环糊精糖基转移酶的分离纯化及性质

一株产环糊精糖基转移酶的嗜碱芽孢杆菌发酵后离心得到的粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAD-Cellulose 50离子交换层析、Sepharose CL-6B凝胶层析得到电泳纯的酶，用SDS-PAGE测定酶的分子量为69kD。以马铃薯淀粉为底物时的Km为1.24mg/ml和Vmax114.9μg/min,酶反应的最适温度为60℃，最适pH值为5.0，在pH6.0—10.0 范围内基本稳定，在70℃以下基本保持稳定。Ag 、Cu^2 、Mg^2 、Al^3 、Co^2、Zn^2 ,Fe^2 对酶活有明显的抑制作用，Sn^2 、Mn^2 对酶活力有一定的抑制作用，其它金属离了对酶活力没有影响。     

基因工程菌糖基转移酶的分离纯化与酶学性质研究

将含重组质粒pET28b-Val G在BL21(DE3)宿主菌中成功表达,以镍柱亲和层析、超滤脱盐及真空冷冻干燥结晶获得糖基转移酶并初步研究酶学性质。在10~40°C或pH 5~11下,该酶还能保持较好的稳定性,且最适反应温度及p H分别为30°C与8.0。1 mmol/L金属离子Ca2+、Mg2+、Mn2+、Co2+对酶反应有着显著的促进作用,而Cu2+、Zn2+对酶反应有强烈的抑制效果。当酶反应进程中酶活达到最大时,底物及产物的最适浓度分别为8μmol/L与2μmol/L。以底物井冈羟胺A足量为前提,双倒数作图法表明Km B为35.275μmol/L,Vm为0.153μmol/(L·min),酶对井冈羟胺A的亲和力较尿苷二磷酸葡糖(UDPG)好,因此在全细胞酶催化过程中对提高UDPG供应量的研究是有必要的。     

离子交换树脂分离纯化谷胱甘肽的研究

研究001×7阳离子交换树脂分离纯化谷胱甘肽的工艺条件,考察了001×7阳离子交换树脂对GSH的静态吸附量,以及洗脱时,洗脱液,洗脱浓度,洗脱流速等对分离纯化产品GSH的影响。确定其工艺流程;最适上柱pH为2．5,洗脱液NaC1溶液最适洗脱浓度为1．2％,洗脱流速为2．0ml／min;收集洗脱液,用紫外分光光度法检测其GSH的浓度,回收率为75％,纯度相对提高60％。     

大米淀粉的纯化及性质研究

通过碱洗法和酶法纯化大米蛋白和大米淀粉分离过程中产生的纯度不高的淀粉，结果表明酶法去大米淀粉中的蛋白优于碱法，采用碱性蛋白酶纯化大米淀粉的最优工艺参数为：时间2h，温度60℃，料液比1：6，加酶量0．4％。对大米淀粉脱脂的研究表明溶剂法脱脂比胰脂肪酶脱脂效果好。酶法去蛋白的大米淀粉与未纯化淀粉比较糊化初始温度上升，峰值粘度下降，超微结构显示其淀粉粒结构部分被破坏。脱脂则使糊化初始温度和峰值粘度均下降。     

纳豆激酶的纯化及性质研究

从固态发酵培养的纳豆中提取纳豆激酶 ,采用盐析、疏水层析、离子交换层析等方法 ,对提取液进行纳豆激酶的分离纯化。经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定 ,活性酶蛋白为单一组分 ,并测得其分子质量为 2 8ku。纳豆激酶在pH5 0～ 1 0 0 ,4～ 3 7℃范围内具有较好的稳定性 ,其纤溶活性可被 0 1mmol/L的PMSF完全抑制。体外溶栓实验表明 ,纳豆激酶为纤溶酶而不是纤溶酶原激活剂。     

玉米超氧化物歧化酶的纯化及性质研究

从玉米胚芽提取得到的SOD粗酶液,经硫酸铵分级沉淀、DE-52纤维素柱层析和Sephadex G-75层析法分离纯化,得到纯的玉米SOD,比活为3 583.3 U/mg蛋白,纯化倍数为61.4.经鉴定,玉米SOD为Cu,Zn-SOD,Cu和Zn离子含量之比约为1∶5,在260nm处有最大吸收峰.用SDS-PAGE测得SOD亚基分子量为18 800,玉米SOD分子量为37 600.实验表明,玉米SOD在50℃以下热稳定性较好,在pH 7～8较稳定.     

