基于磁珠法的肉制品DNA快速提取方法研究

本研究建立了一种基于磁珠法的肉类DNA快速提取技术。该技术以十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）为裂解液,70%乙醇为漂洗液,羟基磁性微球为DNA吸附介质,从裂解液浓度、裂解时间、漂洗次数3方面进行优化。研究发现裂解液为2%CTAB、裂解时间10 min,漂洗次数2次时,基因组DNA提取效果最优。本研究建立的磁珠法肉类DNA提取技术可作为基层实验室自建肉类DNA提取方案,用于肉类DNA的快速提取,为肉类食品安全检测提供技术保障。     

基于碱裂解法川贝母的鉴别

利用碱裂解法提取川贝母DNA,考察不同裂解液配比对川贝母DNA质量与电泳成功率的影响,并与现行方法相比较。结果表明,含有200 mmol/L NaCl溶液,5mmol/L Mg_2Cl溶液,1%Triton X-100,1%PVP,1%SDS,2mmol/L EDTA,0.1mol/L Tris-HCl配比液的碱裂解液具有最佳的DNA提取效果,此碱裂解液提取的DNA电泳条带与现行方法一致,可节省15～20 min,单个样品检验成本可降至0.01元。采用该方法对25个市售贝母样本进行鉴定,可快速鉴别出川贝母的真伪。     

果汁DNA提取方法的比较

为了获得高效通用的果汁DNA提取方法,以7种浑浊果汁和6种澄清果汁为研究对象,从前处理方法、裂解液成分、异丙醇沉淀时间等方面对CTAB法进行了改进,并比较了CTAB法、试剂盒法、改良CTAB法的提取效果,结果发现:改良CTAB法提取的浑浊果汁DNA,浓度都在24.10μg/m L以上,澄清果汁的DNA,浓度都在5.72μg/m L以上,且两类果汁的DNA纯度均为1.8左右,同时都能扩增出18Sr DNA的137 bp的条带,从而确定了高效通用的果汁DNA提取方法——改良CTAB法。     

基于简单加权分析的花椒果皮DNA快速提取方法比较研究

目的 开发和探究适用于花椒基因组DNA的快速提取方法。方法 选取8种不同品种的花椒,分别利用3种不同的DNA提取方法,包括一管式植物DNA抽提试剂盒、基于载体的纤维素滤纸提取法和无菌拭子浸入法,进行花椒果皮基因组DNA快速提取,比较不同DNA提取方法在花椒果皮基因组提取中的效果。其中纤维素滤纸提取法和无菌拭子浸入法均通过载体转移进行DNA的快速提取,基于十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide, CTAB)和十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate, SDS)两种不同的裂解液,在3 min以内即可提取DNA并得到聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增体系。通过简单加权(simple additive weighting, SAW)分析,基于PCR扩增能力、提取时间、提取成本、试剂安全性、程序简单性等方面进行综合评分。结果 所选的快速提取试剂盒不适用于花椒果皮这类含次生代谢物较多的实验材料,而无菌拭子、纤维素滤纸两种载体提取得到的花椒果皮DNA均可以进行后续的PCR操作,...     

响应面法优化玛咖蛋白的提取工艺

为了研究玛咖蛋白质提取的最佳工艺条件,玛咖蛋白的提取采用三羟甲基氨基甲烷(Tris(hydroxymethyl)methyl aminomethane,Tris)缓冲溶液提取法。分别考察了Tris浓度、提取时间、提取温度、提取pH以及料液比这五个因素对玛咖蛋白质提取率的影响,并以单因素试验结果为基础,选取了影响较为显著的Tris浓度、提取温度以及提取pH三个因素进行响应面优化试验。结果表明,玛咖蛋白质的最佳提取工艺条件为:Tris浓度0.07 mol/L,提取温度60℃,pH 10,提取时间30 min,料液比1︰45(g/mL)。在此条件下,玛咖蛋白质的提取率为90.67%。     

发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶的提取

确定提取发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶的最佳方法和最佳提取条件。在单因素试验的基础上,采用多指标正交试验设计和综合平衡分析法研究溶菌酶结合非离子表面活性剂法提取发酵乳杆菌细胞壁蛋白酶的裂解液成分和提取条件。结果表明：裂解液的成分为50mmol/L Tris-HCl、150mmol/L NaCl、体积分数3% 吐温-20、2mg/mL 溶菌酶、pH8.9;提取条件为裂解液与菌体的比例10:1(V/m)、保温时间5h、保温温度37℃时酶比活力达38.957U/mg,此时可最大效率的获得发酵乳杆菌的细胞壁蛋白酶。     

