Red同源重组在大肠杆菌基因敲除中的应用

大肠杆菌基因敲除技术发展迅速,各种新型技术的出现使得其基因组的改造较以往更为快速、简单,尤其是Red同源重组技术在大肠杆菌基因敲除中的应用已经越来越成熟。综述了几种不同的Red同源重组技术,并分析了每种方法的原理及操作策略,指出了各种方法的特点及优势。     

CXCL4基因敲除小鼠的饲养、繁殖及基因型鉴定

目的饲养、繁殖并鉴定CXC趋化因子配体4[chemokine(C-X-C motif)ligand 4,CXCL4]基因敲除小鼠,为深入研究CXCL4的生物学功能奠定基础。方法将引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,剪取繁殖成功的子代小鼠耳朵,提取其基因组DNA,采用PCR法鉴定小鼠的基因型;比较野生型小鼠和CXCL4敲除的纯合子小鼠的体重变化及结直肠的长度,通过HE染色观察野生型小鼠和CXCL4敲除的纯合子小鼠的结直肠形态结构;采用ELISA法验证CXCL4野生型和纯合子小鼠血清中CXCL4的表达。结果繁殖成功的子代小鼠有3种基因型:野生型、杂合子及纯合子;4、10周龄雌性纯合子小鼠体重明显重于同龄的野生型小鼠(P0.05),6、10周龄雄性纯合子小鼠体重明显重于同龄的野生型小鼠(P0.05);6周龄雌性纯合子小鼠结直肠长度明显长于同周龄的野生型小鼠(P0.05),但结直肠的形态结构无显著改变;纯合子小鼠血清中CXCL4的表达量明显低于WT小鼠(P0.05)。结论成功获得了CXCL4基因敲除纯合子小鼠,为深入研究CXCL4的生物学功能奠定了基础。     

细菌基因敲除策略及其在维氏气单胞菌研究中的应用

基因敲除技术是20世纪80年代发展起来的一种分子生物学技术,目前已广泛应用于微生物基因功能等相关领域的研究中。维氏气单胞菌(Aeromonas veronii,A. veronii)是气单胞菌科气单胞菌属的一种,近年来,该菌引发疾病的报道逐年增多,因此,对其致病机制的研究显得尤为重要。本文对细菌不同基因敲除策略及其在A. veronii基因功能研究中的应用作一综述,旨在为A. veronii致病机制的深入研究提供参考。     

黑曲霉苹果酸酶基因的敲除及其功能研究

通过敲除黑曲霉(Aspergillus niger)菌株ATCC1015的苹果酸酶(Malic enzyme,ME)基因,研究了ME基因敲除对黑曲霉TCA循环相关代谢的影响。利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的转化方法转化黑曲霉,通过同源重组敲除黑曲霉ME基因,筛选ME基因敲除菌株,获得了遗传性能稳定的ME基因敲除菌株。通过发酵实验,对比了野生菌株和ME基因敲除菌株在代谢产物累积方面的差异,发现ME基因敲除菌株的TCA循环中各种有机酸的产量与野生菌株相比没有明显变化。表明,ME基因的敲除对TCA循环没有产生明显影响。     

Pten敲除对Rad51基因表达的影响及其机制

目的研究Pten敲除对Rad51基因表达的影响及其可能的机制。方法采用半定量RT-PCR法和克隆形成试验比较Pten+/+MEFs与Pten-/-MEFs两种细胞中同源重组修复相关基因Rad51mRNA转录水平的差异,并比较两种细胞对辐射敏感性的差异和辐射后Rad51基因mRNA转录水平的差异及其可能的机制。结果与Pten+/+MEFs细胞相比,Pten-/-MEFs细胞中Rad51基因mRNA的转录水平和对辐射的敏感性显著降低;辐射后以及PI3K/AKT信号通路抑制剂LY-294002作用后,Rad51基因mRNA的转录水平明显增高。结论Pten缺失后Rad51基因表达异常,Pten可能通过PI3K/AKT信号通路来调控Rad51基因的表达。     

基因工程菌生产D-乳酸研究进展

D-乳酸是众多手性物质的合成前体,广泛应用于化工、农业、食品、医药、环保等领域。近年来,随着基因工程理论的不断成熟发展,分子生物学技术在D-乳酸生产领域的应用也逐渐受到关注。介绍了利用基因工程技术改造D-乳酸生产菌株的研究现状,并对未来研究趋势进行了展望。     

假单胞菌基因敲除方法研究进展

基因敲除是近年来十分热门的基因工程技术,假单胞菌(Pseudomonas)作为一种常见细菌,应用十分广泛,因此,对假单胞菌进行基因敲除改造有着十分重要的意义。总结了假单胞菌基因敲除技术成功案例,并对2种基因敲除系统进行了比较,包括同源重组关键步骤的转化方式、基因敲除方法的选择、同源臂长度的选择等。     

林可霉素生物合成基因簇中调控基因lmbU的功能研究

研究了林可霉素生物合成基因簇中调控基因lmbU的功能.通过构建重组质粒pLIN-DU和pLIN-U分别对林可霉素工业生产菌株Streptomyces lincolnensis的lmbU基因进行同框敲除和基因倍增,获得相应突变菌LIN-DU和LIN-U后,对突变菌发酵液进行生物效价测定和LC-MS分析,探讨lmbU基因对...     

