液相色谱-电喷雾电离质谱法检测地高辛人血浆药物浓度方法学的建立与考证

目的 建立适用于地高辛临床血药浓度监测的液相色谱-电喷雾电离质谱方法(LC-ESIMS)。方法 地高辛人血浆样本采用乙酸乙酯液液萃取后以LC-ESI-MS 方法进行分析。采用KromasilC₁₈柱(150 mm ×2.00 mm, 3.5 μm)分析柱;在乙腈和氯化铵的混合流动相的流动相系统中,进行梯度洗脱, 选择性负离子检测, 地高辛m z为815.40, 内标RgC₂ m/z 为819.00。结果 地高辛在0.05 ~ 10.0 ng/mL 浓度范围内线性关系良好(r=0.9989), 血浆内杂质不影响药物的检测, 方法回收率大于75 %, 批内、批间变异均小于15 %,冻融稳定性良好。结论 本研究所建立的LC-ESIMS测定方法操作简便、快速、灵敏, 准确, 重现性好, 所需血浆量少, 可用于地高辛临床血药浓度监测及临床药动学研究。     

五酯胶囊对大鼠体内辛伐他汀及其代谢物辛伐他汀酸药代动力学影响

目的：建立LC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中辛伐他汀和辛伐他汀酸浓度,并考察单剂量五酯胶囊对辛伐他汀及辛伐他汀酸在大鼠体内药代动力学影响。方法：采用简单的液液萃取法（LLE）,以洛伐他汀为内标,选用Agilent Eclipse-C18(2.1 mm×150 mm,3.5 μm)为色谱柱,水（含0.1%甲酸）-乙腈（含0.1%甲酸）（5∶95,V/V）为流动相。采用喷雾电离源（ESI）;正离子方式检测,扫描方式为多反应监测（MRM）。将12只雄性大鼠随机分成对照组和实验组,每组6只。对照组灌胃给予辛伐他汀40 mg/kg,实验组先灌胃给予五酯胶囊内容物150 mg/kg（每粒含五味子甲素11.25 mg）,15 min后,再灌胃给予辛伐他汀40 mg/kg,两组分别于给药前和给药后时间点0.25、0.5、0.75、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0 h于大鼠眼眶静脉丛采血约0.5 mL于肝素管中。通过Phoenix软件计算得到相关药代动力学参数。结果：血浆中的辛伐他汀、辛伐他汀酸分别在5～5 000 ng/mL内线性关系良好（辛伐他汀r=0.994 0,辛伐他汀酸r=0.994 54）,最低定量下限分别为5 ng/mL,日内标准偏差与日间标准偏差均小于10%,提取回收率可达80%以上。主要药代动力学参数如下（对照组与实验组）,Cmax［(97±24) vs. (590±227) ng/mL, (385±137) vs. (1 322±502) ng/mL］、AUC0-t［(446±70) vs. (1 315±535) ng·h·mL- 1, (1 305±531) vs. (3 393±1 047) ng·h·mL- 1］、t1/2［(2.37±0.18) vs. (2.93±0.78) h,(2.39±0.43) vs. (3.44±0.80) h］明显增加,差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论：本实验建立的LC-MS/MS法快捷、简单、灵敏、专属性强,适用于大鼠血浆中辛伐他汀和辛伐他汀酸的测定;五酯胶囊对大鼠体内的辛伐他汀和辛伐他汀酸的药代动力学特征有影响,提示临床两药联用可能会发生显著的相互作用。     

高效液相-质谱联用法(HPLC-MS) 测定灯盏乙素血药浓度及其临床药代动力学研究

目的:研究灯盏花素片在中国人体内的药代动力学。方法:20 名健康志愿者单剂量口服120 mg灯盏花素片, 用高效液相-质谱联用法测定血浆中灯盏乙素总苷元。结果:本实验建立的血药浓度测定方法, 血浆中杂质不干扰样品的测定, 线性范围为0.0126～3.24 mg°L^-1;日内和日间精密度均小于12.0%。20 名健康受试者单剂量口服灯盏花素片(120 mg) 后, 主要药代动力学参数:T_max=7.0±2.3 h、C_max=0.9±0.5 mg°L^-1、AUC_0-tn=5.6±1.6mg°h°L^-1、AUC_0-∞=5.8±1.6 mg°h°L^-1、MRT_0-tn=8.0±1.1 h、MRT_0-∞=8.6±1.4 h。结论:建立的LC-MS 法适用于灯盏乙素人体药代动力学研究。灯盏花素片口服药代动力学特点是达峰时间较长, 约占受试者总人数45% 的药时曲线有双峰现象。     

