缺氧-复氧对心室肌细胞的损伤及川芎嗪的保护作用1

目的 观察缺氧-复氧对大鼠心室肌细胞的损伤及川芎嗪的保护作用 。方法 在缺氧-复氧条件下,测量对照组和不同浓度川芎嗪组对杆形心肌细胞百分比、心肌细胞内 K⁺/Na⁺浓度比及Ca²⁺浓度的影响。结果 缺氧-复氧对大鼠心室肌细胞有损伤作用,浓度为 4μmol·L^-1的川芎嗪对缺氧-复氧损伤细胞有保护作用,它能抑制损伤细胞挛缩,提高损伤细胞生存率,抑制心肌细胞内 K⁺/Na⁺浓度比的降低 、增加细胞内 Ca²⁺浓度,且剂量越大,保护作用越好,即川芎嗪对缺氧-复氧损伤细胞的保护呈剂量依赖性 。结论 川芎嗪对缺氧-复氧损伤的大鼠心肌细胞具有保护作用,它能显著地对抗缺氧-复氧对心室肌细胞的损伤作用 。     

pFLAG-AMPKα2真核表达质粒构建及对心肌缺氧/复氧损伤的作用

目的: 构建大鼠pFLAG-AMPKα2真核表达质粒,分析AMPKα2过表达对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。方法: 提取H9c2心肌样细胞的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增AMPKα2基因的cDNA全长,并将其克隆至pFLAG-CMV-4构建pFLAG- AMPKα2重组质粒。转染pFLAG-AMPKα2至H9c2细胞,Western Blot测定AMPKα2的蛋白表达情况,建立缺氧/复氧(A/R)损伤模型,MTT法检测心肌细胞的存活率,生物自动分析仪检测LDH活性,流式细胞术检测各实验组心肌细胞凋亡程度、细胞内ROS的变化,试剂盒检测细胞内抗氧化酶(SOD、GSH-Px)活性。结果: AMPKα2全长基因序列克隆至真核表达载体pFLAG-CMV-4,酶切鉴定片段大小为1700 bp,Western blot检测转染pFLAG-AMPKα2后,AMPKα2蛋白在H9c2细胞中高表达。H9c2细胞遭受A/R损伤,心肌细胞存活率下降,LDH活性增加,细胞凋亡加重,ROS生成增加,SOD及GSH-Px的酶活性下降,pFLAG-AMPKα2重组质粒的导入可明显逆转、改善上述各项指标,从而对抗A/R损伤。结论: 构建成功的pFlAG- AMPKα2重组质粒能对抗A/R所致的心肌细胞损伤,其机制与改善心肌细胞的氧化应激作用有关。     

阿片受体激活对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:观察δ阿片受体激活剂D-丙(2)-D-亮(5) 脑啡肽(DADLE) 对培养心肌细胞缺氧/复氧(H/R) 损伤的保护作用。方法:采用培养的SD 大鼠乳鼠的心肌细胞, 建立H/R 损伤模型, 检测指标包括:(1) 心肌细胞形态;(2) 心肌细胞存活率;(3) 超氧化物歧化酶(SOD) 活性;(4) 丙二醛(MDA) 含量;(5) 乳酸脱氢酶(LDH) 活性。结果:模型组缺氧后心肌细胞存活率降低, 复氧30 min后进一步下降, 各个时间点细胞内SOD 活性下降, MDA 含量升高, LDH 活性升高, 与正常组比较差异有统计学意义(P <0.01), 复氧60 min 后各指标逐渐趋于正常状态;DADLE 1 μmol/L 组细胞存活率升高, LDH 活性降低, MDA 含量逐渐趋于正常, SOD 活性逐渐回升, 表明经DADLE 干预后, 心肌细胞抗损伤能力加强, 发生损伤的程度减轻;δ阿片受体抑制剂纳曲吲哚10 μmol/L 抑制DADLE的保护作用。结论:DADLE 通过δ阿片受体对乳鼠心肌细胞H/R 损伤具有保护作用。     

羟丁酸钠对大鼠原代培养皮层神经元缺氧复氧损伤的保护作用与GABAA 受体的关系1

目的 探讨羟丁酸钠(SO) 对大鼠皮层神经元缺氧复氧损伤的保护作用与GABAA 受体的关系。 方法 采用原代培养大鼠皮层神经元建立缺氧复氧损伤模型, 观察细胞的形态学, 测定其LDH 漏出率、MDA 含量、SOD、GPx 活力。 结果 缺氧复氧可引起神经元损伤, LDH 漏出率增加,MDA 含量升高(P <0.01), SOD、GPx 活力降低(P <0.01)。SO 能显著减少损伤神经元的LDH 漏出率及MDA 的生成(P <0.01), 升高SOD、GPx (P <0.01) 的活力, 这种作用可被GABAA 受体阻断剂seurinine 减弱(P <0.01)。 结论 SO 对缺氧复氧神经元损伤的保护作用可能与其激动GABAA 受体有关。     

