急性砷中毒大鼠心肌的电镜细胞化学观察

本实验是把显示葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)的电镜细胞化学技术应用于研究急性砷中毒大鼠心肌G-6-Pase活性的变化,目的在于从亚显微水平上进一步探讨砷对心肌结构和功能的影响。选用健康wistar大鼠20只,随机分成实验组和对照组,每组10只。实验组大鼠每天自由饮用含As_2O_350PPm的蒸馏水,对照组饮用蒸馏水。35天后急性处死取其心尖部组织,置于4％多聚甲醛+1％戊二醛内前固定,入孵育液,37℃下孵育60min,1％锇酸后固定,常规脱水包埋,超薄切片,不经电子染色进行电镜观察。     

日本脑炎病毒感染鼠脑神经元的超微结构研究

多种节肢动物传播的人类病毒性脑炎病毒能在鼠脑神经元内复制、增殖、并产生严重的细胞病变。本研究应用透射电镜观察日本脑炎病毒(JEV)感染小白鼠后,发病动物大脑海马回神经元的超微结构病变特征以及病毒在细胞内增殖的形态特点。7—8克小白鼠,脑内接种JEV(京卫研_1A_2株)病毒悬液,发病后经麻醉取大脑海马回部位脑组织,按常规固定、脱水、Epon812包埋、半薄切片经精确定位后制作超薄切片,Phiilps EM-400T电镜观察。     

不同包埋剂对半薄切片甲苯胺蓝染色效果的影响

目的:探讨不同包埋剂对半薄切片甲苯胺蓝染色效果的影响。方法:切取大鼠的坐骨神经及肾脏组织,经戊二醛-锇酸双重固定,乙醇、丙酮梯度脱水后,分别用Epon812和Eponate12包埋聚合,利用超薄切片机制备厚度为1.5μm的半薄切片,切片经甲苯胺蓝染色,在光镜下观察半薄切片的染色效果。结果:Eponate12包埋的半薄切片经甲苯胺蓝染色后,颜色更鲜艳,微细结构更清晰,图像反差更好。结论:Eponate12包埋的半薄切片经甲苯胺蓝染色后更有利于在光镜下观察组织的微细结构。     

高分辨电镜放射自显影术及计量方法

高分辨放射自显影(ARG)是作为特殊分子在细胞内或组织内定位的一个好方法。除了改进ARG的方法以外,达到高分辨的最重要途径是定量分析。根据Blackett假想粒的理论,本文改进了他计数用的透明复盖膜并在国内首次设计了计算机数据处理程序。材料与方法电镜GRG用人类白血病HL60细胞与氚标记的烷基溶血磷脂(ALP,ET-18-OCH_3)共同孵育24小时,经常规固定、脱水、包埋、700A超薄切片用铂圈法复盖1:2.6V/V稀释的IlfordL_4核乳胶,呈紫色干涉光为适宜厚度,4℃暗室曝光5个月,用3种不同显影剂显影(图     

甲状腺胶性腺瘤及乳头状癌的超微结构

采用电镜观察肿瘤细胞,提高细胞结构的分辨能力是肿瘤形态学研究的重要手段。本研究对比观察了甲状腺胶性腺瘤及乳头状癌的超微结构,并探讨了不同超微结构特征对癌的诊断意义。材料来自北医第一附属医院外科手术室的手术切除标本,共12例胶性腺瘤及5例乳头状癌。组织切成1mm小块固定在3％戊二醛及1％锇酸后固定,环氧树脂618包埋超薄切片经醋酸铀及枸椽酸铅双染色。JEM100CXⅡ电子显微镜观察,剩余标本固定在10％福尔马林液中作常规病理组织切片及检查。讨论:甲状腺胶性腺瘤和乳头状癌的超微结构有明显不同,尤其显著的是核的变化。胶性腺瘤有较大,而且     

微波辐射的糖元PA-TCH-SP电镜特染

在显示糖元等多糖类物质 (碳水化合物 )的众多染色法中 ,PA- TCH- SP染色法是一种较理想的方法[1] ,其显示糖元颗粒清晰 ,尤其是染色背景较干净 ,非特异性沉淀少 ,但染色时间长 ( 1～3d) [2 ]。为缩短染色时间 ,作者探索用微波技术辅助染色 ,取得较好效果 ,并应用于寄生原虫、人睾丸支持细胞中的糖元显示[3,4 ] 。材料与方法标本包埋、切片 :鼠肝、阴道毛滴虫、人睾丸用戊二醛固定 ,不经锇酸固定或固定 5 min,常规电镜包埋 ;超薄切片 90 nm。染色试剂 :1 %过碘酸 ( PA) ,2 %硫卡巴肼 ( TCH) - 2 0 %醋酸 ( HAc) ,1 %蛋白银 ( SP)。微…     

