抗血小板溶栓素对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用机制研究

目的: 探讨抗血小板溶栓素（anti-platelet thrombolysin,APT）对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的机制。方法: 采用TLR4-siRNA在体转染技术,下调大鼠脑组织中Toll样受体4（TLR4）蛋白表达。分别取野生型和TLR4下调的SD大鼠,随机分为假手术组,模型组,TLR4阻断剂（TAK-242 2 mg/kg）组,APT高、中、低组（0.02、0.01、0.005 mg/kg）,每组8只。线拴法建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型,G-LISA法测定大鼠脑组织中RhoA蛋白活性,Western blot 法测定脑组织中TLR4、RhoA相关卷曲螺旋形成蛋白激酶（ROCK1/2）、磷酸化的c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）蛋白表达。结果: 与对照组比较,TLR4-siRNA在体转染大鼠脑组织中TLR4蛋白表达明显下降;在野生型大鼠中,与模型组比较,抗血小板溶栓素可明显降低脑组织中TLR4 蛋白表达,抑制RhoA活性,减少ROCK1/2、p-JNK蛋白表达;在TLR4下调大鼠中,与模型组比较,APT对脑组织中RhoA活性,ROCK1/2、p-JNK蛋白表达无明显影响。结论: 抗血小板溶栓素对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用机制主要与其抑制TLR4/RhoA/ROCK信号通路有关。     

匹诺塞林对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织急性损伤的神经保护作用

目的: 探讨并确证匹诺塞林对脑缺血再灌注急性损伤的神经保护作用,进一步为匹诺塞林治疗缺血性脑卒中的临床应用提供依据。方法: SD大鼠50只,随机均分为假手术组、模型组、匹诺塞林1 mg/kg 组、匹诺塞林 3 mg/kg 组、匹诺塞林 10 mg/kg 组,其中模型组及匹诺塞林各给药组采用大脑中动脉阻塞法（middle cerebral artery occlusion,MCAO）建立脑缺血再灌注模型,分别与大脑中动脉阻塞2 h再灌注同时给药,6 h后取血并断头取脑,制作病理切片。HE染色观察额顶叶皮层（缺血半暗带）和纹状体病理变化,尼氏染色观察海马CA1区形态变化。酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠血清神经元特异性烯醇化酶（neuronal specific enolase,NSE）及S100-β蛋白水平。结果: 匹诺塞林能够改善大鼠急性局灶性脑缺血再灌注的脑组织皮层、纹状体和海马神经元的形态,降低血清中NSE和S100 β蛋白的水平(P<0.05 或P<0.01)。结论: 匹诺塞林能减轻缺血再灌注造成的脑组织急性损伤,具有神经保护作用。     

当归挥发油对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的: 探讨当归挥发油对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法: 采用改良线栓法阻断大鼠大脑中动脉建立脑缺血模型,到达再灌注时限后进行神经功能缺损评分;检测脑梗死体积比、脑含水量及脑血管通透性;血清NO、NOS含量;以及SOD和GSH-Px活性。结果: 当归挥发油可有效改善脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能缺损;降低脑梗死体积比、脑血管通透性和脑含水量;降低血清 NO、NOS含量; 增强SOD和GSH-Px活性。结论: 当归挥发油对脑缺血再灌注损伤有显著保护作用,其机制可能与提高脑组织抗氧化能力有关。     

自噬在米诺环素保护大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用研究

目的:探讨自噬在米诺环素保护脑缺血再灌注损伤中的作用。方法:制备大鼠脑中动脉栓塞(MCAO)模型后,注射米诺环素或3-MA进行干预,对大鼠神经功能进行评分;采用TTC法测定脑梗死体积;透射电镜法观察大脑皮层细胞的超微结构及其自噬小体数目的变化;Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3Ⅱ、p62的表达。结果:22.5 mg/kg和45 mg/kg米诺环素组能够显著降低大鼠神经功能评分,减少脑梗死体积,提高LC3Ⅱ和Beclin1的表达,增加p62的降解;高剂量米诺环素（90 mg/kg）组能够进一步提高LC3Ⅱ和Beclin1的表达,然而其大鼠神经功能评分和脑梗死体积却显著增加;自噬小体数也显著增多;当同时给予自噬抑制剂3-MA后,能显著逆转米诺环素（45 mg/kg）的神经保护作用。结论:低剂量米诺环素能够通过增加LC3Ⅱ和Beclin1的表达、促进p62的降解,诱导自噬从而减轻大鼠脑缺血再灌注损伤;而高剂量米诺环素可能是因为其过度激活自噬导致大鼠脑缺血再灌注损伤加重。     