人参皂苷Rb1预适应对肥厚乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的: 研究人参皂苷Rb1 对心肌细胞缺氧复氧(H/R) 损伤的保护作用。方法: 用血管紧张素II(Ang II) 刺激乳鼠心肌细胞肥厚, 以0.01 ~ 10μmol·L^-1 Rb1 对H/R 损伤心肌细胞预适应给药48h, 检测心肌细胞表面积(CSA)、细胞蛋白含量(TP)、细胞凋亡率、细胞生存率和乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA) 及一氧化氮(NO) 含量。结果: 与H/R 组相比, Rb1 组CSA 和TP 分别减少41.56%和43.37%;细胞生存率增加2.28 倍;凋亡率降低85.29%;LDH、MDA 含量分别降低59.20% 和72.03%;NO活性增加2.67 倍(P <0.01)。结论: Rb1 显著减轻肥厚心肌细胞H/R 损伤, 机制与抑制细胞凋亡、减少脂质过氧化和LDH 释放、增强NO 活性有关。     

钙拮抗剂通过PKCα/ERK1/2通路拮抗心肌细胞缺氧复氧损伤

目的: 观察新型钙拮抗剂碘化N-正丁基氟哌啶醇（N-n-butyl haloperidol iodide, F₂）及经典钙拮抗剂维拉帕米对缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation, H/R）时心肌细胞PKCα/ERK1/2信号通路及损伤的作用。方法: 建立新生大鼠心肌细胞H/R模型,于缺氧液和复氧液中加入F₂（1×10^-6 mol/L）及维拉帕米（2×10^-6 mol/L）。采用Western Blot方法检测心肌细胞磷酸化PKCα（p-PKCα）、总PKCα、磷酸化ERK（p-ERK1/2）和总ERK1/2蛋白表达的变化;双抗体夹心光化学测定法检测培养细胞上清液中肌钙蛋白（cardiac troponin I,cTnI）的含量,Hoechst 33342染色法检测心肌细胞早中期凋亡情况,Cell Counting Kit-8比色法检测心肌细胞存活率。结果: H/R激活培养心肌细胞PKCα和ERK1/2,使细胞cTnI浓度升高,早中期凋亡增加,存活率下降;PKCα抑制剂可下调H/R所致的PKCα和ERK1/2活化程度;ERK1/2抑制剂可抑制H/R所致心肌细胞cTnI漏出,减少细胞凋亡,提高细胞存活率;F₂及维拉帕米能够下调H/R所致PKCα和ERK1/2的活化程度,抑制细胞cTnI漏出,减少细胞凋亡,提高细胞存活率;PKCα激动剂和ERK激动剂可拮抗F₂对H/R心肌细胞PKCα和ERK1/2激活的抑制作用及对心肌细胞损伤的保护作用。结论: H/R可引起心肌细胞PKCα/ERK1/2通路激活,F₂和维拉帕米均可通过调节PKCα/ERK1/2信号通路拮抗心肌细胞H/R损伤。     

黄蜀葵花总黄酮对海马神经元缺氧复氧损伤的保护作用

目的: 研究黄蜀葵花总黄酮（total flavones of abelmoschl manihot,TFA）对海马神经元缺氧复氧损伤的保护作用以及可能的内皮衍生超级化因子（endothelium-dependent hyperpolarizing factor,EDHF）相关机制。方法: 采用原代培养的海马神经元建立缺氧4 h/复氧24 h损伤模型,预先在细胞培养上清内加入大鼠脑基底环动脉（basilar artery,BA）环,分别给予乙酰胆碱（acetylcholine,Ach）联合一氧化氮（nitric oxide,NO）合酶抑制剂Nω-nitro-L-arginine-methyl-ester（L-NAME)和前列环素（prostacyclin,PGI2）抑制剂indomethacin（Indo）;TFA联合L-NAME和Indo预处理。检测缺氧/复氧损伤后海马神经元存活率、培养上清液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活力的变化;另外,用激光共聚焦法检测细胞内游离Ca²⁺浓度。结果: 与单独应用Ach或者TFA预处理比较,Ach或者TFA联合脑基底动脉环均能明显改善缺氧/复氧后海马神经元存活率的降低,培养上清中LDH活力降低。此外,TFA联合脑基底动脉环抑制海马神经元细胞内游离Ca²⁺的增高,L-NAME及Indo对此结果并无显著影响。结论: TFA对缺氧/复氧致海马神经元损伤有明显的保护作用,其机制可能与促进EDHF释放,抑制细胞内Ca²⁺超载有关。     