脾气虚证骨骼肌线粒体超微结构图像分析研究

脾气虚证大白鼠骨骼肌的超微结构变化已作了观察研究,发现线粒体数显著减少,其结构改变表现为肿胀、嵴断裂、空泡化等。本文对线粒体的超微结构作进一步图像分析。实验动物Wistar大白鼠,取正常组、脾气虚证组、四君子汤复健组和自然恢复组的骨骼肌用4％戊二醛固定液作前固定,1％四氧化锇固定液后固定,Epon 812包埋。LKB V型超薄切片机切半薄和超薄切片,半薄切片作光学显微镜观察和修块定位,超薄切片用醋酸铀、柠檬酸铅双重染色,日立H-500透射电镜观察照相,Joyce-Loebl μMAGISCAN图像分析仪对四个组线粒体的面积、周长、长度、宽度(见图1)以及长度与宽度之比进行测定、统计分析,对四个组的上述参数分别作t测验。     

胰腺胰岛分泌细胞的免疫金标记

本实验应用豚鼠抗胰岛素抗体及胶体金探针对常规Epon812包坦后的大鼠胰腺组织胰岛素分泌细胞进行电镜免疫金染色,获得较满意的结果。材料与方法:取大鼠新鲜胰腺组织,常规透射电镜制样。半薄切片光镜下精确定位胰岛。超薄切片捞于不锈钢载网上。免疫金染色程序为:①8％高碘酸钠室温腐蚀20分钟;②0.01MPBS(含1％BSA)pH7.2洗涤3次,每次5分钟;③5％BSA孵育20分钟,以封闭非特异性结合位点;④豚鼠抗胰岛素抗体     

小脑浦肯野细胞酶细胞化学的超高压电镜观察

本研究采用电镜酶细胞化学方法显示小脑浦肯野细胞酸性磷酸酶活性分布,在超高压电镜下进行了观察,探讨了线状溶酶体的存在。实验动物采用 wistar 成年健康大鼠,体重150克左右,乙醚麻醉,用30mM pipes 缓冲液(PH7.4,8％蔗糖)缓冲配制的2％PFA(多聚甲醛)和GLA(戊二醛)混合固定液进行心脏灌流10分钟,立即取小脑切1mm×2mm小块,于4℃继续浸泡固定1小时后,同种缓冲液洗净。用 microslicer(微组织切片机)作成40μm非冻结切片,置入 Gomori’s 改良法配制的孵育液中,37℃恒温振荡孵育40分钟。对照组去除底物,在孵育液中加入氟     

鹅痘样病毒的光镜,电镜观察

禽痘病毒包括鸡痘病毒、金丝雀痘病毒、碛(石弱)痘病毒、鸽痘病毒、鹌鹑痘病毒、麻雀痘病毒、喜八哥痘病毒和火鸡痘病毒等。近年来,鹅痘病毒却偶见报道。我们就扬州郊区发现的病鹅头部和脚上瘤样皮肤病(鹅痘)用光镜、电镜连续观察法对病原的形态及其发生进行研究。1、材料和方法1.1石蜡切片病鹅瘤样组织固定于10％福尔马林中,梯度酒精脱水后,石蜡包埋。组织切片经H.E染色。光镜观察。     

骨髓活检组织超薄切片及细胞化学技术的研究

本文对骨髓异常增生综合症患者的骨髓活检组织,作了环氧树酯包埋前染色的电镜观察,现将此技术方法的初步体会报导如下:取材用骨髓活检针钻取髂后上嵴骨髓组织(5mm×1mm)一块,迅速投入1％戊二醛内(用0.1M二甲胂酸缓冲液pH7.2～7.4配制)。固定将活检组织切成1mm×1mm小块,再放入1.0％戊二醛内固定15分钟,同上的缓冲液清洗3次,每次10分钟。标本分作2份,1份用2.5％的戊二醛继续固定2小时,同上的缓冲液清洗3次后,再用1％O_sO_4(0.2M二甲胂酸缓冲液配制)固定1小时,留作常规超微结构标本制备用。另一份放入0.1M二甲胂酸缓冲液内留作     