有机溶剂纯化谷胱甘肽方法初探

利用有机溶剂沉淀法，分离除去细胞抽提物中的蛋白等大分子物质，达到初步纯化谷胱甘肽的目的。经试验所得的最佳条件是：料液浓度5．83g／L，酒精浓度90％，搅拌时间90s，谷胱甘肽纯度可达到26％。     

产大环糊精4-α-糖基转移酶的分离纯化及其性质研究

4-α-糖基转移酶能够作用直链淀粉产生大环糊精。作者研究了重组E.coliDH-5α-TA(保藏编号:3093)产生的4-α-糖基转移酶的分离纯化及酶学性质。粗酶液经过65℃处理20min、Ni-NTA亲和层析、生物半透膜脱盐得到目标酶,该酶经SDS-PAGE凝胶电泳呈单一蛋白条带,其相对分子质量为57000。该酶具有较高的转糖基活性且最小作用底物为麦芽糖。酶学性质研究表明:该酶的最适反应温度为75℃,最适pH值为7.5;该酶具有良好的耐热性,在70～85℃酶活维持在80%以上;酶的pH稳定范围为6.0～8.5。     

玉米胚谷胱甘肽分离纯化工艺的研究

采用732阳离子交换树脂对玉米胚提取液中谷胱甘肽进行分离纯化,确定了分离纯化的最佳条件为:谷胱甘肽与树脂体积比4:1、吸附时间40min、流速1 mL/min、洗脱剂NaOH浓度0.2mol/L、洗脱剂与树脂体积比4:1、解析时间105min,谷胱甘肽回收率83.33%.     

溶剂法纯化还原型谷胱甘肽工艺的研究

玉米胚中提取的还原型谷胱甘肽,除含有肽类物质外,还含有糖类、色素类、蛋白质类等水溶性物质,由于这些物质的存在,将使还原型谷胱甘肽的含量降低,并使其生理活性减弱,因此,为提高还原型谷胱甘肽化合物的纯度,通过溶剂法对玉米胚中还原型谷胱甘肽粗提物进行纯化工艺研究。选择乙醇为溶剂沉淀法纯化还原型谷胱甘肽最佳溶剂,通过单因素及正交实验确定最佳工艺条件为:还原型谷胱甘肽粗提液与乙醇体积比为1∶1;乙醇浓度为100%;搅拌时间为15min。采用双光束紫外分光光度法测定有机溶剂法纯化玉米胚还原型谷胱甘肽的的得率为24.41%。通过红外光谱测定纯化后物质为还原型谷胱甘肽。      

玉米胚谷胱甘肽分离纯化工艺的研究

采用732阳离子交换树脂对玉米胚提取液中谷胱甘肽进行分离纯化,确定了分离纯化的最佳条件为:谷胱甘肽与树脂体积比4:1、吸附时间40min、流速1mL/min、洗脱剂NaOH浓度0.2mol/L、洗脱剂与树脂体积比4:1、解析时间105min,谷胱甘肽回收率83.33%。      

毛霉亮氨酸氨肽酶的纯化及性质研究

采用硫酸铵盐析、离子交换层析、疏水层析、凝胶层析及超滤方法对毛霉胞外蛋白酶组分进行分离纯化,从毛霉的发酵麸曲中分离纯化得到氨肽酶组分,并对其性质进行探讨。结果表明：纯化的毛霉氨肽酶是亮氨酸氨肽酶,其对小肽N端的亮氨酸有非常强的水解活性;该氨肽酶在40℃、pH6.5有最大催化活性,在40℃以内,pH5.0～8.0有很好的稳定性;在所实验的几种蛋白酶抑制剂(PMSF、EDTA、E-64、Pepstatin A)中,仅EDTA可以完全抑制该氨肽酶的活性,由此说明,纯化的毛霉氨肽酶是一种金属蛋白酶;常见的金属离子中,Ca2+对该氨肽酶有激活作用,而Zn2+、Cu2+及Mn2+对其有强的抑制作用;该氨肽酶对大豆多肽的苦味有明显的去除效果,大豆多肽脱苦处理4h后其苦味基本消除。     