右美托咪定对A549细胞缺氧/复氧损伤时JNK的影响

目的: 观察右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)对缺氧/复氧所致的A549细胞损伤的干预作用以及对c-Jun氨基末端激酶(JNK)的影响。方法:培养A549细胞株,将细胞随机分为4组（n=10）：正常对照组（N组）,DEX组（D组）,缺氧/复氧损伤组（H组）,缺氧/复氧损伤+DEX干预组（HD组）。造模结束后,在倒置显微镜下观察细胞形态学的变化。CCK-8法检测A549细胞活力。原位末端标记（TUNEL）法检测A549细胞的凋亡指数（AI）。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞内葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、p-JNK、caspase-3蛋白的表达水平,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测GRP78、JNK mRNA的表达水平。结果:与N组比较,H组贴壁细胞数量明显减少,细胞形态发生改变。A549细胞的吸光度（OD）值明显下降（P<0.01）,AI值升高（P<0.01）,凋亡细胞数明显增加（P<0.01）。HD组与H组相比,细胞损伤减轻,OD值上调（P<0.01）,凋亡细胞数相对减少,AI值下调（P<0.01）。p-JNK、caspase-3蛋白和JNK mRNA表达下降（P<0.01）。结论:DEX可有效减轻A549细胞缺氧/复氧损伤,机制可能与其抑制JNK通路激活所致的细胞凋亡有关。     

羟丁酸钠在大鼠海马脑片缺氧复氧损伤中的保护作用机制

目的 研究羟丁酸钠(SO) 在大鼠海马脑片缺氧 复氧(H R) 损伤中的保护作用, 揭示SO 在缺血性脑损伤中的保护作用机制。方法 采用大鼠海马脑片H R 损伤模型。设正常对照组, H R组, SO 1 、10 、100 μmol/L 组, NCS-382 100 μmol/L +SO 100 μmol/L (NCS-382 + SO) 组、NCS-356100 μmol/L (NCS-356) 组。测定脑片孵育液中乳酸脱氢酶(LDH) 释放率, γ-氨基丁酸(GABA) 、谷氨酸(Glu) 含量;脑片进行TTC 染色计算组织损伤百分率;HE 染色观察组织病理形态学变化, 流式细胞仪测定细胞内钙;酶组织化学法检测一氧化氮合酶(NOS) 的表达。结果 SO 明显降低H R 海马脑片LDH 释放率(P<0.01), 提高TTC 染色的A490值, 降低组织损伤百分率(P<0.01), 升高GABA Glu 比值(P<0.01), 减轻H R 所致的组织病理损伤。H R 组脑片细胞内钙荧光强度和NOS阳性神经元明显高于正常对照组(P<0.01) ;SO 100 μmol/L 组、NCS-356 组细胞内钙荧光强度较H R 组显著减弱(P<0.01),NOS 阳性神经元的数目明显减少(P<0.01)。用γ-羟基丁酸(GHB) 受体选择性阻断剂NCS-382 后再使用SO, 细胞内钙荧光强度、NOS 阳性神经元的数目均接近H R组。结论 SO 对大鼠海马脑片H R 损伤有明显的保护作用, 其机制可能与升高GABA Glu 比值, 激动GHB 受体抑制细胞内钙的增高及NOS 的表达有关。     

异丙酚预处理对缺氧/复氧后培养海马神经元金属硫蛋白-3蛋白表达的影响

目的:本研究观察异丙酚对培养海马神经元缺氧复氧后损伤反应的影响及金属硫蛋白-3(metallothionein-3,MT-3)在其中的作用。方法: 培养7~10 d 海马神经元,以不同浓度的异丙酚(50,150,250 μmol/L)预处理后 24 h 后,制备缺氧 4 h 后复氧 24 h 模型(H/R),Western blot法检测MT-3蛋白表达水平;以MT-3特异性siRNA沉默MT-3表达后,采用MTT法观察异丙酚对H/R海马神经元存活率的影响。结果: 在H/R条件下,异丙酚可浓度依赖性促进MT-3的蛋白表达。以MT-3 siRNA抑制MT-3蛋白表达后,异丙酚提高神经元存活率的作用消失。结论:异丙酚具有神经元保护效应,这一作用可能与其上调MT-3的蛋白表达有关。     

