一株高抑菌活性银杏内生真菌SPE009的鉴定及其培养条件优化

目的:对从银杏叶片中分离出的1株具有高抗菌活性的内生真菌SPE009进行鉴定分析,并优化其培养条件。方法:将SPE009菌株进行形态学和分子生物学鉴定,并以发酵液抑菌圈直径为指标,采用单因素和正交实验对SPE009菌株的装液量、接种量、培养温度、初始p H、碳源、氮源等培养条件进行优化,以提高其发酵液抗菌活性。结果:经鉴定,SPE009菌为草酸青霉菌(Penicillium oxalicum);其发酵液抗金黄色葡萄球菌的最佳培养条件为:葡萄糖含量为20g/L、装液量30m L/100m L、p H7.0和接种量3%(体积比)。在此条件下,发酵液抗金黄色葡萄球菌的抑菌圈最高可达17.6mm,比优化前提高了21.4%。结论:银杏内生真菌草酸青霉菌SPE009发酵代谢产物具有较好的抗菌活性,为天然抗菌物的开发提供了新来源。      

一株银杏内生真菌红色素稳定性的研究

真菌色素是一个极具应用潜力的食用色素来源。一株从银杏枝条分离的内生真菌SX01,能产生大量的红色素,经鉴定该菌属于产紫青霉（Penicillium purpurogenum）。该菌在PDA液体培养基中静置培养后,经过离心、过滤可得到红色素,该色素为水溶性色素。通过分析红色素特征吸光值的变化,研究了光照、pH、温度、金属离子对该红色素稳定性的影响。结果表明,色素溶液对温度和光照较为敏感,色素在温度〈60℃的稳定性较高,但当温度上升至80℃以上后,色素稳定性较差。色素对光照较为敏感,长时间光照可以使色素色价大幅度下降,影响色素品质。该色素对pH是稳定的,色素提取液在pH10时色价甚至有所增高。金属离子对该色素稳定性影响较小,Zn2+有一定的增色效果,Cu2+、Al3几乎无影响,Fe2+和Fe3+对其有不良影响。     

一株柴胡红景天中内生真菌的抗氧化活性

对柴胡红景天中一株具有抗氧化活性的内生真菌Rb-R-1进行研究,获得其分类地位并评价抗氧化活性强弱。结果表明：这株真菌为Ascomacota门Hypocreales目Neonectria属的N. ramulariae真菌,具有较强的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（•OH）、超氧阴离子自由基（O2－•）、NO2－清除能力和Fe2＋螯合能力,IC50值分别为8.86、4.40、9.65、16.53、1.91 mg/mL;其发酵产物中总酚和总黄酮含量分别达18.12、22.48 mg/g。发酵条件优化结果表明,在以乳糖为碳源、牛肉膏为氮源、装液量90 mL/250 mL、pH 7.0、25 ℃条件下培养10 d时,内生真菌Rb-R-1发酵产物对DPPH自由基的清除率最大,达到93.12%;总酚和总黄酮含量最高,分别为19.14 mg/g和28.25 mg/g。     

产银杏内酯内生真菌的分离与鉴定

利用组织块培养法从健康的银杏根、茎中分离得到116株内生真菌。通过高效液相色谱(HPLC)法对内生真菌的代谢产物进行分析,最终筛选出1株能够产银杏内酯的内生真菌,利用标准曲线法测定其发酵液和菌丝体中总内酯产量约为11.4mg/L。形态学特征和真菌rDNA间隔序列(internal transcribed spacer,ITS)的系统进化分析结果表明,该菌株属于毛霉属,为产银杏内酯内生真菌的首次报道。     

黄芪根内生真菌的分享纯化及其抑菌活性的研究

从黄芪的根中分离出12株内生真菌。以金黄色葡萄球菌（S．au）、地衣芽孢杆菌（B．1iC）、无乳链球菌（S．aga）、大肠杆菌（E．coli）、绿脓杆菌（P．a）和肺炎克雷伯菌（K．pn）这6种细菌为指示菌,采用滤纸片法对12株内生真菌发酵液的乙酸乙酯和正丁醇提取物进行抗菌活性的测定。结果表明乙酸乙酯部位得到的12个测试样品中有11个至少能抑制一种指示菌,占总数的91．67％。其中H803乙酸乙酯部位的样品对6种指示菌表现出不同程度的抑菌活性,在浓度为5mg/mL时对地衣芽孢杆菌和大肠杆菌的抑菌圈直径分别达到24mm和28mm。而正丁醇部位样品的抑菌活性较弱。     