腺苷A1受体介导异丙酚预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠的缺血耐受

目的: 观察腺苷A1受体是否介导异丙酚预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠的缺血耐受。方法: SD大鼠随机分为3组：对照组、异丙酚组、溶剂组（n=6）,采用高效液相色谱法（HPLC）检测各组脑皮质区腺苷浓度。另一批SD大鼠随机分成A：模型组（MCAO模型）,B：腺苷A1受体拮抗剂（DPCPX）组,C：异丙酚组,D：溶剂组（脂肪乳剂组）,E：异丙酚+DPCPX组,F：异丙酚+拮抗剂溶剂组（DMSO）（n=6）。结果: 与对照组比较,异丙酚组脑皮质区腺苷浓度明显升高（P<0.05）。与C组比较,A、D、E组大鼠行为学评分和脑梗死体积均明显增加（P<0.05,P<0.05,P<0.05）,B、F组比较无差异。结论: 异丙酚预处理对脑缺血再灌注损伤的缺血耐受作用可能部分由腺苷A1受体介导。     

西红花素对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及神经行为学影响

目的: 研究西红花素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法: 采用大鼠脑缺血再灌注模型,隔日西红花素腹腔注射,术后每周进行神经症状评分和行为学实验。28 d后取脑检测缺血侧海马和皮层脑源性神经营养因子（BDNF）、胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）、丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）活性。结果: 西红花素给药显著降低脑缺血再灌注大鼠的神经症状评分,增加十字高架迷宫试验的开臂停留时间,减少旷场试验中央区活动时间。同时,西红花素腹腔注射明显上调缺血侧海马和皮层GDNF、皮层BDNF的表达,降低MDA的产生,提高SOD、GSH-Px活性(P<0.05),差异具有统计学意义。结论: 西红花素可缓解脑缺血再灌注大鼠的焦虑情绪,提高空间辨识和学习记忆能力,其机制可能与西红花素促进神经营养因子的分泌和抗氧化活性物质的产生有关。     

肾上腺髓质素对新生大鼠缺氧缺血再灌注性脑损伤的保护作用

目的:观察外源性肾上腺髓质素(adrenomedullin, AM) 对新生大鼠缺氧缺血再灌注性脑损伤(hypoxic-ischenmia reperfusion brain damage, HIRBD) 的保护作用。方法:40 只7 日龄SD 新生大鼠随机分为正常对照组、缺氧缺血再灌注(HIR) 组、AM 干预组(缺氧缺血后即刻0、 6、 12 h分别给于AM 腹腔注射, 1. 0 mg/kg), 每组8 只, 于术后48 h 处死。取耳间线前2 mm 水平做冠状位脑组织切片, 观察脑组织病理学变化, 同时检测脑组织匀浆一氧化氮合酶(NOS)、 谷胱甘肽(GSH)、 髓过氧化物酶(MPO) 的含量。结果:HIR、 AM 12 h 干预组新生大鼠脑病理改变明显, AM 0、 6 h 干预组的脑病理改变明显减轻。AM 0、 6 h 干预组脑组织中结构型一氧化氮合酶(cNOS)、 GSH 的水平较HIR 组显著增高, 而诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、 MPO 的水平较HIR 组显著降低。结论:缺氧缺血再灌注后0 ～ 6 h 予外源性AM 干预对新生大鼠HIRBD 有不同程度的保护作用, 这种作用与其增加体内抗氧化物质GSH 的活性、NO 的释放及抑制中性粒细胞对脑组织的浸润有关。     

蕲蛇酶减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的实验研究

目的:探讨蕲蛇酶(acutobin) 在局灶性脑缺血再灌注损伤模型中的保护作用及其机制。方法:线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO) 模型, 缺血3 h 后恢复血流再灌24 h 。观察蕲蛇酶对脑梗死面积、脑组织中髓过氧化物酶(MPO)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS) 活性、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA) 含量和超氧化物歧化酶(SOD) 活性的影响。结果:蕲蛇酶能有效减小脑梗死灶, 缓解MPO 升高、降低MDA 含量、抑制iNOS 活性, 降低NO 含量。结论:蕲蛇酶对脑缺血再灌注损伤有保护作用, 其机制可能与缓解MPO 升高以及抑制脑组织中iNOS 活性, 降低NO、MDA 含量有关。     

甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对大鼠缺血再灌注损伤保护作用的比较

目的:比较甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对大鼠缺血再灌注损伤的保护作用。方法:采用改良线栓法阻断大鼠大脑中动脉, 建立脑缺血模型, 到达再灌注时限后进行神经功能缺损评分,用试剂盒检测脑组织中NOS、NO 含量, 并计算脑组织含水量判定脑水肿情况;通过结扎双侧颈总动脉, 考察两药对脑血管通透性的影响。结果:甘西鼠尾草注射液与丹参注射液均可改善缺血再灌注损伤大鼠神经功能缺损;降低脑组织中NOS、NO 含量;降低脑血管通透性;对脑水肿也有一定的缓解作用。结论:甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对大鼠缺血再灌注损伤均有保护作用, 小剂量丹参注射液在降低脑水肿和神经功能缺损评分方面优于小剂量甘西鼠尾草注射液;大剂量甘西鼠尾草注射液在降低脑血管通透性方面优于等剂量的丹参注射液。     

鸢尾素在脏器缺血/再灌注损伤中作用及机制的研究进展

鸢尾素是一种内源性分泌的肌因子,不仅在多种代谢性疾病、心脑血管疾病、神经系统性疾病、肿瘤等疾病方面发挥一定的临床应用价值,也影响脏器缺血/再灌注损伤的发生发展。本文通过对鸢尾素在脏器缺血/再灌注损伤中的作用及机制进行归纳和总结,旨在为预防和治疗缺血/再灌注损伤提供新思路。     

黄体酮防治大鼠缺血再灌注脑损伤中神经功能缺失及细胞凋亡

目的: 探讨黄体酮(progesterone, PROG) 对脑缺血再灌注损伤的保护机制。方法: 采用SD 大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(transient middle cerebral artery occlusion,MCAO) 。将大鼠随机分为6 组:假手术组、ischmia/reperfusion (I/R) 组、溶剂(二甲基亚砜dimethyl sulfoxide, DMSO) 对照组、PROG 预防组、PROG 治疗组、PROG 预防并治疗组, 对各组动物脑缺血/再灌注后神经功能缺陷进行计分, 并应用细胞死亡原位末端标记(insitu end labeling, ISEL) 法研究脑组织细胞凋亡情况。结果: (1) 缺血2 h 再灌注24 h 后神经功能缺陷计分:假手术组为0 分, I R 组为1. 38±0. 92, DMSO 组为1. 0±0. 53, 预防组为0. 35±0. 51, 治疗组为0. 62±0. 52, 防治组为0. 25±0. 46 。(2) 高倍视野下凋亡细胞数:假手术组为1. 88±0. 25, I R 组为41. 38±3. 85, DMSO 组为38. 13±5. 69, 预防组为22. 88±2. 70, 治疗组为25. 63±2. 93, 防治组为20. 88±2. 30 。以上指标各药物处理组(预防组、治疗组及防治组) 与I R 组、DMSO 对照组之间差异具有统计学意义(P<0. 05) 。结论: PROG 可减少局灶性缺血再灌注脑损伤动物模型神经功能缺失的发生, 减轻局灶性缺血再灌流脑损伤, 减少大鼠缺血再灌注后脑细胞凋亡。     

黄体酮防治大鼠缺血再灌注脑损伤中细胞凋亡及p53蛋白的变化

目的: 探讨黄体酮对缺血再灌注损伤脑的保护机制。方法: 采用SD 大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(transient middle cerebral artery occlusion,MCAO),将大鼠随机分为6 组:假手术组、缺血再灌注组、二甲基亚砜溶剂(dimethyl sulfoxide, DMSO) 对照组、黄体酮(progesterone, PROG) 预防组、PROG 治疗组、PROG 预防治疗组, 应用免疫组织化学和细胞死亡原位末端标记(Insitu end labeling, ISEL) 法研究脑组织细胞凋亡及凋亡相关蛋白p53 的表达情况。结果: 高倍视野下p53 蛋白阳性细胞数, 各药物处理组凋亡细胞数与缺血再灌注组和对照组之间差异有显著的统计学意义(P <0.05)。结论: PROG 可减轻局灶性缺血再灌流脑损伤, 减少大鼠脑缺血再灌注后的脑细胞凋亡。抑制脑神经细胞中p53 蛋白表达可能是其发挥保护作用的分子机制之一。     

