茶槲寄生“螃蟹脚”醇提正丁醇萃取相对金黄色葡萄球菌抑菌机理的研究

本文研究了茶槲寄生“螃蟹脚”醇提各萃取相的抑菌作用及正丁醇萃取相（NVBEs）对金黄色葡萄球菌的抑菌机理。采用滤纸片扩散法测定抑菌圈直径（DIZ）的大小,对倍稀释法测定最小抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）,来评价“螃蟹脚”醇提各萃取相对金黄色葡萄球菌（S. aureus）、大肠杆菌（E. coli）、鼠伤寒沙门氏菌（S. typhimurium）、单核细胞增生李斯特菌（L. monocytogenes）4种食源性腐败菌的抑制性;通过光学显微镜和扫描电镜观察、胞膜通透性、胞壁完整性和酶活性等实验,研究了NVBEs抑菌机理。结果表明,“螃蟹脚”醇提各萃取相对S. aureus、E. coli、S. typhimurium和L. monocytogenes均有明显抑制效果,其中NVBEs抑菌活性较好,对S. aureus抑制效果最好,DIZ为9.84±0.57 mm,MIC为3.52 mg/mL,MBC为7.04 mg/mL。抑菌机理结果表明：NVBEs可增加S. aureus细胞壁及细胞膜的通透性,破坏菌体细胞结构,引起细胞内含物如核酸和蛋白质等外泄;引起遗传物质DNA的改变,使菌体细胞形态结构出现异常;影响菌体酶的代谢活动,从而抑制细菌的生长。     

茶槲寄生“螃蟹脚”正丁醇萃取相对金黄色葡萄球菌抑菌机理的研究

本文研究了茶槲寄生"螃蟹脚"醇提各萃取相的抑菌作用及正丁醇萃取相(NVBEs)对金黄色葡萄球菌的抑菌机理。采用滤纸片扩散法测定抑菌圈直径(DIZ)的大小,对倍稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),来评价"螃蟹脚"醇提各萃取相对金黄色葡萄球菌(S.aureus)、大肠杆菌(E.coli)、鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)、单核细胞增生李斯特菌(L.monocytogenes)4种食源性腐败菌的抑制性;通过光学显微镜和扫描电镜观察、胞膜通透性、胞壁完整性和酶活性等实验,研究了NVBEs抑菌机理。结果表明,"螃蟹脚"醇提各萃取相对S.aureus、E.coli、S.typhimurium和L.monocytogenes均有明显抑制效果,其中NVBEs抑菌活性较好,对S.aureus抑制效果最好,DIZ为9.84±0.57 mm,MIC为3.52 mg/m L,MBC为7.04 mg/m L。抑菌机理结果表明:NVBEs可增加S.aureus细胞壁及细胞膜的通透性,破坏菌体细胞结构,引起细胞内含物如核酸和蛋白质等外泄;引起遗传物质DNA的改变,使菌体细胞形态结构出现异常;影响菌体酶的代谢活动,从而抑制细菌的生长。     

三甲胺柱[5]芳烃的合成及其抑菌性能

本研究合成基于三甲胺的柱[5]芳烃,并以金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ATCC 6538）和大肠杆菌（Escherichia coli DH5α）为供试菌对三甲胺柱[5]芳烃的抑菌性能和抑菌机制进行分析。通过抑菌实验确定三甲胺柱[5]芳烃最小抑菌浓度（minimal inhibit concentration,MIC）和最小杀菌浓度（minimal bactericidal concentration,MBC）,并探讨其对细菌生物被膜形成的影响;利用透射电子显微镜（transmission electron microscopy,TEM）观察三甲胺柱[5]芳烃对细菌细胞膜的损伤情况,并通过噻唑蓝（3-(4,5-dimethyl-2-thiazyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide,MTT）法测定其细胞毒性。结果显示,三甲胺柱[5]芳烃对S. aureus ATCC 6538的MIC和MBC分别为0.125 mg/mL和1.000 mg/mL,对E. coli DH5α的MIC和MBC分别为0.250 mg/mL和＞1.000 mg/mL;三甲胺柱[5]芳烃对S. aureus ATCC 6538生物被膜形成的抑制效果优于对E. coli DH5α。TEM观察结果表明三甲胺柱[5]芳烃对不同菌株细胞膜的损伤不同;MTT实验结果表明MIC范围内三甲胺柱[5]芳烃无毒。本研究结果明确了三甲胺柱[5]芳烃的具体抑菌性能,可为其在食品领域的进一步开发利用提供一定的理论依据。     