培养条件对八角内生真菌发酵液抗氧化活性的 影响

对八角内生真菌Chaetomium globosum BJEF13产抗氧化活性物质的培养条件进行了研究。在筛选确定基础培养基的基础上,采用单因素试验方法考察了培养基组成及摇瓶发酵条件对菌株发酵液抗氧化活性、菌株生长的影响。基础培养基的筛选结果表明,马铃薯葡萄糖培养基、察氏培养基、马丁培养基、豆芽汁蔗糖培养基等4种常用真菌培养基中,察氏培养基优于其他3种。培养基组成和发酵条件的研究结果表明,当以4%葡萄糖、0.4%的蛋白胨、0.1%K_2HPO_4、0.05%KCl、0.05%MgSO_4和0.001%FeSO_4作为摇瓶发酵培养基时,接种量为10%,装液量为100 mL/250 mL,在初始pH为7.5、28℃、150 r/min条件下振荡培养7 d,该菌株的生长和培养液的抗氧化活性可以达到较好的水平,其生物量平均干重达0.682 6 g/100 mL,5倍稀释的乙酸乙酯萃取液对DPPH自由基的清除率可达57.51%。     

乌拉尔甘草内生真菌的分离及其抑菌活性研究

研究乌拉尔甘草内生真菌及其次生代谢产物的抑菌活性,旨在获得有良好抑菌活性的菌株,寻找新型抗菌物质。以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金色葡萄球菌、短小芽孢杆菌、铜绿假单孢菌、单增李斯特菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、酿脓链球菌、屎肠球菌、粪肠球菌和白假丝酵母为试验菌株,用菌饼法及纸片法对分离的真菌及其次生代谢产物进行抑菌试验。从乌拉尔甘草中分离到46株内生真菌,其中34株内生真菌对指示菌表现出不同的抑菌活性,占总分离菌株的74%;20株内生真菌的发酵液对指示菌株也有一定的抑制作用,占总分离菌株的43%。乌拉尔甘草的内生真菌及其次生代谢产物中存在着丰富的抑菌天然活性物质,这可为新型抗菌物质提供资源。     

一株银杏内生真菌YX-28的鉴定和分析

从银杏样品中分离到一株具有抑菌活性和抗氧化活性的内生真菌YX-28,在PDA培养基上培养7d左右,白色菌落从中央开始逐渐炭化变为黑色;在液体和固体培养中均能产生黑色棍棒状子实体,头部为白色,随时间延长,白色头部消失,子实体变得细长,中心形成空心,但经近紫外线照射、菌体扫刷等处理均不产生孢子。扩增YX-28菌株的18S rDNA以及内转录间隔区(ITS),采用blastn分别进行序列相似性比较,YX-28的18S rDNA序列与Xylaria sp F14相似性最高,达99%,有11个碱基的差异,两者(G+C)%均为47.36%,DNAstar分析显示两者的相似性为99.1%,离散度为0.9%。而ITS序列与Xylaria sp MS358相似性最高(99%),仅有1个碱基的差异,两者(G+C)%分别为44.42%、44.62%,DNAstar分析显示两者的相似性为99.8%,离散度为0.2%。采用PHYLIP构建系统进化树,结果显示YX-28在基于18S rDNA和ITS序列的进化树中都不与其它任何已知菌种处于同一分支。YX-28为炭角菌属真菌,但是否为一新种还有待进一步研究,以期为开发利用这一重要真菌资源提供重要的基础数据。     