高效液相色谱-串联质谱法测定犬血浆中的普瑞巴林及在药代动力学中的应用

目的: 建立并验证一种测定犬血浆中普瑞巴林浓度的高效、灵敏、快速的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测方法,并应用于Beagle犬单次口服给予普瑞巴林胶囊后体内的药代动力学研究。方法: 犬血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,使用Agilent ZORBAX-C₁₈ (2.1 mm×150 mm,3.5 μm)色谱柱,以含0.1% 甲酸的水和甲醇作为流动相进行梯度洗脱。采用电喷雾离子源（ESI）正离子模式下多反应监测模式（MRM）分析测定,普瑞巴林及非那西汀的离子对分别为［M+H］⁺m/z 160.4→83.3和［M+H］⁺m/z 180.3→110.2。6只Beagle犬口服给予150 mg普瑞巴林胶囊后采集不同时间点血样,用建立的LC-MS/MS分析方法进行测定。结果: 普瑞巴林在30～10 000 ng/mL范围内线性良好（r=0.999 5）,提取回收率为101.2%～102.9%,批内与批间精密度符合生物样品的分析要求。Beagle犬口服给予150 mg普瑞巴林胶囊后,C_max为(25 637.5±2 571.8) ng/mL,T_max为(1.0±0.5) h,t1/2为(4.4±0.6) h,MRT为(6.7±0.7) h。结论: 此方法成功地应用于单次口服给予Beagle犬150 mg普瑞巴林胶囊的药代动力学研究。     

托伐普坦片在中国健康人体的生物等效性研究

目的: 评价试验制剂托伐普坦片与参比制剂托伐普坦片在中国健康人体中的生物等效性。方法: 采用双周期随机交叉试验设计,入选24名男性健康受试者单次口服参比制剂和试验制剂 30 mg,采用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定血浆中托伐普坦的浓度,经DAS 2.1 软件处理参数,并进行双单侧t检验确定是否等效。结果: 试验制剂和参比制剂的主要药代动力学参数分别为:C_max为(179±97)和(189±86) μg/L;t_max为(2.5±1.1)和(2.5±1.0) h;AUC_0-t为(1153±488)和(1225±528) μg·h·L^-1;AUC_0-∞为(1161±492)和(1232±528) μg·h·L^-1;t_1/2为(5.6±2.0)和(5.6±2.0) h。试验制剂对参比制剂的相对生物利用度F为(95.8±18.7)%。结论: 试验制剂托伐普坦片与参比制剂托伐普坦片生物等效。     

RP-HPLC法测定人血浆中奥美拉唑浓度及其在健康男性志愿者药代动力学研究

目的: 建立人血浆中奥美拉唑的含量测定方法, 用于其血药浓度测定并进行临床药代动力学研究。方法: 1 ml 血浆样品以二氯甲烷提取, 采用反相高效液相-二极管阵列检测器分离测定血浆中的奥美拉唑浓度。色谱条件:krumasil C18 柱(4.6 mm ×200 mm, 5 μm), 流动相为乙睛:三蒸水(含0.01mol·L^-1磷酸氢二钠, 三乙胺调pH 7.5) =45:55(v/v);流速:1.3 ml·min^-1, 检测波长302 nm, 进样量30μl。9 例健康志愿者单剂量口服40 mg 奥美拉唑肠溶胶囊, 用高效液相色谱法测定给药后不同时间点血浆中奥美拉唑的浓度, 计算其药动学参数。结果: 奥美拉唑在10 ~ 2 000 μg·L^-1浓度范围内呈良好的线性关系, 最低检测浓度为10 μg·L^-1。高、中、低浓度的方法回收率分别为92.35%、96.90%、100.04%, RSD 均小于15%。健康人体药动学研究证明, 奥美拉唑的药-时曲线符合一室模型。结论: 本方法灵敏度高、专属性强、准确、简便, 适用于奥美拉唑的人体药代动力学研究。     

