金标免疫层析法检测黄曲霉毒素B1的方法

应用金标免疫层析法（GICA）研制的金标免疫试纸条对食品中黄曲霉毒素B1的检测，来确立该方法的各项技术指标。结果表明：方法的最低检测限：2．5ng／mL；金标免疫试纸条在4℃环境下可稳定10个月以上；与类似毒素AFB2、AFG2的交叉反应率分别是7，14％、6，25％；检测时间小于15min；GICA与ELISA方法的符合率达90％以上。该方法简便、快速，有较高的灵敏度，重复性好，特异性强，能定性或半定量检测食品中的黄曲霉毒素B1含量。     

食用油中黄曲霉毒素B1免疫亲和检测技术研究

采用国内自主研制的黄曲霉毒素专用荧光快速检测仪及配套的免疫亲和试剂盒建立一套快速的免疫亲和检测方法,对食用油中的黄曲霉毒素B1进行测定。用10 mL石油醚和15 mL70%甲醇对5.0 g样品进行初步提取,过滤后,萃取液用免疫亲和微柱纯化富集,洗脱液放入黄曲霉毒素专用荧光快速检测仪中自动读取结果。实验结果表明,该方法的直接读数的线性范围为0.3-25μg/kg,R2=0.999 5,方法的平均回收率为87.11%,相对标准偏差为1.44%-6.33%,最低定量浓度为0.3μg/kg;应用于食用油样品AFB1检测,方便快速,安全准确,测定全过程所需时间可以控制在30 m in左右,检测成本低于其他仪器方法。     

基于二氧化锡/碳化硅空心球纳米链的电化学传感器检测食用油中黄曲霉毒素B1

在电极基底和抗体探针修饰生物相容性良好的二氧化锡/碳化硅空心球纳米链、聚苯胺纳米线、金纳米颗粒等纳米材料,放大电化学信号,提高检测灵敏度,构建黄曲霉毒素B₁直接竞争检测电化学传感器。结果表明:该传感器对黄曲霉毒素B₁的检测线性范围为3.81pg/mL～1.00μg/mL,检出限为1.13pg/mL。传感器具有良好的稳定性、重现性和特异性,对食用油的检测添加回收率在84.6%～107.6%,变异系数在5.42%～10.49%,可应用于食用油中黄曲霉毒素B₁的快速筛查。     

基于石墨烯/离子液体构建免疫传感器快速测定食品中黄曲霉毒素B1

采用壳聚糖、石墨烯和1-丁基-3-甲基咪唑基四氟硼酸盐复合膜修饰玻碳电极,包埋固定黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）抗体,构建了一种免疫传感器,用于快速测定食品中的AFB1。在pH值为7.0含1 mmol/LK3[Fe(CN)6]和0.1 mmol/L KCl的磷酸盐缓冲溶液中,基于AFB1抗体与抗原之间的特异性免疫反应,以K3[Fe(CN)6]为探针,运用循环伏安法和差分脉冲伏安法研究免疫反应对传感器响应电流的影响。在优化实验条件下,免疫传感器峰电流的降低值随溶液中AFB1质量浓度对数的增大而增大,且二者在0.1～8.1 ng/mL范围内呈线性关系,其检出限为0.04 ng/mL（RSN=3）。该免疫传感器的稳定性和重复性较好,利用该法对花生和玉米油样品中AFB1进行检测,回收率为94.73%～104.41%,检测结果与高效液相色谱法基本一致,用于食品中AFB1的快速检测是可行的。     

