶活力提高了64.45%。并探究重组酶的耐受性,结果表明在强酸性到中性条件下(pH 5.0~7.0),其残余酶活力达到初始酶活力的80%以上。试验成功构建了木聚糖酶工程菌并较好表达蛋白,且重组木聚糖酶在酸性条件的耐受性良好。 相似文献
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枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis Promax NTG24发酵条件研究 总被引:5,自引:0,他引:5
本试验研究了不同碳源、氮源对B.subtilisProm ax NTG24产酶条件的影响。并运用正交设计确定了产酶培养基配方,同时还研究了溶氧、金属离子、起始pH值、菌龄与接种量对产酶的影响。研究表明,最佳产酶培养基为:2%玉米粉、1%甘油、3%豆粕粉、3%麸皮、0.4%Na2HPO4.12H2O、0.03%KH2PO4、0.25?C l2。Ca2 对产酶有强烈的激活作用,表面活性剂对产酶有激活作用但不明显。蛋白酶的生产对氧气需求比较严格,最适摇瓶装量为50mL/300mL。以24h菌龄接种量为3%对产酶最为有利,最佳起始pH为7.5。 相似文献
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木聚糖酶是主要工业用酶制剂之一,在食品行业应用广泛。将编码枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis B2)木聚糖酶XYN的基因克隆到pPIC9K载体中,构建了分泌型表达载pPIC9K-XYN,载体经线性化后转化Pichia pastoris GS115,G筛选获得了分泌表达XYN的重组毕赤酵母工程菌GS115/pPIC9K-XYN。初步研究表明:以山毛榉木聚糖为底物时,重组毕赤酵母工程茵摇瓶水平发酵上清液中木聚糖酶酶活可达1542.6U/mL,重组木聚糖酶最适温度为50℃,最适pH值为6.0,并显示出较好的热稳定性和宽pH适应性。 相似文献
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利用木聚糖酶直接酶解小麦麸皮,将酶解液浓缩后加入面粉,用面粉粉质和拉伸特性探讨酶解戊聚糖对面粉品质的影响,并用面包的烘烤失水量、比容、面包芯水分、质构等参数考察酶解戊聚糖对面包品质的影响。结果表明:木聚糖酶能酶解小麦麸皮中的水不溶性戊聚糖。酶解液对低筋粉的改善作用最明显,其中以料液比1:8(m:V),反应温度50℃,酶解时间90min,酶用量5mL/20g(酶液/麸皮,酶活400U/mL)的酶解液,在添加量为1.0%(以酶解液中含有的戊聚糖计,1g戊聚糖/100g面粉)时,对面粉和面包的品质改善效果最佳。 相似文献
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将来源于作者所在实验室构建保存E.coli p ET-20b(+)/CGT△E-CBMAmy的CGT△ECBMAmy基因插入6种含有不同信号肽(est A、bpr、vpr、ync M、yvg O和ywb N)的穿梭质粒p MA0911-SPs中,构建了6种重组表达载体并将其转入表达宿主B.subtilis WB600中,获得了6株重组菌。在相同的发酵条件下,est A信号肽介导的分泌效果最好,L-抗坏血酸2-葡萄苷产量达到0.81 g/L,明显高于其他5株重组菌。选取WBp MB/CGT△E-CBMAmy作为出发菌株,进行了摇瓶发酵条件优化,实现了CGT△E-CBMAmy酶的高效表达,最终使AA-2G产量提高了2.16倍,VC转化率达到21.9%。 相似文献
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枯草芽孢杆菌发酵小米糠对其抗氧化肽含量与抗氧化活性的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