白藜芦醇通过高迁移率族蛋白B1抗大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用及机制

目的: 探讨白藜芦醇对大鼠肝脏缺血再灌注损伤中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达的影响及机制。方法: 健康雄性SD大鼠30只随机分为3组,假手术对照（SC）组、肝脏缺血再灌注（HIR）组、白藜芦醇（Res）组。各组分别采集血液标本,处死动物收集肝组织标本。检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）和碱性磷酸酶（AKP）及炎症因子IL-6、TNF-α的变化。应用Western Blot及RT-PCR方法检测HMGB1、Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）蛋白及基因表达情况。光镜下观察经HE染色肝组织形态学变化。 结果: 与HIR组相比,Res使大鼠肝组织病理学变化明显改善,血清中反映肝脏功能学的指标ALT、AST及AKP的浓度明显降低,同时肝组织HMGBl、TLR4蛋白及mRNA的表达降低,血清中炎症因子IL-6和TNF-α含量亦显著降低。结论: 白藜芦醇对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用可能与其通过抑制HMGB1-TLR4信号通路,从而减少其下游促炎细胞因子表达,减轻再灌注过程中炎性反应有关。     

小檗碱对局灶性脑缺血大鼠原癌基因c-fos 表达的影响

目的 研究大鼠局灶性脑缺血过程中c-fos mRNA 表达的动态变化, 并观察小檗碱(Ber)对其作用。方法 运用斑点杂交技术, 观察Ber 对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮质及海马组织c-fos mRNA 表达的影响。结果 大鼠局灶性脑缺血2 h 再灌注0.5～4 h, 脑皮质及海马组织c-fos mRNA 出现一过性高表达, 2 h 达高峰, 分别为对照组的4.5 和4.7 倍。Ber 20 mg/(kg·d)ip 显著抑制大鼠脑缺血诱导的c-fos 高表达, 降低病灶侧海马和皮层组织水、钙含量。结论 脑缺血过程中c-fos 原癌基因呈现一过性高表达, Ber 可降低c-fos mRNA 水平, 该作用可能是其抗脑缺血机理之一。     

JNK在缺血后处理减轻再灌注损伤肺细胞凋亡中的作用

目的: 探讨C-Jun氨基末端激酶(JNK)在缺血后处理(IPO)减轻缺血/再灌注损伤大鼠肺细胞凋亡中的作用。方法: 雄性SD大鼠随机分成5组(n＝8),即对照组(C组)、肺缺血/再灌注组(I/R组)、肺缺血/再灌注+缺血后处理组(IPO组)、缺血后处理+溶剂对照组(PPCES溶液)(P组)、缺血后处理+SP600125组(SP组)。分别于再灌注 2 h 颈动脉取血、留取左肺组织,检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO),检测肺组织湿/干重比(W/D)和总肺含水量(TLW);光电镜观察肺组织形态学结构改变,并进行肺组织损伤定量评估(IQA);原位末端标记法(TUNEL)检测肺细胞凋亡情况并计算凋亡指数(AI)。结果: 与C组相比,I/R组血清SOD活性显著降低,MDA含量、MPO活力显著升高(P均<0.01),肺组织W/D、TLW、IQA和AI均显著升高(P<0.05 或P<0.01),光镜电镜下肺组织结构发生明显损伤;IPO组、P组、SP组与I/R组相比,MDA含量、MPO活力显著降低,SOD活性升高(P<0.05 或P<0.01),肺组织W/D、TLW、IQA和AI均显著降低(P<0.05 或P<0.01),光镜电镜下肺组织结构损伤情况有所改善;P组与IPO组比较各项指标均无明显差异(P均>0.05);SP组与IPO组相比,MDA含量、MPO活力显著降低,SOD活性升高(P<0.05 或P<0.01),肺组织W/D、TLW、IQA和AI均显著降低(P<0.05或P<0.01),光镜电镜下肺组织结构未见明显损伤。结论: I/R导致大鼠肺组织过度氧化应激,激活JNK,肺内中性粒细胞聚集,导致肺组织结构严重破坏,细胞大量凋亡;IPO可以减轻氧化应激,抑制JNK通路的激活,从而改善其结构破坏和细胞凋亡。     

