游离果胶酶和固定化果胶酶的酶学性质

研究游离果胶酶和固定化果胶酶的酶学性质,结果表明,游离酶的最适温度为55℃,最适pH为4.0,明胶固定化酶的最适温度为60℃,最适pH为3.5,固定化酶的稳定性比游离酶更好,底物与固定化酶的亲和力增强。     

磁性复合载体固定生姜蛋白酶的酶学性质研究

文章采用海藻酸钠与明胶为载体,对磁性Fe3O4进行包埋,使其形成磁性复合载体凝胶微球,经戊二醛交联后,固定生姜蛋白酶,得到磁性复合载体固定生姜蛋白酶;在预实验的基础上,确定影响制备固定化生姜蛋白酶的主要因素;并研究在最优条件下,固定化生姜蛋白酶与其游离酶的酶学性质。结果表明:磁性复合载体固定化生姜蛋白酶的酸碱稳定性范围为pH 3.0～7.0,在20～60℃内具有较好的抗热性,其最适pH为4.0,温度为50℃,表观米氏常数Kmapp为3.162 mg/mL;在此条件下固定60min,制备的固定化生姜蛋白酶剩余酶活力可达78.69%。重复使用10次后,酶活力剩余53%;在4℃下储存10d,酶活力仍保留50.66%。说明在最优工艺条件下所制备的固定化酶机械强度大,弹性好,操作稳定性强,酶活力回收率高。     

明胶固定化果胶酶的制备及酶学性质研究

以明胶为载体、戊二醛作为交联剂制备固定化果胶酶，对其固定化条件和酶学性质进行了研究。结果表明：以15％明胶为载体、5％戊二醛为交联剂、1g明胶固定果胶酶4mg制备的固定化酶，其酶活力回收率达45．85％：固定化酶的最适温度55℃，最适pH3．4，Km^app值3．48mg／ml；固定化酶的酸碱稳定性与温度稳定性均得到提高，连续使用7次后固定化酶相对活力还剩下47．06％。     

磁性壳聚糖微球固定化黄嘌呤氧化酶及其酶学性质的研究

本文利用化学共沉淀法制备Fe_3O_4磁性颗粒,并以此为磁核通过乳化交联法制备磁性壳聚糖微球,以环氧氯丙烷对微球表面进行活化,用于黄嘌呤氧化酶的固定化研究。以微球表面的环氧基密度为活化指标,确定了活化过程的最适工艺条件:环氧氯丙烷体积分数为40%,Na BH4浓度为0.60 g/L,NaOH浓度为1.20 mol/L。对微球进行结构表征,结果表明:壳聚糖成功包裹了Fe_3O_4磁性粒子,且已活化微球的表面具有环氧基活性基团;Fe_3O_4磁性粒子、未活化和已活化磁性壳聚糖微球的中径分别为2.16、20.30和24.69μm。活化结束后,将黄嘌呤氧化酶固定在磁性微球上。以酶活为指标,确定最适固定化工艺为:时间1 h,温度30℃,pH8.0。对固定化黄嘌呤氧化酶的酶学性质研究,结果表明:酶的最适作用温度为48℃,最适作用pH为8.5,酶具有良好的热稳定性、pH稳定性及操作稳定性。     

果胶酶产菌细胞固定化及其产酶研究

介绍产果胶酶的黑曲霉细胞的几种不同的固定化方法，及其所制备的固定化细胞产果胶酶的效果比较。研究比较的结果认为海藻酸钠包埋法和卡拉胶包埋－增殖法作为黑曲霉细胞的两种固定化方法用来制备果胶酶是可行的。     

脂肪酶在磁性纳米粒子上固定化及其酶学性质研究

以Fe_3O_4纳米粒子为载体,碳化二亚胺为交联剂,共价结合制备固定化脂肪酶,探讨脂肪酶固定化影响因素,并对固定化脂肪酶性质进行研究;运用TEM测定其粒径,用FTIR检测脂肪酶—Fe_3O_4磁性纳米粒子耦联。结果表明,脂肪酶固定化适宜条件为:200 mg磁性纳米粒子,加入2 ml 2.5mg/mL脂肪酶磷酸盐缓冲液(0.1mol/L,pH7.5),在4℃超声分散45 min,固定化酶最适pH为7.0,最适温度为45℃,均与游离酶相似;与游离酶相比,该固定化脂肪酶热稳定性明显提高,并具有良好操作和存储稳定性。     