反向高效液相色谱法测定盐酸伊托必利颗粒血药浓度及其人体药动学和生物等效性分析

目的: 测定人血浆中盐酸伊托必利颗粒的血药浓度并对其在健康人体内的药代动力学及生物等效性进行分析。方法: 采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定20 名男性健康志愿者单剂量口服100 mg 盐酸伊托必利颗粒剂(受试药)和盐酸伊托必利片(参比药)后,血浆中伊托必利浓度变化情况,用3P97 程序进行药代动力学分析。结果: 测得受试药和参比药C_max 分别为594.8 ±152.3 和628.6 ±261.4 μg·L^-1,T_max 分别为0.766 ±0.213 和0.900 ±0.392 h,T_12ke 分别为3.21 ±0.86 和3.49 ±0.77 h,AUC_0-15 分别为2266.0 ± 1340.9 和2339.4 ±1831.7 μg·L^-1·h^-1,AUC0-∞分别为2472.1 ±1800.3和2496.9 ±1952.3 μg·L^-1 ·h^-1。结论: 盐酸伊托必利颗粒的相对生物利用度为106.9 % ±27.3 %;选择C_max 、AUC_0-15 和AUC_0-∞进行三因素方差分析与双单侧t 检验,结果表明受试药与参比药具有生物等效性。     

丙戊酸钠缓释片在健康人体内的药动学研究

目的: 建立用于测定人血浆中丙戊酸的LC-MS/MS法,研究丙戊酸钠缓释片在健康人体内的药动学。方法: 色谱条件：色谱柱为Waters YMC C₁₈柱(150 mm×2.1 mm,5 μm),流动相为乙腈和10 mmol/L醋酸铵 (85∶15,V/V),流速为300 μL/min,柱温为40 ℃,进样量为2 μL;质谱条件：电喷雾负离子化,三重四极杆质谱多反应监测模式,丙戊酸和内标甘草次酸的选择性反应检测离子分别为m/z 143.0→143.0和m/z 469.4→425.5。24名中国成年健康男性作为受试者,按随机数表分为2组,采用自身双交叉试验设计,单剂量空腹口服0.5 g丙戊酸钠缓释片受试制剂或参比制剂,并于不同时间点采集肘静脉血（0～96 h）;随后进行多剂量试验,将另外24名受试者分成2组,连续8 d服用受试制剂或参比制剂(0.5 g,qd),于第8天服药后按单剂量试验中的采血方案在各时间点采集血样。对采集的所有血样进行血浆分离及处理,采用建立的LC-MS/MS法测定丙戊酸血药浓度,用DAS 2.0软件计算药动学参数。结果: 分析方法学评价：丙戊酸血药浓度在0.087 5～89.6 μg/mL范围内线性关系良好,方法精密度、准确度和回收率均良好,且无明显基质效应。药动学评价：受试制剂单剂量和多剂量给药后的主要药动学参数分别为C_max (42.9±14.4)和C_ss,max (65.1±31.6) μg/mL,以及AUC_{0-96 h} (1 214.5±372.8)和AUC_ss (1 106.6±484.9) μg•h•mL^-1,均与参比制剂无统计学差异（P>0.05）。结论: 建立的LC-MS/MS法专属、灵敏、准确,可满足丙戊酸钠缓释片的药动学研究要求。     

盐酸托烷司琼胶囊的人体药代动力学研究

目的: 研究盐酸托烷司琼胶囊的人体药代动力学。方法: 采用高效液相色谱(HPLC)-二极管阵列紫外法测定18 名健康志愿者口服剂量10 mg 盐酸托烷司琼胶囊后受试者血浆中的盐酸托烷司琼的浓度, 并应用3p97 软件对盐酸托烷司琼的血药浓度-时间数据进行拟合, 求其药代动力学参数。结果: 盐酸托烷司琼胶囊的药代动力学参数为:达峰时间(Tmax ) 2. 33±0. 43 h, 峰值浓度(Cmax ) 10. 48±2. 70 μg·L^-1, 曲线下面积(AUC0-24 h ) 111. 89±39. 86 μg·h^-1·L^-1 。结论: 盐酸托烷司琼胶囊在志愿者体内分布及消除都很快, 10 mg 单次给药安全。     