基于纳米抗体-荧光素酶的黄曲霉毒素B1检测方法构建

黄曲霉毒素B1(AFB1)是一种剧毒、致癌的食源性污染物,严重威胁食品安全和公共健康。为开发快速检测AFB1的生物发光酶联免疫分析（BLEIA）方法,系统测试了3种抗AFB1特异性纳米抗体（NB）与纳米荧光素酶（Nluc）融合蛋白（G8-Nluc、Nluc-NB26和Nluc-NB28）的可溶性表达、纯化情况及酶催化活性。基于3种融合蛋白分别建立BLEIA检测体系,选择Nluc-NB26用于谷物样品的分析和验证。结果表明,Nluc-NB26的可溶性表达量最高,稳定性更好,Nluc-NB28的可溶性表达量次之,而G8-Nluc基本不可溶。不同表面活性剂对G8-Nluc的促溶解性研究表明,添加N-月桂酰肌氨酸钠可显著提高其溶解度,纯化得到的3种融合蛋白均具有良好的酶活性及抗原结合活性。基于融合蛋白的BLEIA检测结果显示,Nluc-NB28-BLEIA、G8-Nluc-BLEIA和Nluc-NB26-BLEIA体系检测AFB1的IC50值分别为4.213,1.697,2.169 ng/mL,表明G8-Nluc-BLEIA体系的灵敏度最高,Nluc-NB26-BLEIA与前者接近,Nluc-...     

基于纳米材料构建免疫传感器快速测定粮油食品中的黄曲霉毒素B_1

以改性壳聚糖和纳米金复合物为电极修饰材料,包埋固定黄曲霉毒素B_1抗体制备信号放大型免疫传感器。以K_3[Fe(CN)_6]为探针,利用循环伏安法和差分脉冲伏安法研究其免疫反应对传感器响应电流的影响,结果表明,免疫响应电流与溶液中AFB_1的浓度在0.1~1.1 ng/m L范围内成线性关系,最低检测限为0.05 ng/m L(S/N=3);免疫传感器的特异性、稳定性和重现性较好。利用该法对花生、花生油等实际样品中的黄曲霉毒素B_1进行检测,回收率在87.8~98.2%,检测精确度优于ELISA试剂盒,可用于食品中黄曲霉毒素B_1的快速检测。     

胶体金免疫层析法快速检测黄曲霉毒素B1的研究

本文应用胶体金免疫层析技术,建立了一种快速检测食品中黄曲霉毒素B1的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体并喷于玻璃纤维上,黄曲霉毒素B1偶联抗原和二抗鼠抗驴分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样本垫、胶金垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装切割成胶体金试纸条并装入检测卡中。测试结果表明黄曲霉毒素B1快速检测试纸条的灵敏度为5ng/ml,检测时间为10min,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。使用简单方便,非常适合现场快速检测黄曲霉毒素B1。     

饲料中黄曲霉毒素B1快速检测方法的研究

取２０ｇ被检样品,在３６０ｎｍ紫外线下观察,如无亮黄绿色荧光粒,可基本判定饲料未受黄曲霉毒素Ｂ１污染;如有１￣４个亮黄绿色荧光粒,可疑为饲料黄曲霉毒素Ｂ１污染;如有４个以上黄绿色荧光粒,可判定饲料受到了黄曲霉毒素Ｂ１污染。     

电化学生物传感器在黄曲霉毒素检测中的研究进展

黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉的次级代谢产物,具有剧毒性和严重的致癌性、致畸性和致突变性,摄入受黄曲霉毒素污染的农作物和食品会对人类和动物的身体健康造成极其严重的危害。基于十年来国内外的研究成果,从电化学传感机理方面概述了电化学生物传感器在黄曲霉毒素检测中的发展现状和应用前景,介绍了各类电化学生物传感器的工作原理、制备方法和检测性能。电化学生物传感器相比于传统的黄曲霉毒素检测方法,具有检测时间短、操作简单、成本低、便于微型化等优势。金纳米颗粒、碳纳米管等纳米材料的使用将进一步提高电化学生物传感器的灵敏度以及抗原或抗体的固定效率。超微电极技术、传感器阵列技术以及微流控技术的应用也将进一步提高电化学生物传感器在毒素检测中的性能。     

黄曲霉毒素B1检测方法的分析

黄曲霉毒素B1是一种致癌物质 ,许多国家已将其限量标准提高 ,黄曲霉毒素B1检测方法的检出限已因其毒性而提高 ,并已成为国际贸易中新的技术壁垒。文中介绍了黄曲霉毒素B1的几种常见检测方法 ,并对其特点及检出限进行了概括性的分析。     