三种海藻内生真菌的分离及其抑菌活性研究

从烟台浅海处采集到的鼠尾藻、裙带菜、海带三种海藻表面消毒后用PDA培养基将内生真菌进行分离纯化,将纯化的内生真菌进行液体培养7d后离心,菌丝体烘干研磨后用无水乙醇提取,分别测定发酵液和菌丝体乙醇提取物对七种植物病原真菌的抑菌活性。结果表明:三种发酵液都至少对三种病原菌有大于50%的抑菌活性,裙带菜发酵液对六种病原菌都有大于50%的抑菌率,最高为78.8%,说明它们能产生广谱高效的胞外代谢产物;而菌丝体提取物的抑菌活性并不明显,说明三种海藻内生真菌产生的胞内代谢产物无明显的抑菌活性。     

海带内生真菌的分离鉴定及其抑制乙酰胆碱酯酶活性的发酵工艺优化

本文以青岛海域的海带为原料,对其进行内生真菌的分离纯化,共得到7株内生真菌,采用改良Ellman法对其乙酰胆碱酯酶（ACh E）抑制活性进行筛选,并对其中一株活性最高内生真菌ML-X进行形态学和18S rDNA分子生物学鉴定,通过单因素实验和正交实验筛选出最适合该菌进行液体生长发酵的培养条件。结果表明,分离获得的菌株ML-X为白地霉属,序列号为KY977411,与遗传距离最近的Galactomyces geotrichum strain LMA-21株（JQ668739）同源性达99%。最佳发酵条件为:PS培养基,培养基的初始p H6.0,接种量5%,装瓶量150 m L/500 m L,培养温度31℃,发酵8 d,当发酵液粗浸膏为5 mg/m L时,对乙酰胆碱酯酶的抑制率可达28.91%±0.25%。      

1株具有抑制乙酰胆碱酯酶活性的牡蛎共生真菌的鉴定及发酵条件的优化

研究了牡蛎来源的1株具有较高抑制乙酰胆碱酯酶活性的共生真菌的最佳发酵条件,并采用形态学和分子生物学方法对其进行了鉴定。菌株WFW mL4为球毛壳菌,命名为Chaetomium globosum WFW mL4;其发酵的最佳条件为:SP培养基,初始pH值为6.0,接种量10%,500 mL三角瓶装液量200 mL,在25℃发酵10 d,摇床转速120 r/min。此条件下获得的发酵液粗提物在5 mg/mL时,对乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制率可达到(68.07±3.23)%,光照对该菌株几乎无影响。牡蛎共生真菌的次生代谢产物具有较好的抑制AChE的活性,为抗老年痴呆药物的开发提供了新的来源。     

黄芪发酵过程中内生真菌多样性变化及其发酵液的抑菌作用

以不同发酵时间的黄芪内生真菌发酵液为研究对象,采用Illumina Miseq高通量测序技术揭示黄芪内生真菌发酵过程中真菌多样性的变化。同时,测定发酵液对大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的抑菌作用,并初步揭示其可能的抗菌机理。结果表明,黄芪发酵过程中内生真菌的多样性（Shannon指数）和丰富度（Chao指数）随着发酵时间的延长显著减少（P＜0.05）,真菌的种群组成也发生了变化,未发酵黄芪内生真菌的优势菌属为驼孢锈菌属（Hemileia）和赤霉菌属（Gibberella）,而发酵8 d后发酵液的优势菌属为细极链格孢菌（Alternaria tenuissima）和棘豆弯曲牙管蠕孢菌（Undifilum oxytropis）。此外,随着发酵时间在0～8 d范围内的延长,黄芪内生真菌发酵液的抑菌活性也随之增加,且抑菌作用与发酵液对受试菌株细胞形态的破坏有关。     

卷枝毛霉SN2017发酵产银杏黄酮条件优化

以银杏内共生真菌卷枝毛霉（Mucor circinelloides）SN2017为研究对象,总黄酮产量为响应值,采用单因素试验及响应面法对其产黄酮的发酵工艺条件进行优化。结果表明,卷枝毛霉SN2017产黄酮的最优发酵工艺条件为：初始pH值5.5、发酵温度30 ℃、接种量9.7%、通气量6.5 L/min,在此最优条件下,总黄酮产量为56.63 mg/L,较优化前提高8.09%,为规模化生产提供了理论和实践的基础。     