心肌线粒体细胞色素氧化酶的图象分析

成年大鼠10只,随机分为实验组(6只)和正常对照组(4只)。实验组大鼠置入密封玻璃容器内,同时放人适量钠石灰。90分钟后,取出动物,麻醉后灌流固定,取左心室前外侧壁组织标本作超微细胞色素氧化酶反应,同时取正常对照组大鼠左心室前外侧壁相同部位标本作对照。细胞色素氧化酶孵育采用DAB结合铈基法,用亚铁氰化钾半还原的锇酸后固定取代电子染色。实验组和对照组标本处理、孵育反应,电镜观察和照相条件等均相同。结果分析随机取样,对两组动物的电镜照片的各50个线粒体结构和细胞色素氧化酶反应进行图象分析。分析参数包括每个线粒体的面积、周长,形状因子(圆形度),     

扁桃酸酰胺作用阴道滴虫的电镜观察

扁桃酸酰胺(Mandelic Amide)已证实为桃叶膏抗滴虫的有效成份,为探讨此成份的杀虫机制,作者曾作了光镜下的形态观察,而对电镜下的超微结构改变未见有过记载。本文就电镜下的观察结果报导如下。观察方法是在培养48小时的滴虫培养管内加入40mg/5ml扁桃酸酰胺,培养48小时后制备样品。另外取一滴虫培养管不加药品作对照组,并与实验管同时进行样品制备。样品制备是将上述两种标本,先以2.5％戌二醛液在室温下作一级固定,15分钟后,用pH7.4磷酸缓冲液水洗1小时,再入1％四氧化锇二级固定2小时。用乙醇进行系列脱水,用环氧树酯包埋处理48小时,作超薄切片,切片用醋酸铀和柠檬铅作双染色,随后在H—600型电镜下观察拍片。     

睡莲(Nymphaea tetragona)叶部厚壁细胞内钙的定位

睡莲(Nymphaea tetragona)叶部厚壁细胞(1),将透过细胞化学法加以钙定位的研究,应用锇酸/焦锑酸钾(osmium tetroxide—potassium pyroantimonate,OTPA)与钙作用产生沉淀,再介著电子显微镜之观察,可成功地对于植物细胞内之钙加以定位(2)。不同发育时期之叶片切成小片之后,经过2.5％戊二醛/2％焦锑酸钾/0.1％单宁酸/0.1M磷酸缓冲液加以2小时的前固定后,再经1％锇酸/2％焦锑酸钾/0.1M磷酸缓行冲液的后固定,经过丙酮系列脱水后再包埋于Spurr胶中,超薄切片将直接观察,或经漂浮处理于50mM EGTA(pH7.9)或蒸馏水(pH 7.9),60℃,1 hr后再加以观察,部分切片则经由醋酸铀及柠檬酸铅双重染色,超薄切片以日立 TEM,H—600,75KV观察。     

用常规透射电镜观察半薄切片——铀—铅—铜浸染技术的应用

在常规透射电镜中,超薄切片的厚度一般不超过0.1微米,否则就看不清样品的细节。但是,使用特殊的标本本浸染方法,选择性地对某些细胞结构染色,就可以在一般透射电镜下观察半薄切片。本实验采用铀—铅—铜浸染技术,选择性地染色一部分细胞器,在75—100KV透射电镜下观察0.25—0.5微米的半薄切片。结果表明,这一技术在超微结构研究中有一定实用意义。实验方法:用2％戊二醛灌注大鼠,取肝、肾、十二指肠和睾丸等组织,切成1立方毫米小块。组织块经缓冲液漂洗后,在42℃下先放入5％醋酸铀水溶液(PH3.5)浸染1小时,再在硝酸铅—硫酸铜—枸椽酸钠溶液中浸染1小时,然后在4℃下用1％饿酸后固定12小时、常规环氧树脂包埋,最后将组织块切成0.25—0.5微米半薄切片,在透射电镜下观察。     