固定化酸性蛋白酶载体的选择及其性质

选用海藻酸钠（sodium alginate,SA）分别与3 种天然高分子材料制作复合凝胶载体,以酶活回收率为评价指标,采用单因素试验和正交试验确定最佳载体材料及最佳固定化条件。结果表明,SA-黄原胶复合凝胶为最佳载体,其最佳工艺条件为：SA与黄原胶质量比例为6∶1,CaCl2质量浓度为5.0 g/100 mL,固定化时间为2.5 h,在此条件下固定化酶活回收率为74.12%。对固定化酸性蛋白酶酶学性质进行研究,结果表明,其最适pH值为3.0、最适反应温度为45 ℃,均与游离酶相同,热稳定性优于游离酶,动力学参数Km值高于游离酶,操作半衰期为17.28 d。     

根霉碱性果胶酶的酶学性质研究

采用本实验室分离保藏的根霉菌GZ-11进行液体发酵,生产碱性果胶酶。确定了发酵周期,并研究了该酶的酶学性质。结果表明:PG酶活可达186.7万U/mL,PGL酶活可达21.3U/mL。PG的最适温度是50℃,pH稳定范围是7.0～9.0,最适pH是8.6;PGL的最适温度是45℃,pH稳定范围是8.8～10.6,最适pH是9.4。      

多酚氧化酶的固定化及其酶学性质研究

游离多酚氧化酶在使用过程中容易流失,无法重复利用。文章主要研究了低成本、高效率的两种固定化方法:海藻酸钠包埋法和戊二醛交联法,确定了其最优固定化条件,分别为海藻酸钠包埋法:2.5%CaCl₂,2.5%海藻酸钠,固定化时间2h;戊二醛交联法:1.25%戊二醛,振荡固定pH 4.5,酶与载体质量比75(mg/g),固定化反应时间6.5h。同时对游离多酚氧化酶及固定化多酚氧化酶的酶学性质进行了研究。结果表明:游离酶、海藻酸钠包埋法固定多酚氧化酶(polyphenol oxidase immobilized by sodium alginate,A-PPO)和戊二醛交联法固定多酚氧化酶(polyphenol oxidase immobilized by glutaraldehyde crosslinking,C-PPO)的比活力分别为864,490,371U/mg,A-PPO和C-PPO的酶活回收率分别为18.6%和24.0%。同时,固定化酶在pH稳定性、热稳定性上优于游离酶,戊二醛交联法固定酶的效果优于海藻酸钠包埋法。     

果胶酶产生菌细胞固定化及其产酶研究

介绍产果胶酶的黑曲霉细胞的几种不同的固定化方法、及其所制备的固定化细胞产果胶酶的效果比较。研究比较的结果认为海藻酸钠包埋法和卡拉胶包埋──增殖法作为黑曲霉细胞的两种固定化方法用来制备果胶酶是可行的。     

黑曲霉胞外果胶酶特性的研究

对筛选出的A.niger A-03菌种产果胶酶的一些酶学性质进行了研究。结果表明：最适温度为50℃～55℃，随着温度的升高，酶的热稳定性下降；最适pH为4．0，果胶酶活力稳定的pH范围为3．5～4．5；最适盐浓度为0．2mol/L；Km值为147.1mg/mL；最大反应速度Vmax为19.2mg／min／mL；Ca^2 、AI^3 对果胶酶有激活作用，Hg 、Cu^2 对果胶酶有抑制作用。     

改性磁性壳聚糖微球固定化乳糖酶

通过反相悬浮聚合法,以甲基丙烯酸2-羟乙酯(HE-MA)与甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)为单体,过硫酸铵为引发剂制备得到改性磁性壳聚糖微球。进一步以改性磁性壳聚糖微球为载体,通过吸附、共价结合以及戊二醛交联反应三方协同作用固定乳糖酶。对影响固定化的各种因素进行优化,确定固定化乳糖酶最适条件为:载体在0.1 mol/L、pH 7.0的磷酸缓冲液中充分溶胀后,按2.0 U/mg载体的添加量加入乳糖酶,4℃吸附3 h,再添加0.1%戊二醛交联4 h;最终所得的固定化乳糖酶活为685 U/g载体,酶活回收率为34.3%。固定化后的乳糖酶的pH稳定性和热稳定性都较游离酶有明显提高;连续操作10次后,固定化酶活仍保持在70%以上,具有良好的操作稳定性。     