动物肌肉组织DNA的提取方法及实时荧光定量PCR检测

以生鲜羊肉、猪肉、鸡肉、牛肉、鸭肉为实验材料,采用SDS法、异硫氰酸胍法、试剂盒法提取动物肌肉组织基因组DNA,对提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳和实时荧光定量PCR检测。结果表明,试剂盒法提取的基因组DNA在浓度和纯度方面均优于SDS法和异硫氰酸胍法。通过对三种提取方法建立的标准曲线进行比较,回归系数(R2)按照质量排序为:试剂盒法≥异硫氰酸胍法>SDS法,扩增效率按照质量排序为:试剂盒法>异硫氰酸胍法>SDS法。三种提取方法的羊源性成分灵敏度检测,最低检出限均为80 pg/μL,但在低浓度检测时试剂盒法的相对标准偏差RSD为0.684%,小于异硫氰酸胍法0.734%和SDS法1.075%;猪源性成分灵敏度检测,SDS法的最低检出限为80 pg/μL,异硫氰酸胍法和试剂盒法的最低检出限均为16 pg/μL,但在低浓度检测时试剂盒法的相对标准偏差RSD为0.092%,小于异硫氰酸胍法4.640%;鸡源性成分灵敏度检测,SDS法和异硫氰酸胍法的最低检出限均为3.2 pg/μL,试剂盒法的最低检出限为640 fg/μL,明显高于SDS法和异硫氰酸胍法。综上所述,试剂盒法提取的基因组DNA更有利于运用实时荧光定量PCR技术进行食物掺假和物种鉴别工作。      

嗜酸乳杆菌细胞壁蛋白酶的提取优化

为了获得较高酶活力的嗜酸乳杆菌细胞壁蛋白酶(CEP),对嗜酸乳杆菌CEP的提取方法进行优化。经过比较超声波破碎法、Ca2+-free法、溶菌酶裂解3种方法,确认溶菌酶裂解法结合使用非离子清洁剂破壁是提取嗜酸乳杆菌CEP的最佳方法。在单因素试验的基础上,采用正交试验对嗜酸乳杆菌CEP的提取工艺进行优化,得出嗜酸乳杆菌CEP的最佳提取方法：用裂解液(50mmol/L Tris-HCl、100mmol/L NaCl、TritonX-100添加量1%、1.5mg/mL溶菌酶,pH 7.8)悬浮菌体(20mL/g),37℃保温3h,4℃、4500r/min离心20min,取上清液。溶菌酶裂解法提取CEP过程中各因素对CEP提取效果的影响依次为：溶菌酶质量浓度＞裂解pH值＞TirtonX-100添加量＞保温时间。     

间接竞争化学发光酶免疫法检测动物源食品中的 呋喃西林代谢物

目的建立动物源食品中呋喃西林代谢物间接竞争化学发光酶免疫检测方法。方法采用活化酯法将衍生后的呋喃西林代谢物半抗原与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)偶联成为包被原;其次,对化学发光液体系、包被原和单克隆抗体的最优稀释倍数及其他反应条件进行优化;最后对该法的灵敏度、特异性、精密度及准确度进行评价。结果化学发光液A液为8 mmol/L对碘苯酚溶液和10 mmol/L鲁米诺溶液(1:1,V:V)混合,B液为每10 m L三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)-盐酸缓冲液加5μL 30%H_2O_2溶液,A液与B液临用前体积比1:1混匀;最优反应条件是包被原和单抗稀释倍数均为800,封闭液为1%脱脂乳,竞争时间30 min,酶标二抗孵育60 min;该法的线性方程为Y=-0.4654X+0.3768(r~2=0.993),线性范围为0.123~2.398 ng/m L,IC50为0.544 ng/m L,批内和批间变异系数分别为1.9%~4.1%和2.8%~5.3%,空白鸡肉样品添加回收率为89.6%~98.0%。结论该检测方法简单快速,可用于实验室或现场动物源食品中呋喃西林代谢物的筛查。     