用免疫电镜的方法观察间充质干细胞及再生纤维的超微结构和胶体金标记

本文研究神经再生过程中雪旺氏细胞的功能和作用 ,观察间充质干细胞在体内的存活和功能情况。方法 :以逆转录病毒为载体 ,将EGFP报告基因导入大鼠的骨髓间充质干细胞后 ,注入受损伤的周围神经组织内。三周后取材 ,用FA GA混合固定 ,分为二组 ,A组用K4M低温包埋切片后标记anti EGFP,IgG Au ;B组经冷冻超薄切片后标记anti EGFP ,IgG Au ;观察其超微结构及胶体金标记情况。结果 :电镜下可以观察到A、B二组均呈明显的阳性反应 ,胶体金颗粒均匀地分布在细胞核内及胞浆内。其中K4M低温包埋方法的金颗粒为散在分布 ,超微结构较好 (图 1…     

微波辐射固定及其在免疫金标记技术中的应用

应用微波辐射快速固定大鼠胰腺组织和白血病病人骨髓细胞悬液,再按常规制作电镜超薄切片。包埋后超薄切片免疫金标记β细胞中的胰岛素分泌颗粒显示组织细胞结构清晰,标记率高,(图1)。骨髓细胞悬液包埋前免疫金标记和酶反应定位血小板表面糖蛋白(GPⅡb/Ⅲa)和胞浆内过氧化物酶均呈现阳性结果(图2)。电镜观察结果表明,经微波辐射固定的生物样品能较好地保存细胞的超微结构,抗原性及其酶活性。根据多次反复试验,我们取得的经验是,在进行微波辐射固定生物样品时,电镜样品固定温度和时间以26～28℃,15秒为宜。由于微波辐射加热温度升高很快,我们采用在炉室内四角放置四个盛有     

正常小鼠肾上腺光动力学损伤作用的超微结构研究

利用血卟啉激光对肿瘤进行光动力学治疗,虽已有十余年历史,并已积累了许多临床和实验研究资料,但仍有许多问题有待深入。肾上腺是机体重要的内分泌器官之一,光动力学作用对肾上腺的损伤如何?迄今未见详细的研究报道。本文通过动物实验作了电镜观察。本实验采用正常NIH小鼠,腹腔注射国产扬州血卟啉,剂量为10mg/kg。24小时后于全麻下切开腹壁暴露左删肾上腺,用氦氖激光直接照射。激光波长6328A,照光强度238mW/cm~2,照光剂量100J/cm~2。照光后1、3、6、12、24、48小时分别处死,每批3只,肾上腺组织块经4％甲醛1％戊二醛混合固定后,再以1％四氧锇再固定,Epon812包埋,超薄切片经醋酸铀、柠檬酸铅双重染色,用Philips EM-410透     

细胞内病毒抗原定位的低温包埋及胶体金标记

本文报告使用低温包埋剂Lowicryl K4M对感染细胞进行低温包埋和制作超薄切片,用包被SPA或IgG的胶体金作为第二抗体,采用间接法对两种RNA病毒(脊髓灰质炎病毒和轮状病毒)和两种DNA病毒(单纯疱疹Ⅰ型病毒及SV_(40))在感染细胞中作了定位标记实验。将结果同常规环氧树脂Epon 812包埋的感染细胞包埋前穿透标记和包埋后超薄切片标记进行比较。常规包埋法对细胞超微结构保存良好,但由于高温聚合对病毒抗原活性破坏较大,不能获得理想的金标记结果。使用皂角甙(Saponin)改变细胞膜进行包埋前穿透标记,虽能获得特异性标记,但皂角甙对细胞膜结构破坏严重,不利于进行病毒与细胞相互作用关系的研究,且作用条件及时间不易掌握。以上缺点可通过使用低温包埋法得到解决。     

胃印戒细胞癌浸润转移与免疫超微结构特征的关系

胃印戒细胞癌是一种较其它类型胃癌恶性程度更高的肿瘤 ,其 5年生存率较低主要与肿瘤的生物学特征有直接关系。本文通过免疫组化及电镜技术对 5 3例胃印戒细胞癌进行功能与超微结构相结合的观察 ,对印戒细胞癌浸润性的特征进行探讨。材料与方法　收集 1 995年至 1 999年 2月病理标本中的 5 3例胃印戒细胞癌组织 ,标本均经 1 0 %中性福尔马林固定 ,石蜡切片 ,HE染色、免疫组化癌胚抗原 ( CEA)及层粘连蛋白 ( LN) S- P法检测。同时取其中 6例留取电镜样品 ,戊二醛、锇酸双重固定 ,低粘度包埋剂浸透包埋 ,半薄切片定位 ,超薄切片铀 -铅双重…