HPLC-MS/MS法测定雷诺嗪血药浓度及其缓释制剂的药代动力学研究

目的:通过方法学的建立和确认,进行了单次给药雷诺嗪缓释片后的药动学研究,为该药临床研究及合理用药提供依据。方法: 12名健康受试者,男女各半,采用三周期、3交叉(3×3)拉丁方设计,实验分别单剂量给500、1000、1500 mg 雷诺嗪缓释片。分别于给药前(0 h)和给药后 0.5、1.0、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0、12.0、16.0、24.0、36.0、48.0 h 采集静脉血 4 mL。采用LC-MS/MS法测定血浆样品中雷诺嗪的浓度,并计算主要的药动学参数。结果: 单剂量给药500、1000、1500 mg 雷诺嗪缓释片后C_max分别为(742±253)、(1355±502)和(2329±890) ng/mL;AUC_0-48分别为(9072±3400)、(16574±6806)和(29324±10857)ng·mL^-1·h;AUC_0-∞ 分别为(9827±3152)、(16882±6791) 和(29924±10706) ng·mL^-1·h;t_max分别为(5.3±1.4),(4.2±1.2)和(5.9±2.8) h;t_1/2分别为(6.4±3.3),(6.4±3.5)和(6.7±4.3) h。结论:在本次实验中,C_max 和AUC 与剂量成比例增加,单次给药3个剂量有很好的线性关系,所有受试者都有较好的耐受性。     

克拉霉素软胶囊在中国健康人体的生物等效性研究

目的: 评价受试制剂克拉霉素软胶囊与参比制剂克拉霉素片在中国健康人体中的生物等效性。方法: 采用双周期随机交叉试验设计,入选20名男性健康受试者单剂空腹口服参比制剂和受试制剂 0.25 g,采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定血浆中克拉霉素的浓度,经BAPP2.0软件处理参数,并进行双单侧t检验确定是否生物等效。结果: 主要药代动力学参数:受试制剂和参比制剂克拉霉素的达峰时间t_max分别为(2.1±0.6)、(2.0±0.8) h;C_max分别为(815±191)、(800±200) ng/mL;t_1/2分别为(4.0±0.4)、(3.9±0.5) h;AUC_{0-24 h}分别为(5612±1283)、(5246±1375) ng·h·mL^-1;AUC_0-∞分别为(5722±1313)、(5339±1402) ng·h·mL^-1。受试制剂与参比制剂的相对生物利用度为(110.5±23.9)％。结论: 受试制剂克拉霉素软胶囊与参比制剂克拉霉素片生物等效。     

高效液相色谱法测定羟甲烟胺对环孢菌素A 药物动力学参数的影响

目的 建立简单、快速、准确的高效液相色谱法(HPLC) 测定环孢菌素A(cyclosporin A, CsA) 血药浓度的方法, 研究羟甲烟胺对CsA 药物动力学参数的影响。 方法 采用HPLC 法测定18 名健康志愿者单服CsA 及同服羟甲烟胺后CsA 的血药浓度, 用3p97 分析处理数据, 比较两组药动学参数的变化。 结果 单服CsA 及同服羟甲烟胺后CsA 的C_max 和AUC_0~∞有极显著性差异(P <0.01), 而t _1/2(β)、T_max无显著性差异(P >0.05)。 结论 本实验建立的HPLC 法准确可靠, 操作简便, 适用于临床药动学研究及常规血药浓度监测。羟甲烟胺可促进CsA 的吸收, 提高CsA 的峰浓度及药时曲线下面积, 但不影响CsA 的代谢。     