鹿蹄草素对金黄色葡萄球菌的抑制作用及其机理研究

对鹿蹄草素作用下的金黄色葡萄球菌生长曲线、膜通透性和结构进行了研究,探讨鹿蹄草素抑菌和杀菌机理。鹿蹄草素能够有效抑制金黄色葡萄球菌的生长,其最小抑菌质量浓度为0.16mg/mL;鹿蹄草素对金黄色葡萄球菌具有较强的杀菌作用,最小杀菌质量浓度为0.2mg/mL。鹿蹄草素作用于金黄色葡萄球菌后,细胞膜通透性与空白对照组相比显著提高。扫描电镜的结果表明,鹿蹄草素作用后菌体细胞结构被破坏,细胞壁呈溶解状,菌体细胞间相互粘结,细胞与细胞间的界限变得模糊。试验结果表明,鹿蹄草素的抑菌性和杀菌功能与其对金黄色葡萄球菌细胞膜和细胞壁结构的破坏直接相关。     

韭花精油主成分对单增李斯特氏菌的抑菌活性和抑菌机理

以韭花精油两种主成分(烯丙基甲基二硫醚和二甲基三硫醚)为研究对象,通过最小抑菌质量浓度(MIC)、最小杀菌质量浓度(MBC)、细菌细胞形态等研究其对单增李斯特氏菌的抑菌活性和抑菌机理。结果表明：两种主成分的MIC均为1.0 mg/mL,MBC均为2.0 mg/mL,且当其质量浓度为2.0 mg/mL时均会严重损坏单增李斯特氏菌的细胞形态和细胞膜结构;用质量浓度为4.0 mg/mL的烯丙基甲基二硫醚和二甲基三硫醚分别处理单增李斯特氏菌细胞,其β-半乳糖苷酶和蛋白质泄露量均显著上升,ATP酶活性(0.52 U/mg prot和0.55 U/mg prot)均明显低于对照组(3.05 U/mg prot,P<0.05);经两种主成分处理后,单增李斯特氏菌的DNA质量浓度均明显下降。由此可知,两种主成分主要通过破坏细胞膜结构、抑制ATP酶活性、降低DNA质量浓度等实现对单增李斯特氏菌活性的抑制。     

臭茉莉正丁醇提取物抑菌活性研究

目的:研究臭茉莉正丁醇提取物(ECP)的抑菌效果及机理。方法:采用纸片扩散法、微量肉汤稀释法测定表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球、伤寒杆菌及绿脓杆菌对ECP的敏感性。并通过考察金黄色葡萄球菌(S.aureus)细胞膜、细胞壁及形态结构等的变化,研究ECP的抑菌活性及机理。结果:ECP对4种供试细菌均具有抑菌活性,其中对S.aureus的抑菌活性最强,其最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC)均为0.5 mg/mL。ECP处理后S.aureus细胞内容物外泄、氧化损伤和细胞凋亡均明显增加,脱氢酶活性及蛋白含量均明显下降,扫描电镜(SEM)观察到菌体形态结构受损严重。结论:ECP对S.aureus的抑菌靶点可能为细胞膜、细胞壁、三羧酸(TCA)循环关键酶、蛋白质和遗传物质等,臭茉莉具有成为天然食品添加剂的潜力。     

酶标仪法快速评价香兰素的抑菌活性

采用96孔板在酶标仪上测定了大肠杆菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)、李斯特菌(L.mono)、沙门氏菌(S.enteritidis)和宋内氏菌(Sh.Sonnei)在不同浓度香兰素存在下的光学密度(optical density,OD)值,并绘制其OD-t生长曲线。受试菌生长曲线显示香兰素对E.coli,S.aureus,L.mono,S.enteritidis和Sh.Sonnei的最低抑菌浓度分别为1.6mg/mL,2.2mg/mL,1.0mg/mL,1.2mg/mL和1.6mg/mL。     

原儿茶醛对福氏志贺菌的抑制作用

为寻求安全、有效的福氏志贺菌控制方法,探究原儿茶醛对福氏志贺菌的抑制作用。测定原儿茶醛对福氏志贺菌的最小抑菌浓度、最小杀菌浓度以及其对菌体细胞形态、胞内ATP浓度、膜电位、菌体蛋白质合成和破坏及生长曲线的影响,结果表明：原儿茶醛对福氏志贺菌的最小抑菌浓度为0.5 mg/mL,最小杀菌浓度为4.0 mg/mL。场发射扫描电镜观测到原儿茶醛使福氏志贺菌形态受损,菌体皱缩干瘪;原儿茶醛影响福氏志贺菌细胞膜的通透性,表现为质量浓度为2×MIC和4×MIC的原儿茶醛使细菌胞内ATP浓度显著降低,引起细菌膜电位超极化,破坏菌体蛋白质并抑制细胞蛋白质合成;原儿茶醛延长了福氏志贺菌的生长迟滞期,减小其最大生长速率。结论：原儿茶醛对福氏志贺菌具有良好的抑制作用,其有作为天然、安全的抑菌物质应用于食品工业中的潜力。     

新型广谱米酒乳杆菌素对金黄色葡萄球菌的抑菌作用研究

测定了由米酒乳杆菌C2产生的广谱细菌素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度和杀菌浓度,以金黄色葡萄球菌ATCC63589为模式菌株,过细菌素对细胞渗透性影响及采用原子力显微镜研究了这种细菌素的作用机理.结果表明,种细菌素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度和杀菌浓度分别为20AU/mL和80AU/mL.同时杀菌浓度的细菌素引起了胞内紫外吸收物质的大量泄露,引起细胞表面的严重皱折和破裂.因此,推断杀菌浓度下细菌素导致了金黄色葡萄球菌ATCC63589细胞壁和细胞膜的破坏,起胞内物质的泄露,终导致细胞的死亡.     