Livin mRNA 的反义核酸诱导MCF-7 乳癌细胞凋亡作用

目的: 以livin mRNA 为靶点设计反义硫代脱氧寡核苷酸(PS-ODNs), 探讨其体外抗肿瘤效应及其机制。方法: 设计以livin mRNA 为靶点的反义核酸并作用于MCF-7 乳癌细胞, 用MTT、RT-PCR 和流式细胞仪检测等方法对其进行评价研究。结果: 在设计的一些反义核酸中, YMZ05 能够有效地抑制livin 基因的表达, 增加caspase-3 的活性, 诱导MCF-7细胞凋亡, 明显抑制其生长, 结论: 通过抑制livin 基因的表达能够抑制MCF-7 乳癌细胞生长、诱导其凋亡, livin 可能会成为抗肿瘤的新靶点。     

丁苯酞对S-亚硝基化谷胱甘肽诱导脑微血管内皮细胞损伤的保护作用及机制研究

目的:构建S-亚硝基化谷胱甘肽（S-nitrosoglutathione,GSNO）诱导脑微血管内皮细胞的损伤模型,探讨丁苯酞（Butylphthalide,dL-NBP）对脑微血管内皮细胞的保护作用与可能的分子调控机制。方法:建立损伤bEnd.3细胞模型,以MTT法检测细胞存活率。DCFH染色检测细胞活性氧水平。Western blot法检测p-ERK,ERK,cleaved caspase 9,pro-caspase 9,cleaved caspase 3,pro-caspase 3蛋白表达。RT-PCR法检测糖皮质激素受体（GR）、SGK、MKP-1基因表达水平。结果:dL-NBP（5,10,20 μmol/L）可减少GSNO引起的脑微血管内皮细胞损伤,提高细胞存活率,减少ROS发生。此外,dL-NBP可激活SGK和MKP-1转录水平的增加,上调ERK磷酸化,抑制cleaved caspase 9,cleaved caspase 3蛋白上调。结论:dL-NBP对GSNO诱导的脑微血管内皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制与激活PR活性下游基因SGK和MKP-1,上调ERK磷酸化水平,抑制caspase级联反应密切相关。     

绞股蓝总皂甙对氧化修饰低密度脂蛋白损伤小牛主动脉内皮细胞的防治作用

目的 探讨绞股蓝总皂甙(GYP)对氧化修饰低密度脂蛋白(oxidatively modified low density lipoprotein, oxLDL)损伤小牛主动脉内皮细胞的防治作用及可能机制。 方法 在体外培养的小牛主动脉内皮细胞(bovine aortic endothelial cell, BAEC)中加入oxLDL(终浓度为0.1 g pr·L^-1)及GYP 低、中、高剂量组(5.0, 10.0, 20.0 mg·L^-1), 培养24 h 后, 采用细胞毒试验、丙二醛(MDA)测定及细胞计数等方法, 分别对其贴壁细胞及培养液进行检测。 结果 ①细胞毒试验发现, oxLDL 对BAEC 的生长增殖有明显的抑制作用(20.63 %), GYP 组(10.0, 20.0 mg ·L^-1)为9.14 %和6.56 %(P <0.01);②加oxLDL 组和GYP组BAEC 粘附的HL60 细胞数明显多于对照组(P <0.01);③MDA 检测发现oxLDL 促进BAEC 脂质过氧化物生成, 并高于GYP 组和对照组(P <0.01)。 结论 绞股蓝总皂甙具有对氧化修饰低密度脂蛋白损伤小牛主动脉内皮细胞的防治作用。     

血管紧张素-(1-7) 对血管紧张素II致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用研究

目的:观察血管紧张素-(1-7) [Ang-(1-7)] 对血管紧张素II(Ang II) 致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法:体外培养的HUVECs随机分为4 组:对照组, AngII 组, Ang-(1-7) 组, AngII+Ang-(1-7) 组。采用分光光度计测定培养的HUVECs乳酸脱氢酶(LDH) 漏出;流式细胞仪检测细胞凋亡;硝酸还原酶法和放射免疫分析技术分别测定HUVECs 上清液中一氧化氮(NO) 和内皮素-1(ET-1)的含量。结果:与对照组比较,Ang II(0.1 μmol°L^-1)显著增加HUVECs LDH 漏出(P<0.01)、ET-1 分泌(P<0.01) 和HUVECs 凋亡率(P<0.01), 显著减少NO 的含量(P<0.05);Ang-(1-7) 呈剂量依赖性抑制了Ang II 的促LDH 漏出、ET-1 分泌、增加细胞凋亡等作用, 同时明显促进HUVECs 的NO 释放;单用Ang-(1-7) 对HUVECs 无明显影响。结论:Ang-(1-7)可抑制Ang II 所致的体外培养HUVECs 损伤, 对内皮细胞具有保护作用。     