产胞外多糖罗汉果内生菌的筛选及其发酵条件优化

该研究利用α-萘酚-硫酸法和苯酚-硫酸法从罗汉果中筛选产胞外多糖的内生菌株,采用形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行菌种鉴定,并采用单因素和正交试验对其产胞外多糖的发酵条件进行优化。结果表明,筛选到一株产胞外多糖的罗汉果内生菌株,编号为LHG-3,并被鉴定为韦德曼尼芽孢杆菌（Bacillus wiedmannii）。菌株LHG-3产胞外多糖的最佳培养基为超级肉汤（TB）培养基,在此基础上,经优化得出最优发酵条件为蔗糖2.5%、尿素1.2%、氯化钙0.4%、pH值7.0、接种量8%,在30 ℃条件下培养42 h后,胞外多糖产量达到（1.59±0.03）mg/mL,是优化前的1.9倍。     

罗汉果内生真菌的分离及其发酵产物的抗氧化活性研究

为探究罗汉果内生真菌发酵产物的化学成分及其抗氧化活性,从罗汉果内生真菌中筛选8株菌株的代谢产物进行化学成分试验,用DPPH·清除法和·OH清除法测定发酵产物的体外抗氧化活性。结果表明,8株罗汉果内生真菌发酵产物通过化学成分定性试验,推测可能含有蛋白质、多糖、有机酸、黄酮和醌类等物质。在供试液质量浓度为1 mg/mL时,其中菌株F5发酵液对DPPH·的清除率大小顺序为乙酸乙酯萃取相（96.83%）＞VC（95.77%）＞氯仿相（95.24%）;菌株F5发酵液对·OH的清除率大小顺序为VC（99.36%）＞原液（73.56%）＞水相（61.98%）,表明罗汉果内生真菌发酵产物具有较强的抗氧化作用,并且抗氧化的成分极性较大。     

凤凰单丛茶抗菌活性内生细菌FH01发酵条件的优化

以枯草芽孢杆菌为抑菌试验指示菌,采用从凤凰单丛茶中分离到的内生细菌FH01的无菌发酵液进行抑菌试验,对内生细菌FH01的发酵条件进行研究。通过单因素实验得出,对抑菌活性影响较大的因素为碳源、氮源、初始p H、发酵温度、摇床转速、发酵时间。根据Box-Benhnken中心组合方法对FH01的发酵条件进行六因素三水平试验。结果表明:FH01最佳发酵条件为麦芽提取物用量1.43%(m/v),大豆蛋白胨用量1.67%(m/v),初始p H 5.0,发酵温度36.78℃,摇床转速129.52r/min,发酵时间67.36 h。在此条件下,FH01发酵液对枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径为22.10 mm,与预测值24.10 mm相比,相差仅为2 mm,比优化前抑菌圈直径的平均值14.50 mm(n=3)提高了34.39%。     

纳豆激酶高活性菌株BN-05鉴定及发酵工艺优化

对分离的纳豆激酶高活性菌株BN-05进行了初步鉴定,并对其固态发酵产纳豆激酶的工艺条件进行了优化,旨在提高纳豆激酶的含量。通过形态和分子生物学鉴定BN-05为枯草芽孢杆菌属菌株,优化后发酵工艺参数:大豆破碎度为2,发酵温度为36℃,接种量为5.5%,葡萄糖添加量为2.5%。在优化条件下,BN-05通过固态发酵纳豆激酶活力达到(4 715.26±103.23)IU/g湿黄豆,比之前优化提高137%。     

产抗菌活性红树林放线菌G15发酵条件的优化

G15是分离自广西山口红树林保护区的一株具有较强抗菌活性的放线菌.为了提高其活性物质的产量,以金黄色葡萄球菌为指示菌,对其发酵条件进行了研究.单因素实验表明,其最佳的发酵培养基为:可溶性淀粉20g,酵母粉15g,NaCl30g,蒸馏水1000mL;最佳培养条件为:接种量15％、装液量为30％、培养时间为168h,初始pH值为7 5.优化后G15发酵液的活性提高了3倍左右.