植物基因分离技术的发展

1953年Watson和Crick发现DNA双螺旋结构,标志着对生物遗传物质一基因的研究进入了微观的水平。植物基因分离一直是当今生物技术研究的热点,分离植物的功能基因便于对基因的结构和表达进行研究,并可以经转基因技术对已有植物的某些性状进行改良,使其满足人们的要求,从而造福于人类。     

废水硫自养反硝化的电子供体与功能基因研究进展

由于含氮废水的排放和含氮肥料的大量使用,氮污染成为一个日益严重的问题。生物处理的效率高、成本低、对环境友好,是废水脱氮的主要处理技术之一。硫自养反硝化由于不需要额外的碳源、产泥量少等特点而得到广泛关注。文章对单质硫、硫化物、硫代硫化物作为电子供体进行反硝化脱氮的研究进展进行了综述,探讨了硫自养反硝化的代谢途径和影响机制,对几种硫自养反硝化的影响因子进行了概述。在此基础上分析了硫自养反硝化微生物以及nar、nir、nor、nos等几种反硝化功能基因,并对反硝化工艺的发展和联用技术提出展望。     

作为基因载体的低分子量壳聚糖的制备及研究进展

低分子量壳聚糖作为非病毒性基因治疗载体有着广阔的前景,已成为研究的热点。综述了低分子量壳聚糖的制备方法以及载基因的研究进展,并讨论了影响转染的因素。     

新型汽油抗爆剂发展研究

简述了国内外汽油抗爆剂的发展概况,对现有常规抗爆剂进行了评述。由于金属类抗爆剂存在对机车和环境的损伤问题,认为金属类抗爆剂将逐渐退出历史的舞台,高效环保型有机抗爆剂将是今后的发展方向。结合爆震原因、抗爆机理以及过氧化物反应规律,认为抗爆剂在起到抗爆作用时,各个基团是相互独立抗爆的,我们称之为基团贡献法,在此基础上总结出了高效环保型有机抗爆剂应该具有的基本性质,并认为基于芳基的异构类化合物将可能成为高效环保型抗爆剂的主要结构。     

EVAC/玻纤/陶瓷/铝合金复合材料缺陷的敲击检测方法

针对乙烯-乙酸乙烯酯塑料(EVAC)/玻璃纤维/陶瓷/铝合金复合材料在生产过程中出现的脱粘缺陷,开展了缺陷试样制备方法研究和多通道自动敲击检测工艺研究.采用两种方法制备缺陷试样,经过试验对比分析,发现热压罐真空辅助成型方法制备的缺陷试样更适合采用敲击检测方法进行检测.通过对缺陷试样的敲击试验,得出提高敲击通道数和频率会...     

功能性涂料的研究进展

功能性涂料指除了装饰和防护作用外,兼有某些特殊功能的涂料。综述了功能性涂料的种类和机理,以及研究进展。     

离子液体的研究进展

文章主要概述了离子液体及其研究进展概况,离子液体的种类特性以及合成方法。重点归纳了离子液体功能化制备以及离子液体在有机合成、催化化学中的应用,并指出了离子液体在大规模工业应用方面存在的问题。     

Progress and Prospects of Anti-HBV Gene Therapy Development

Despite the availability of an effective vaccine against hepatitis B virus (HBV), chronic infection with the virus remains a major global health concern. Current drugs against HBV infection are limited by emergence of resistance and rarely achieve complete viral clearance. This has prompted vigorous research on developing better drugs against chronic HBV infection. Advances in understanding the life cycle of HBV and improvements in gene-disabling technologies have been impressive. This has led to development of better HBV infection models and discovery of new drug candidates. Ideally, a regimen against chronic HBV infection should completely eliminate all viral replicative intermediates, especially covalently closed circular DNA (cccDNA). For the past few decades, nucleic acid-based therapy has emerged as an attractive alternative that may result in complete clearance of HBV in infected patients. Several genetic anti-HBV strategies have been developed. The most studied approaches include the use of antisense oligonucleotides, ribozymes, RNA interference effectors and gene editing tools. This review will summarize recent developments and progress made in the use of gene therapy against HBV.     

动物乳腺生物反应器的应用及研究进展

动物乳腺生物反应器是利用转基因技术获得药物蛋白的动物个体表达系统,其利用乳腺特异性调控元件指导外源基因在乳腺中特异地表达,以转基因动物的乳腺组织生产药用重组蛋白。本文就动物乳腺生物反应器的操作流程、应用、优点、存在的问题及其国内外研究进展和产业化现状作一综述。     

Current Status of Gene Therapy Research in Polyglutamine Spinocerebellar Ataxias

Polyglutamine spinocerebellar ataxias (PolyQ SCAs) are a group of 6 rare autosomal dominant diseases, which arise from an abnormal CAG repeat expansion in the coding region of their causative gene. These neurodegenerative ataxic disorders are characterized by progressive cerebellar degeneration, which translates into progressive ataxia, the main clinical feature, often accompanied by oculomotor deficits and dysarthria. Currently, PolyQ SCAs treatment is limited only to symptomatic mitigation, and no therapy is available to stop or delay the disease progression, which culminates with death. Over the last years, many promising gene therapy approaches were investigated in preclinical studies and could lead to a future treatment to stop or delay the disease development. Here, we summed up the most promising of these therapies, categorizing them in gene augmentation therapy, gene silencing strategies, and gene edition approaches. While several of the reviewed strategies are promising, there is still a gap from the preclinical results obtained and their translation to clinical studies. However, there is an increase in the number of approved gene therapies, as well as a constant development in their safety and efficacy profiles. Thus, it is expected that in a near future some of the promising strategies reviewed here could be tested in a clinical setting and if successful provide hope for SCAs patients.     

在教学中推行微型化学实验势在必行

微型化学实验是当今化学教学中的重要变革之一。本文简单介绍了微型化学实验的特点和当前国内外发展的概况，倡议在我省的化学中尽快推行微型化学实验     

声学功能橡胶研究进展

介绍了橡胶作为声学功能材料,在吸声、隔声以及透声等声学领域的应用原理和研究现状,并展望了其发展方向。