9-硝基喜树碱犬体内药代动力学研究

目的: 研究9-硝基喜树碱在犬体内药动学规律。方法: 犬静注或灌服3个剂量9-硝基喜树碱,血浆9-硝基喜树碱浓度用高效液相色谱法及液相-质谱联用法检测,浓度-时间数据用3P97药代动力学软件进行分析,计算药动学参数,分析AUC、C_max及ke与剂量的线性关系。结果: 犬静注0.5、1、2mg·kg^-19-硝基喜树碱,t_1/2分别为2.2±2.2、1.8±1.7和0.8±0.6h;AUC_0-t分别为105±71、272±81和396±93ng·h·ml^-1;犬灌胃1、2、4mg·kg^-19-硝基喜树碱,C_max分别为9.3±8.2、42.2±35.7和63.6±5.9ng·ml^-1,T_max分别为0.3±0.1、0.2±0.1、0.4±0.1h,t_1/2分别为1.9±1.3、1.0±0.6和2.8±1.5h,AUC_0-t分别为8.9±7.2、16.3±12.3和59.5±25.5ng·h·ml^-1;各剂量组t_1/2及k_e与剂量无关(P>0.05);口服生物利用度<6%。结论: 静脉及灌胃给药后,9-硝基喜树碱在犬体内的动力学过程符合二室模型,在本实验所用的剂量范围内为线性动力学过程。9-硝基喜树碱灌胃给药后吸收迅速,口服生物利用度低。     

HPLC-MS 法测定犬血浆中三七皂苷R1的血药浓度及其药代动力学

目的: 建立用于测定三七皂苷R1 血药浓度的液相色谱-质谱联用分析方法, 并研究三七皂苷R₁在犬体内的药代动力学。方法: Beagle 犬6 只iv0.7131 mg·kg^-1 三七皂苷R₁后采集系列血样, 利用LC-MS 联用系统测定血浆药物浓度, 并用3P97 软件拟合求算药代动力学参数。结果: 三七皂苷R1 浓度在5.0 ~ 2 000 μg·L^-1 内, 线性关系良好(γ =0.9996) 。绝对回收率高于90 %, 日内、日间RSD 均小于15 %, 符合生物样品分析要求。6 只Beagle 犬iv 0.7131 mg·kg^-1 三七皂苷R1 后的血药浓度-时间曲线符合二室模型, 其分布和消除相的半衰期分别为38.59 min 和230.06 min 。曲线下面积(AUC) 、中央室分布容积(V) 和血浆清除率(CL) 分别为67353.75 mg·min·ml^-1, 3.53 L·kg^-1 和0.1068L·kg^-1·min^-1 。结论: 建立的LC-MS 联用方法专属性强, 灵敏度高, 可用于三七皂苷R₁的体内定量分析。     

西洛他唑的高效液相色谱法测定及药动学研究

目的 建立测定人血浆中西洛他唑含量的高效液相色谱(HPLC) 法, 并研究西洛他唑片在健康人体内的药动学。 方法 色谱柱为Hypersil C18 柱(4.6 mm ×200 mm, 5 μm), 流动相为乙腈-水(45∶55), 流速1.0 ml·min^-1, 柱温30 ℃, 检测波长254 nm, 西洛他唑血浆样品以2 mol·L^-1NaOH-无水乙醚(1∶4) 提取, 以地西泮为内标。 结果 标准曲线线性范围20 ~ 2 000 μg·L^-1 (r=0.9999)。血浆中西洛他唑最低检测限为10 μg·L^-1。平均提取回收率为80.2 % ±3.6 %, 平均方法回收率为97.0 % ±3.8 %, 日内RSD ≤5.8 %, 日间RSD ≤10.1 %。应用该法研究了10 例健康志愿者口服100 mg 西洛他唑后的药动学;其体内过程符合二室模型, t_max 为3.58±1.08 h, C_max 为920 ±230 μg·L^-1, AUC_0-48 为11.0±3.3 mg·h^-1·L^-1。 结论 此法简便、快速, 适用于药物分析, 其药动学数据可为临床合理用药、新药研制及剂型改进提供理论依据。     