碘化N-正丁基氟哌啶醇对Egr-1 转录及表达的影响

目的: 应用大鼠心肌缺血再灌注模型观察碘化N-正丁基氟哌啶醇(N-n-butyl haloperidol iodide,F₂) 对早期生长反应蛋白-1(early growth response-1,Egr-1) 转录及表达水平的影响, 及其对心肌炎症及心功能的改善作用。方法: 结扎大鼠冠状动脉左前降支, 制成急性心肌缺血再灌注损伤模型, 缺血前5 min, 舌下静脉推注F₂, 监测血流动力学的变化, 病理组织切片观察缺血心肌组织炎性反应变化。应用RT-PCR 方法及Western-blot 方法分别检测缺血组织Egr-1 mRNA 及蛋白水平变化。结果: 与对照组相比, F₂ 治疗组心肌组织内炎性反应及Egr-1 的转录与表达均降低, 心肌功能也得到明显改善。结论: F₂具有明显抑制缺血再灌注大鼠心肌组织内Egr-1mRNA 及蛋白表达、减轻炎性损伤的作用, 这可能是F₂ 对心肌缺血再灌注损伤显著保护作用的机制之一。     

桂枝汤有效部位A对IL-1剌激的大鼠脑微血管内皮细胞前列腺素E2及其主要信号转导元件的影响

目的: 探讨桂枝汤解热有效部位A(Fr.A)对IL-1刺激的大鼠脑微血管内皮细胞(rCMEC)PGE₂信号转导通路主要元件的影响。方法: 制备大鼠含药血清,通过放射免疫法测定PGE₂含量,酶反应底物法测定PLA₂活性,ELISA法测定C0X活性,比色法测定NO含量。结果: Fr. A含药血清处理iCMEC后,在IL-1刺激下,孵育液中PQE₂和NO含量、总C0X和C0X-2活性均显著减低,对升高的SPLA₂活性无明显影响。结论: Fi.A可通过影响PGE₂信号转导通路主要元件C0X及N0,进而影响PGE₂水平。     

季德胜蛇药片对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用

目的: 探讨季德胜蛇药片对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法: 将30只清洁级SD雄性大鼠分为季德胜蛇药组(D组)、对照组(C组)和缺血再灌注组(I/R组),每组10只。建立大鼠肺缺血再灌注模型,检测大鼠肺组织湿干重比;光学显微镜及透射电镜下观察肺组织损伤程度;通过明胶酶谱法测定肺组织匀浆液中明胶酶即金属蛋白酶-2、-9(MMP-2、MMP-9)的活力;逆转录酶PCR方法检测MMP-2、MMP-9 mRNA在大鼠肺组织中的表达变化。结果: 与缺血再灌注组比较,蛇药组肺湿干重比降低(P<0.01),肺组织损伤程度减轻,肺组织匀浆液MMP-9酶活力显著下降,MMP-2酶活力略有降低,肺组织中MMP-9、MMP-2的mRNA表达均降低。 结论: 季德胜蛇药片通过抑制MMP-9、MMP-2的活性及表达,使基底膜的降解降低,从而对大鼠肺缺血再灌注损伤有一定的保护作用。     

熊果酸减轻高糖高脂诱导的人主动脉内皮细胞损伤

目的：探讨熊果酸（ursolic acid, UA）对人主动脉内皮细胞（human aortic endothelial cells, HAEC）高糖高脂损伤的影响及机制。方法：MTT法选取合适的高糖和棕榈酸钠（sodium palmitate, SPA）损伤浓度以及UA预孵浓度。采用试剂盒检测NO、ROS的含量,乳酸脱氢酶（LDH）的释放率以及抗氧化酶包括总超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性。Western blot法检测内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、细胞间黏附分子（ICAM-1）、血管细胞黏附分子（VCAM-1）、半胱天冬酶-1（caspase-1）以及GSDMD的蛋白表达情况。Hoechst33342联合PI荧光染色检测细胞膜的完整状态以探讨焦亡发生情况。观察UA对HAEC的保护作用。结果：预孵UA（1 μmol/L和5 μmol/L）可以减轻高糖高脂（30 mmol/L GLU+0.1 mmol/L SPA）造成的HAEC损伤,提升HAEC活力,减轻氧化应激损伤,增加NO的释放和eNOS的蛋白表达,减少黏附分子的蛋白表达,减少细胞焦亡。 结论：UA可能通过减轻高糖高脂诱导的HAEC氧化应激反应,抑制细胞焦亡的发生,减轻内皮细胞损伤。