氢化物发生-原子荧光法测定鸭蛋中无机硒和有机硒

建立鸭蛋中有机硒和无机硒的测定方法,采用pH8.6的三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)缓冲溶液提取,硫酸铵沉淀后获得无机硒溶液,采用原子荧光法测定其中的总硒和无机硒,采用差减法计算有机硒的含量。结果表明,在优化的条件下,方法无机硒检出限0.003mg/kg,线性范围2.0～50μg/L,相对标准偏差3.21%,方法的加标回收率为82.8%～91.0%。该方法简便、灵敏,可为鸭蛋中有机硒和无机硒的测定提供了一种完善检测方法。     

响应面法优化酥李果汁的酶法提取工艺

目的:研究酶解提取酥李果汁的最佳工艺条件,为李深加工利用提供理论参考。方法:以酥李出汁率为指标,在单因素实验基础上采用响应面试验优化,对单一果胶酶、单一纤维素酶、复合酶（果胶酶和纤维素酶）提取酥李果汁的工艺条件分别进行优化。结果:不同加酶方式中对酥李出汁率的影响因素顺序均为酶解温度>加酶量>酶解pH>酶解时间;果胶酶酶解提取酥李果汁的最佳工艺条件为:加酶量0.45 g/L、酶解温度38 ℃、酶解pH3.8、酶解时间72 min,出汁率提高27.13%;维素酶酶解提取酥李果汁的最佳工艺条件为:加酶量0.55 g/L、酶解温度41 ℃、酶解pH4.2、酶解时间105 min,出汁率提高20.18%;复合酶酶解提取酥李果汁的最佳工艺条件为:果胶酶添加量0.45 g/L、纤维素酶添加量0.55 g/L、酶解温度41 ℃、酶解pH4.0、酶解时间87 min,出汁率提高31.79%。三种加酶方式中,回归模型均能较好地反应相应酶制备酥李果浆的出汁率,所得工艺合理可靠。结论:在酶法提取酥李果汁过程中,果胶酶和纤维素酶的不同添加方式均能有效提高酥李出汁率,其中采用复合酶提取酥李果汁效果最佳。本研究成果为贵州李产品开发提供了一定的技术参考。     

ε-聚赖氨酸对鲜榨血橙汁贮藏品质的影响

该文探究ε-聚赖氨酸对4℃冷藏条件下鲜榨血橙汁贮藏期以及贮藏品质的影响。采用国标中规定的方法、高效液相色谱法、顶空固相微萃取-气相色谱与质谱联用法进行追踪检测。结果表明,与未添加ε-聚赖氨酸的鲜榨血橙汁相比,添加200μg/mL ε-聚赖氨酸的鲜榨血橙汁的贮藏期由3 d延长至15 d。在贮藏期内,添加ε-聚赖氨酸对鲜榨血橙汁的呈味物质及色值、pH、可滴定酸、可溶性固形物无明显影响(P> 0. 05);菌落总数、霉菌及酵母菌计数均未超过国家规定限量;蔗糖、葡萄糖、果糖和游离氨基酸的损失率由58. 69%、56. 60%、55. 14%、30. 15%分别降低至18. 73%、3. 05%、1. 28%、26. 63%。4℃冷藏条件下,添加200μg/mL ε-聚赖氨酸可以显著延长鲜榨血橙汁的贮藏期,并且可以减少其可溶性糖和游离氨基酸的损失。     

牦牛肉组织蛋白酶L提取工艺的优化

为了获得提取牦牛肉中组织蛋白酶L的最佳工艺参数,首先采用Plackett-Burman试验对影响酶活力的7个因素进行筛选,发现浸提缓冲液pH值、L-Cys浓度及(NH4)2SO4饱和度3个因素显著影响酶活力。基于该3个因素的最陡爬坡试验、中心组合设计及响应面分析结果表明:3个因素对酶活力的影响大小依次为浸提缓冲液pH值>(NH4)2SO4饱和度>L-Cys;最佳提取工艺为:浸提缓冲液pH值5.68、L-Cys浓度为6.48 mmol/L、(NH4)2SO4饱和度为76.63%。在此条件下,酶活力最高为13.98 U/mg。试验结果与模型预测值吻合良好,说明所建模型切实可行,为进一步研究牦牛肉组织蛋白酶L的提取工艺提供理论依据。     