高效液相色谱串联质谱法测定人血浆中吲达帕胺浓度及生物等效性研究

目的: 建立一种简单、有效且灵敏的液质联用法(LC-MS/MS)检测人血浆中吲达帕胺浓度。方法: 血浆样品经叔丁基甲基醚(tert-Butyl Methyl Ether, MTBE)萃取后,选安定作内标。色谱柱为Luna C₁₈柱(150 mm×2.0 mm, 5 μm);流动相为 10 mmol/L 甲酸铵(含0.1%甲酸):甲醇=(20∶80,V/V);流速为 0.30 mL/min;采用ESI+ MRM方式监测;源电压:3.5 kV;源温度:100 ℃;吲达帕胺和安定的离子选择通道分别为:m/z 366.2→132.1,285.2→154.1。结果: 吲达帕胺线性范围为 0.536~45.733 ng/mL,最低检测浓度为 0.536 ng/mL,提取回收率在69%~81%,日内、日间RSD均<15%。由湖南协力药业有限公司生产生产的吲达帕胺缓释片(1.5 mg/片)与施维雅(天津)制药有限公司生产的吲达帕胺缓释片(商品名:纳催离,1.5 mg/片)经单次及多次给药试验研究,具有生物等效性。结论: 本方法简单、灵敏,可准确检测人体血浆中吲达帕胺的浓度。     

微透析-高效液相色谱法测定米诺环素大鼠血液和脑内的药动学

目的: 研究米诺环素在大鼠血液和脑内的药动学。方法: 采用微透析结合高效液相色谱技术,测定米诺环素大鼠血浆蛋白结合率;大鼠尾静脉注射米诺环素,测定给药后 10 h 内不同时间点大鼠血液、海马CA1区中游离药物的浓度。结果: 米诺环素大鼠血浆蛋白结合率为 82.08%,给药后迅速进入脑组织,在给药后 3.83 h 左右浓度达到峰值,其后缓慢下降,脑组织的游离药物-时间曲线下面积(AUC_{0-10 h})可达血液的 62.42%。结论: 微透析结合高效液相色谱技术可以测定米诺环素的大鼠血浆蛋白结合率,并实现大鼠血液和脑组织中游离米诺环素浓度的动态监测。结果表明米诺环素易于透过血脑屏障,且能长时间维持较高浓度,从而发挥其神经保护作用。     

贝那普利对氨氯地平药代动力学的影响

目的:比较受试者口服复方贝那普利(含盐酸贝那普利10 mg 和苯磺酸氨氯地平5 mg) 和氨氯地平(5 mg) 后体内氨氯地平的药代动力学特征, 研究氨氯地平和贝那普利之间的相互作用。方法:采用两制剂、两周期随机交叉试验设计, 12名男性健康受试者自身对照, 口服复方贝那普利或氨氯地平。应用LC/MS/MS 方法测定氨氯地平的血药浓度, 并采用WinNonLin 软件计算药代动力学参数。结果:复方和单方制剂中氨氯地平的平均药代动力学参数如下:C_max 分别为(2.6 ±0.6) 、(2.8 ±0.7) μg/L, t _max 分别为(5.8 ±1.3) 、(5.3 ±1.0) h, AUC_{0 -144} 分别为(99 ±39) 、(109 ±26) μg^。L^-1。h, t _1/2分别为(37 ±6) 、(44 ±12) h 。各参数在两制剂间均无统计学意义。结论:贝那普利对氨氯地平在人体内的药动学过程没有显著影响。     

同时测定人血浆中甲砜霉素和前药甲砜霉素甘氨酸酯浓度及其药代动力学研究

目的: 建立一种简单、灵敏同时测定人血浆中甲砜霉素(TAP)及其前药甲砜霉素甘氨酸酯(TG)的高效液相色谱法。方法: 24名健康志愿者随机分为三组,分别静脉滴注低(0.5 g)、中(1.0 g)、高(1.5 g)三个剂量的注射用盐酸甲砜霉素甘氨酸酯;采用乙酸乙酯萃取法处理血浆,色谱柱为 Hypersil ODS₂(5 μm,4.6 mm×200 mm 大连,依利特),流动相为乙腈-水(0.003 mol/L 四丁基溴化铵与 0.056 mol/L 乙酸铵) =13∶87(pH=6.6),流速为 1 mL/min,检测波长为 224 nm。结果: 血浆中TAP和TG标准曲线线性范围均为 0.78~100 μg/mL,高、中、低(0.78、6.25、100 μg/mL)三种浓度的日间和日内变异均小于 15.0％,血浆经室温 4 h 或者-70 ℃ 冷冻放置,冻融两次均显示TAP稳定性较好。结论: 该方法灵敏、准确、简单、快速,可用于TAP和TG的药代动力学研究。