大麦虫超氧化物歧化酶分离纯化及性质研究

目的：探讨大麦虫超氧化物歧化酶(SOD)分离纯化条件及其性质,为大麦虫利用提供科学依据。方法：以大麦虫为原料,经盐析沉淀、DEAE-Sepharose FF阴离子交换柱层析和Sephadex G-75凝胶过滤层析等纯化, 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法对蛋白质的组分进行分离并确定其分子质量,原子吸收光谱仪鉴定酶的类型。结果：获得了一种酶比活力较高的大麦虫SOD,酶的纯化倍数为68.54倍,分子质量为37.30kD,属于含铜锌超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD),且在278nm波长处有紫外吸收峰,稳定性较好,最适温度为40℃,最适pH值为6.0,对H2O2、β-巯基乙醇试剂十分敏感,受氯仿-乙醇混合液(3:5,V/V)的影响较小。结论：大麦虫SOD具有较高的酶比活力,稳定性好,具有较高的利用价值。     

耐热乳糖酶的纯化及理化性质研究

目的:对从栖热菌(Thermussp.A3)中分离得到的耐热乳糖酶进行纯化及部分理化性质的研究。方法:采用聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离耐热乳糖酶,用5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷(x-gal)进行酶染显色,切下单一电泳带进行回收;分别用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)及非变性孔径梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定其分子质量,用聚丙烯酰胺管状等电聚焦电泳法测其等电点。结果表明:用SDS-PAGE法及梯度电泳法测定该耐热乳糖酶的分子质量分别为51.1kD和65.6kD;用等电聚焦电泳法测得其等电点约为7.2。结论:从栖热菌中提取的耐热乳糖酶的理化性质不同于其它来源的乳糖酶。     

苹果过氧化氢酶的纯化及性质研究

新鲜苹果经匀浆、抽提、硫酸铵盐析、DEAE-Cellulose柱层析,获得纯化苹果过氧化氢酶(CAT)液。纯化CAT酶液蛋白含量26.8mg/mL,活力843Units/mL,比活力31.5Units/mg。经过温度和pH考察,酶的最适温度为50℃、最适pH值为5.0。金属离子影响为:Cu2 和Mn2 对该酶有不同程度的激活作用,Na 对该酶有一定程度的抑制作用。以过氧化氢为底物,Lineweaver-Burk双倒数作图法求得此酶的Km和Vmax分别为2.27mmol/L和2.5μmol/min。     

三聚氰胺的性质、检测方法及毒理学

本文就三聚氰胺的结构、理化性质、检测方法及毒理学等方面作一综述。     

三聚氰胺的性质、检测方法及毒理学

本文就三聚氰胺的结构、理化性质、检测方法及毒理学等方面作一综述。     

文蛤纤维素酶分离纯化及性质

采用缓冲液提取、(NH4)2SO4分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Phenyl Sepharose 6 Fast Flow疏水层析,从文蛤(Meretrix meretrix L)中分离纯化出一种纤维素酶。结果显示:纯化后的纤维素酶比活力达到40.33 U/mg,纯化倍数为13.12;SDS-PAGE检测其亚基相对分子质量为59 700;文蛤纤维素酶的最适pH为5.2,最适反应温度为45℃,该酶在p H 4～6和4～50℃范围内有较好的稳定;在最适条件下,以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为底物测得其Km值为0.111 mmol/L。     

米渣谷蛋白的纯化及功能性质研究

按照Osborne蛋白分级提取渣蛋白,分别得到了清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白,然后采用α-淀粉酶对谷蛋白进行纯化,提纯的谷蛋白纯度可达到90%以上,进而研究食品体系中pH、盐离子和多糖等因素对米渣谷蛋白溶解性、乳化性和乳化稳定性的影响。pH在远离等电点时,有利于谷蛋白的溶解,并提高了乳化性和乳化稳定性;在0.5%NaCl溶液中,谷蛋白的溶解性和乳化性最大,而NaCl浓度为1.0%时,乳化稳定性最低;卡拉胶的添加能显著提高谷蛋白的溶解性、乳化性和乳化稳定性,但过量的卡拉胶会破坏谷蛋白的乳化稳定性。      

重组醇醛脱氢酶的分离纯化及性质研究

基因工程菌Y517#能表达醇醛脱氢酶,将L-山梨糖转化为VC的前体2-酮基-古龙酸(2-KGA)。通过超声波破碎菌体、硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose FastFlow阴离子交换层析,Q Sepharose High Performance柱层析等过程,从Y517#发酵液中分离纯化了重组醇醛脱氢酶,纯化倍数为11倍。研究发现,该酶分子量为66kD,最适作用温度为40℃,对热不稳定,在60℃下保温10min酶活力完全丧失。最适pH值为7.0,pH稳定范围为6.0～9.0。