为提高小米糠的附加值,本实验以多个枯草芽孢杆菌为起始菌株,透明圈直径与菌落直径之比(HC值)为初筛指标,通过酪蛋白平板培养法进行高产蛋白酶菌株的初步筛选。将初筛所获得菌株在小米糠基础培养基上进行发酵,对其发酵上清液的总蛋白酶活力、多肽含量及总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)进行测定,进一步筛选出最适菌株。用此菌株对小米糠进行发酵,并对其最适发酵时间及上清液的抗氧化活性进行测定。结果表明:NattoD-3为最佳发酵菌株,其产蛋白酶活力为90.22 IU/mL,发酵小米糠72 h时所获得发酵上清液4 种体外抗氧化活性相对最高,分别为T-AOC值38.04 U/mL、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率75.37%、总还原力0.18及Fe2+螯合能力44.34%,最终发酵上清液的多肽含量为4.28 mg/mL,纤溶酶活力为522.64 IU/mL。 相似文献
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一种枯草芽孢杆菌氨肽酶的纯化及酶学性质 总被引:3,自引:1,他引:3
利用乙醇分级沉淀(37.5%~60%)、SephadexG75凝胶过滤、Phenylsepharose6FF疏水色谱三步分离使一种枯草芽孢杆菌氨肽酶得到纯化,比活1.5567×106U/mg;SDSPAGE鉴定为纯酶,分子质量75ku,全酶含2个亚基。纯酶最适温度60℃,温度稳定范围20~70℃。最适pH8.5,pH稳定范围8.0~10.0。Zn2+、Ni2+有较大的抑制作用,Co2+则对酶活有较强的激活作用。酶活性中心可能结合了2个Zn2+,米氏常数Km为1μmol/L,最大反应速度Vmax为5000μmol/(L·min)。 相似文献
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用乙醇逐步沉淀和离子交换柱层析方法对麸皮中制备的水溶戊聚糖(WSP)和水不溶戊聚糖 (AEP)进行分级纯化 ,并对各组分的组成进行了分析 .结果表明 ,用乙醇逐步沉淀时 ,随着乙醇体积分数的增加 ,所得分级组分具有较高的分支 ;用离子交换柱层析时 ,WSP可分级为 2个组分 ,AEP可分级为 3个组分 ,并且用NaCl较H2 O洗脱的组分具有较高的分支和较高的相对分子质量 相似文献
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采用碱性蛋白酶Alcalase 水解麦麸蛋白制备麦麸多肽,利用SephadexG-25 和DEAE-32 对麦麸多肽进行纯化,醋酸纤维素薄膜电泳法测定麦麸多肽纯度,用硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验、脱氧核糖法检测其对超氧阴离子自由基(O2·)和羟自由基(·OH)的清除能力,分光光度法测定小鼠红细胞溶血和肝线粒体膨胀程度。结果表明,分离纯化的麦麸多肽对O2·和·OH 的清除率别为53.16%、62.39%,并且具有明显抑制氧化溶血现象和·OH 诱导线粒体肿胀的作用,说明麦麸多肽具有较强的抗氧化功能。 相似文献
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本研究采用硫酸铵分级盐析、交联葡聚糖凝胶分子层析(Sephadex G-75)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)等方法对生防菌枯草芽孢杆菌CF-3无菌发酵液对复端孢霉F中的主要抑菌蛋白进行了分离与鉴定。结果表明:CF-3无菌发酵液中抑菌蛋白的硫酸铵最佳沉淀饱和度为60%~70%,蛋白质沉淀量为149.03μg/mL,极显著高于其他浓度(p≤0.01);利用60%~70%饱和度的硫酸铵提取的粗蛋白质经Sephadex G-75凝胶柱层析后获得2个吸收峰,8管收集液,其中第2管峰收集液抑菌活性显著高于其他管(p≤0.05);将流分2收集液进一步分离纯化后,将抑菌效果最好的2.3号流分的两条蛋白条带割胶回收,利用生物质谱技术鉴定为γ-谷氨酰转肽酶和胞内丝氨酸蛋白酶,分子量分别约为42.5 ku和33.9 ku。以上结果可为该菌株及其抑菌蛋白的开发应用奠定基础。 相似文献