果胶酶对芦荟汁的澄清作用及性质的影响

为提高芦荟汁的澄清度,以果胶酶为澄清剂,透光率为评价指标,研究了酶解时间、酶解温度及加酶量对芦荟汁澄清效果的影响,通过单因素试验及正交试验得到最佳工艺条件是：果胶酶添加量0.1 μL/g,酶解时间120 min,酶解温度45 ℃,在此最佳条件下,芦荟汁的透光率为91.1%。酶解后的芦荟汁在感官品质方面,颜色变浅、涩味变淡、悬浮物减少、澄清度提高;在理化性质方面,pH值稍有下降、透光率提高了31.2个百分点,还原糖及可溶性固形物含量均提高至原来的2.0倍左右,芦荟多糖含量显著下降。     

磁性复合粒子固定化葡萄糖氧化酶的制备

采用化学共沉淀法,制备了Fe3O4粒子,并将带正电荷的PDDA吸附在其表面,形成PDDA-Fe3O4磁性复合体。为提高葡萄糖氧化酶的稳定性和重复利用率,以自制的PDDA-Fe3O4磁性复合体为载体,通过静电引力来固定葡萄糖氧化酶。研究结果表明,PDDA-Fe3O4磁性载体表面的Zeta电位为47.6mV,载体平均粒径为275d.nm。葡萄糖氧化酶固定化最佳条件为：温度15℃,pH=6,酶与载体质量比为15mg/g。固定化酶的热稳定性、pH稳定性及重复使用性能都有很大的提高。     

分光光度计法测定果胶酶活力的方法研究

对影响分光光度计法测定果胶酶活力的因素进行了研究,结果表明,不同的测量波长、DNS试剂用量、果胶用量和果胶酶稀释倍数对果胶酶活力测定结果都有显著影响。最终确定适宜的波长为540nm、DNS试剂(3g/L)用量为2.5mL、果胶(5g/L)用量为1mL、酶液稀释倍数为1000倍。     

果胶酶对芦荟凝胶汁澄清效果的研究

芦荟凝胶中因含有果胶物质,制得的原汁易产生浑浊、沉淀等现象,严重影响产品的稳定化,澄清是芦荟凝胶稳定化关键技术之一。利用果胶酶澄清芦荟凝胶汁有快速、简便、效果好等特点,在生产中有重要的应用价值。该文用果胶酶对芦荟原汁进行了单因素试验及最佳澄清工艺条件的研究。结果表明,果胶酶用量为60～80mg/L,温度为40～50℃,反应时间在1h左右,透光度可达到97%以上,芦荟凝胶汁中的多糖含量基本不变;在单因素试验的基础上,通过正交试验,得到果胶酶用量为60mg/L,反应温度为50℃,反应时间为45min的果胶酶对芦荟凝胶汁澄清的优化工艺条件。     

磁性壳聚糖固定化转谷氨酰胺酶的研究

本文研究了磁性壳聚糖固定化转谷氨酰胺酶的最佳条件及固定化酶的酶学性质.以Fe3O4为磁性内核,液体石蜡为分散介质,Span-80为乳化剂,采用反相悬浮包埋法制备了磁性壳聚糖微球,并对其形貌的进行观察,结果显示该载体呈规则的球状、表面平滑,平均粒径为5μm,利于磁性微球在反应体系中的分离和酶的固定.以此磁性壳聚糖微球为载...     

一株产果胶酶芦苇内生真菌的分离、鉴定及酶学性质研究

以果胶为唯一碳源,采用十六烷基三甲基溴化胺（CTAB）沉淀法从芦苇中筛选产果胶酶菌株,根据形态观察和内转录间隔区（ITS）序列分析对其进行鉴定,并对其所产果胶酶的酶学性质进行研究。结果表明,筛选出一株高产果胶酶的内生真菌,编号为z4,菌株z4被鉴定为红绶曲霉（Aspergillus nomius）。菌株z4在28 ℃、180 r/min的条件下培养72 h,所得果胶酶酶活为40.52 U/mL。菌株z4所产果胶酶的酶学特性进行研究,发现该菌株所产果胶酶的最适反应温度为45 ℃,果胶酶在30～40 ℃时稳定性较好;该酶的最适反应pH值为6.0,果胶酶在pH 5.0～6.0时具有较好的稳定性;以果胶为底物时的酶促反应米氏常数（Km）为1.60 mg/mL,其最大反应速率（Vmax）为100 mg/（mL·h）。