天然防腐剂柠檬烯在橙汁保鲜中的应用

对柠檬烯乳化及其在橙汁保鲜中的应用进行研究。乳化实验结果表明,添加20g/L 的蔗糖酯SE-15,乳化效果最好,离心前后吸光变化率为26.70%。橙汁保鲜实验结果表明,添加0.25g/L 的柠檬烯保鲜效果较差,贮存期间细菌总数变化,只有第4 天明显低于空白对照,pH 值和感官品质与空白对照相比,始终无明显差异;而添加大于等于0.50g/L 的柠檬烯,保鲜效果明显,在整个检测过程中,细菌总数、pH 值变化和感官品质都明显优于空白对照。     

Hydroxymethylfurfural in fruit puree and juice: preconcentration and determination using microextraction method coupled with high-performance liquid chromatography and optimization by Box–Behnken design

In the present study, a sensitive and rapid method for separation and determination of hydroxymethylfurfural (HMF) in fruit puree and juices was proposed. Dispersive liquid–liquid microextraction (DLLME) coupled with high-performance liquid chromatography (HPLC) was used for extraction and quantitative determination of HMF in fruit puree and juices. The effective parameters such as the type and volume of extraction and dispersive solvents, pH and salt amount (NaCl) were studied and optimized with the aid of response surface methodology based on Box–Behnken design to obtain the best condition for HMF extraction. At the optimized conditions, parameter values were 60 µL extracting solvent, 600 µL dispersive solvent, 2 g NaCl and pH 5. Repeatability of the method, described as the relative standard deviation, was 3.1% (n?=?6) and the recovery was 98.4%. The limit of detection and limit of quantitation were 1.47 and 5.28 µg L^?1, respectively. The merit figures of DLLME–HPLC–UV method showed that the proposed method can be noticed as a new, fast and good alternative method for investigation of HMF in various fruit puree and juice samples.     

榨前分离苹果清汁中多酚的提取与分析

以榨前分离苹果清汁为样品,优化其多酚的提取和分析方法,与传统工艺下清汁中的多酚进行比较,以明确榨前分离工艺的优势。实验采用超声波辅助提取法优化了多酚提取条件,并优化了苹果清汁多酚的HPLC分析方法。结果表明,提取多酚的最优参数为温度50℃,时间40min,果汁与提取剂之比1∶3;优化多酚的HPLC检测条件为检测波长280nm,流动相甲醇-0.3%冰乙酸水溶液,实验确定的梯度洗脱程序下多酚的分离效果较好。结论是两种工艺下其苹果清汁多酚物质种类无显著差异,但榨前分离苹果汁中多酚的含量比传统工艺果汁减少了23.62%,可以有效降低苹果汁褐变的发生。      

果汁DNA提取方法比较及柑橘属植物分子生物学检测技术的研究

以橙汁为研究对象,选取市售100%橙汁及橙汁饮料各3种,采用CTAB法、SDS-CTAB法以及改良CTAB法提取其DNA,对所提取的DNA的浓度、纯度及扩增效率进行比较;同时选取橙UDP-葡糖基转移酶蛋白基因设计柑橘属植物特异性扩增引物,通过定性PCR检测其特异性和灵敏度,并应用于果汁中柑橘属植物的检测。实验结果证明,由改良CTAB法获得的DNA模板质量较高,适用于果汁中DNA的提取。UGT基因引物可对柑橘属植物产生特异性扩增,最低检测限为10pg/μL。将该引用物用于市售橙汁的检测,其检测结果为阳性,从而证明UGT基因特异性引物可用于果汁中的柑橘属植物成分的检测及鉴伪研究。     

沙棘鲜果抗氧化成分提取参数优化及抗氧化性能分析

以沙棘鲜果为原料,总抗氧化能力（FRAP）值为评价指标优化其抗氧化成分的提取参数。在单因素实验的基础上,选择乙醇浓度、料液比、提取时间、提取温度为自变量,FRAP值为响应值,利用Box-Behnken中心组合设计原理和响应面分析法,研究各自变量及其交互作用对FRAP值的影响。根据预测模型得到最佳的提取工艺条件为:乙醇浓度51%,料液比1∶22（g/m L）,提取时间1h,提取温度86℃,在此条件下得到的提取液的FRAP值为8.784mmol/L。抗氧化性能分析表明沙棘果抗氧化成分具有很好的清除自由基能力,作用于DPPH自由基EC50值为93.79μg/m L,羟自由基为4.14mg/m L,超氧阴离子为0.856mg/m L。