外源性血管内皮衍生超极化因子对脑缺血再灌注损伤的影响

目的: 硫化氢(hydrogen sulfide, H₂S)为一种假定的血管内皮衍生超极化因子(endothelium- derived hyperpolarizing factor, EDHF),本研究探讨外源性H₂S,即外源性假定的EDHF对脑缺血再灌注损伤的影响。方法: 采用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血(MCAO)再灌注损伤模型,测定动物行为功能、脑组织梗死体积、脑组织含水量、血清乳酸脱氢酶(LDH)活性及丙二醛(MDA)含量,用HE染色法观察脑组织学改变。结果: H₂S供体硫氢化钠(NaHS, i.v.) 0.195、0.390、0.780 mg/kg 能明显改善神经功能状态,降低缺血再灌注后脑梗死体积百分比,降低脑含水量,显著地抑制局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血清MDA含量和LDH活性,并不同程度地改善大鼠脑病理组织学的变化。结论: NaHS可明显改善大鼠脑缺血再灌注性损伤,提示外源性EDHF (H₂S)有抗脑缺血再灌损伤作用。     

山茶花总黄酮对缺血性脑损伤的保护作用

目的: 研究山茶花总黄酮(TFC) 对小鼠急性脑缺血和大鼠局灶性脑缺血的保护作用。方法: 结扎小鼠双侧颈总动脉建立脑缺血模型, 观察TFC 对小鼠死亡率及死亡时间的影响。建立局灶性脑缺血(MCAO) 模型, 观察TFC 大鼠对行为学、脑梗死面积的影响, 并测定缺血侧脑组织中乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA) 及一氧化氮(NO) 含量。结果: TFC 80 、40 mg·kg^-1 组可降低缺血小鼠的死亡率, 延长死亡时间;60 、30 、15 mg·kg^-1 组可改善行为障碍,降低行为学评分;60 、30 mg·kg^-1 组可减少MCAO 大鼠脑梗死范围, 降低脑组织中MDA 、NO 含量, 抑制LDH 活性的下降。结论: TFC 对缺血性脑损伤有保护作用, 其机制可能与抗自由基和抑制NO 生成有关。     

葡萄糖酸镁对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的: 观察葡萄糖酸镁对心肌缺血再灌注损伤的影响, 探讨葡萄糖酸镁心肌保护作用及其机理。方法: 采用改进了的整体大鼠急性心肌缺血再灌注损伤模型, 检测组织内 Na⁺-K⁺ -ATPase 活力及丙二醛(MDA) 和 Ca²⁺ 含量, 并测定由ADP 诱导的血小板5 min 最大聚集率 AGG(M)。结果: 与假手术组相比, 缺血再灌注组心肌组织内 Na⁺ -K⁺ -ATPase 活力显著下降(P<0.01), MDA 和Ca²⁺ 含量明显升高(P<0.01), AGG(M) 升高(P<0.05)。与缺血再灌注组比较, 葡萄糖酸镁 3 个不同剂量保护组心肌组织内Na⁺ -K⁺-ATPase 活力明显升高(P<0.01), MDA和Ca²⁺ 含量明显降低(P<0.05 或 P <0.01), AGG(M) 也明显降低(P<0.01), 且各作用均随用药剂量的增加而更加显著。结论: 葡萄糖酸镁对心肌缺血再灌注损伤有保护作用, 其保护作用机制与增加Na⁺ -K⁺-ATPase 活性 、减轻钙超载和抑制脂质过氧化反应以及血小板聚集有关。     

牛磺酸对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨牛磺酸对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机理。方法 采用在体大鼠冠脉结扎后再通的方法,观察牛磺酸对大鼠心肌缺血再灌注后心肌梗塞的范围,血清和心肌中SOD活性、MDA和NO含量的影响。结果 牛磺酸可明显减少大鼠心肌缺血再灌后的心肌梗塞范围(P<0.05,0.01),提高大鼠心肌缺血再灌注后血清和心肌中的SOD活性(P<0.01),降低心肌和血清中MDA和NO含量(P<0.05,0.01)。结论 牛磺酸对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,可能与其提高血清和心肌组织中SOD 活性、降低MDA和NO含量有关。