食用油中黄曲霉毒素B1快速检测试剂盒的质量评价

依据食药监办科\[2017\]43号《食品快速检测方法评价技术规范》和KJ 201708《食用油中黄曲霉毒素B1的快速检测 胶体金免疫层析法》制定评价方案,对目前福建省内应用较广的4种食用油中黄曲霉毒素B1快速检测胶体金试剂盒产品进行质量评价。结果表明： 4个品牌产品中,只有2个品牌产品符合要求,不同品牌产品的黄曲霉毒素B1检测效果存在差异。为确保食用油中黄曲霉毒素B1的快检监管效果,结合试剂盒评价结果和市场调研情况,建议快检试剂盒产品须经质量评价合格再投入使用,并不定期对产品进行跟踪评价。     

基于脲酶-金纳米棒的双重放大免疫比色法快速检测食品中黄曲霉毒素B1

该研究提出了一种免疫比色方法用于快速检测黄曲霉毒素B1 。在最优条件下,以免疫磁珠为载体,脲酶-金纳米棒为探针,探针与抗体特异性结合的同时与尿素反应催化沉积外加铜离子产生的显色反应为定量基础,紫外吸收强度作为参考指标,测定样品中的黄曲霉毒素B1 。结果表明,标准曲线的线性回归方程为Y=4.017+1.430 6X,相关系数为0.997,检测限为0.042 ng/mL,加标回收率在92.5%～120.8%之间,表明该方法精密度良好、检测结果可靠。故该免疫比色法可用于检测食品中黄曲霉毒素B1。     

低温法检测菜籽油黄曲霉毒素B1的研究

按照GB 5009. 22-2016《食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》第二法检测菜籽油中黄曲霉毒素B1时存在杂峰较多、无法准确定性及定量等问题,本法在GB 5009. 22-2016第二法的基础上优化了萃取溶剂,并通过降低萃取溶剂温度来降低菜籽油中杂质溶解度的方法,达到了理想的净化效果。在样品中加入已放入4℃冰箱冷藏30 min的甲醇-乙腈(体积比70∶30),振荡后取上清液氮吹至近干并衍生,衍生液氮吹至近干后利用初始流动相溶解并注入高效液相色谱仪检测。采用Waters XBridge BEH C18色谱柱(4. 6 mm×100 mm,2. 5μm),以蒸馏水和乙腈为流动相进行梯度洗脱,在流速0. 8 m L/min、柱温40℃、进样量10μL条件下,进行定性和定量分析。结果表明:方法线性范围为0. 1~4. 0 ng/m L,定量限为0. 1μg/kg,回收率为78. 0%~90. 4%,相对标准偏差为1. 61%~4. 15%。与国标方法相比,本方法可有效去除菜籽油中杂质,能准确地进行定性和定量,回收率和准确度均较好,可应用于菜籽油中黄曲霉毒素B1的日常检测。     

应用抗黄曲霉毒素单链抗体检测酱油中黄曲霉毒素B1

利用本实验室制备的抗黄曲霉毒素B1的单链抗体(ScFv),通过棋盘实验确定了抗原抗体的最适工作浓度,在此之上根据间接竞争酶联免疫法(ELISA)绘制标准曲线,检测酱油中AFB1的含量;通过改变样品的盐浓度及pH来确定其对ELISA检测结果的影响。研究结果表明,利用ScFv检测黄曲霉毒素的最小检测值为0.10ng/mL,平均加标回收率在84%～109%之间,本文建立的ELISA方法在pH5～8,盐浓度小于10%时较稳定。本文建立的利用抗AFB1的ScFv检测黄曲霉毒素含量的方法方便快捷,稳定性较好,并且成本较低,适合于食品中黄曲霉毒素的检测。     

胶体金免疫层析法检测酱油中黄曲霉毒素B1

采用胶体金免疫层析法检测酱油中的黄曲霉毒素B1。加标的酱油样品经提取后,以胶体金免疫层析法对其进行黄曲霉毒素B1测定,并与酶联免疫吸附法进行比较。结果表明,当酱油中黄曲霉毒素含量超过国家限量标准(5μg/kg),胶体金免疫层析法检测结果为阳性,说明该方法能够满足酱油样品中黄曲霉毒素B1监控的要求。     

基于铂@金纳米线作为信号放大物的电化学适体传感器检测黄曲霉毒素

目的：为了满足食品质量安全并快速检测食品中黄曲霉毒素B1（AFB1）的含量,构建基于铂@金纳米线（Pt@AuNWs）作为信号放大物的电化学适配体传感器用于花生中AFB1的高灵敏、高选择性检测。方法：首先在玻碳电极（GC）表面修饰纳米金颗粒（AuNPs）构建AuNPs/GC电极,增强基底电极的电催化性能并通过Au﹣S键将互补链（cDNA）固定于AuNPs/GC,其次通过模板法合成Pt@AuNWs使其与适配体结合构建信号探针（记为Pt@AuNWs-apt）,最后基于碱基互补配对作用构建电化学适配传感器。当AFB1存在时,其和cDNA竞争结合适配体,导致电极表面的Pt@AuNWs-apt信号探针部分脱落,使电化学适配体传感器催化H₂O₂产生的电流信号降低,从而间接定量检测AFB1。结果：该传感器在0.25 nmol/L cDNA、apt与cDNA孵育40 min、10 mmol/L H₂O₂、0.1 mol/L 磷酸盐浓度pH7.0的测试条件下具有最优的分析性能。该方法具有较宽的线性范围（1～100 ng/mL）,检出限为0.41 ng/mL,具有良好的选择性、重现性和稳定性,将该传感器应用于花生样品中进行加标回收实验,结果表明回收率在85.1%～88.0%。结论：构建的电化学适配体传感器可应用于花生中AFB1的检测,在快速检测中具有较好的应用价值。

     

鸡白痢电化学免疫传感器的研制

以明胶作为载体,采用包埋技术成功地将鸡白痢抗体修饰于电极表面,制成非标记型鸡白痢免疫传感器。采用循环伏安法和交流阻抗图谱对不同修饰状态的电极进行表征。根据抗原抗体特异性结合形成的免疫复合物使敏感膜有效扩散截面积减小的特性,采用循环伏安法以铁氰化钾为分子探针间接检测鸡白痢抗原。通过试验确定鸡白痢阴阳性判定标准,Δi>2.5μA判为阳性,Δi<2.5μA判为阴性。该免疫传感器特异性强,重现性好(RSD<6%),准确性高(与国标检测方法符合率为88.9%),4℃干态放置7d,其响应电流为初始电流的90.2%。因此该免疫传感器可初步用于鸡白痢阴阳性判定和快速筛选。     

利用紫外光降解花生油中黄曲霉毒素B1

目的评价紫外光照射对花生油中黄曲霉毒素B_1(AFB_1)的降解效果以及油品质的安全性的影响。方法采用波长为365 nm,功率100 W的紫外灯设备对花生油中的AFB_1进行照射处理后,分别利用高效液相色谱(HPLC)对花生油中的AFB_1的含量,滴定法对过氧化值,Ranciment法对氧化稳定性以及气相色谱法(GC)对不饱和脂肪酸的含量进行跟踪测定。结果结果表明,随着紫外照射时间的延长,花生油中黄曲霉毒素的含量逐渐降低,在25 min内降解率可达90%,过氧化值、不饱和脂肪酸的含量以及氧化稳定性这些品质指标数值均无明显变化。结论紫外光照射脱毒技术不仅对花生油中的AFB_1有很好的降解效果,并且对油品质无显著影响。     

花生及其制品中黄曲霉毒素B1胶体金快速检测方法的建立

通过考察市售试剂盒的绝对灵敏度和最大稀释比例,选取3种效果最好的快速检测胶体金试剂盒产品,以油炸花生、烘烤花生及花生酱为代表性基质,优化样品的前处理条件和试剂盒的反应条件,根据《食品快速检测方法评价技术规范》中性能指标进行统一的技术评价,考察各品牌快检试剂盒的检测限、特异性、灵敏度、假阳性率、假阴性率、相对准确度以及参比方法一致性分析等指标,为制定花生及其制品中黄曲霉毒素B₁胶体金快速检测评价标准提供科学依据。