草果提取物对大肠杆菌和沙门氏菌抑菌机理研究

文章研究了草果中所含抑菌物质对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌机理。通过最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)、最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)和生长曲线的测定研究草果抑菌提取物对大肠杆菌和沙门氏菌细胞生长的影响;通过扫描电子显微镜(scanning electron microscopy,SEM)观察细菌细胞微观形态结构的变化;通过测定胞外碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)研究草果抑菌提取物对大肠杆菌和沙门氏菌细胞壁通透性的影响。结果表明,草果提取物对供试菌的生长具有明显抑制作用,大肠杆菌的MIC和MBC值均为0.625mg/mL,沙门氏菌的MIC和MBC值约为1.25mg/mL;草果提取物在作用供试菌8h后,对其细胞结构造成了破坏,使得细胞壁的通透性增加。     

免疫磁珠-环介导等温扩增快速检测牛肉中的鼠伤寒沙门氏菌与金黄色葡萄球菌

建立免疫磁珠分离（immunomagnetic separation,IMS）联合环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术检测牛肉中鼠伤寒沙门氏菌与金黄色葡萄球菌的方法。用生物素标记的鼠伤寒沙门氏菌抗体和生物素标记的金黄色葡萄球菌菌体蛋白抗体对链霉亲和素磁珠进行功能化,从牛肉中捕获和分离目标致病菌。结果表明：经优化后,每毫克磁珠与10 μL鼠伤寒沙门氏菌抗体偶联,400 μL鼠伤寒沙门氏菌免疫磁珠在45 min内对104 CFU/mL鼠伤寒沙门氏菌的捕获率为52.16%;每毫克磁珠与6 μL金黄色葡萄球菌抗体偶联,300 μL金黄色葡萄球菌免疫磁珠在30 min内对104 CFU/mL金黄色葡萄球菌的捕获率为56.80%;建立的IMS-LAMP方法特异性高,对牛肉中鼠伤寒沙门氏菌的检测灵敏度为1.2×103 CFU/mL,对金黄色葡萄球菌的检测灵敏度为4.4×104 CFU/mL;富集5 h后,鼠伤寒沙门氏菌的检测限可至1.2 CFU/mL,富集7 h后,金黄色葡萄球菌的检测限可降至4.4 CFU/mL。建立的IMS-LAMP方法用时短,灵敏度高,操作简单,可以有效检测牛肉中的鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌。     

基于纳米金标记的金黄色葡萄球菌可视化检测方法研究

目的 以纳米金为载体, 对金黄色葡萄球菌进行可视化检测。方法 将与金黄色葡萄球菌目标序列互补的DNA 1和DNA 2连接到纳米金上, 当体系中出现金黄色葡萄球菌目标序列时, 两条短链DNA就会与目标序列杂交, 使纳米金之间的距离拉近, 从而使纳米金发生团聚, 导致纳米金的颜色从酒红色变为蓝色。由于金黄色葡萄球菌目标序列浓度的不同, 从而引起纳米金之间团聚的程度不同, 纳米金就会相应的呈现出不同的颜色变化, 这样就可达到可视化检测的目的。结果 在最优实验条件下, 本方法在检测金黄色葡萄球菌目标序列时, 浓度在1~1000 pmol/L范围内呈现良好的线性关系, 检出限为0.5 pmol/L; 检测金黄色葡萄球菌时, 线性范围为30~9800 CFU/mL, 检出限为25 CFU/mL。结论 通过特异性和加标回收实验, 证明本方法可以用于实际样品的检测。     

甘薯渣中去氢表雄酮抑菌活性研究

为研究甘薯渣氢表雄酮(DHEA)的抑菌活性,本研究以马克斯克鲁维酵母、酿酒酵母、鼠李糖乳杆菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、炭疽杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌为供示菌,采用生长曲线、最小抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)、生长曲线、扫描电镜研究DHEA的抑菌作用。结果表明,DHEA对供试菌的抑菌效果依次为:马克斯克鲁维酵母>大肠杆菌>金黄色葡萄球菌>炭疽杆菌>沙门氏菌>枯草芽孢杆菌>酿酒酵母>鼠李糖乳杆菌。最低抑制浓度(MIC)结果为:马克斯克鲁维酵母5.67 mg/mL,大肠杆菌9.82 mg/mL,金黄色葡萄球菌13.52 mg/mL,炭疽杆菌16.46 mg/mL,沙门氏菌17.68 mg/mL,枯草芽孢杆菌17.87 mg/mL,酿酒酵母20.82 mg/mL,鼠李糖乳杆菌无明显抑制作用。DHEA使供试菌生长周期缩短,并降低了菌体浓度;扫描电镜显示DHEA处理后菌体形态改变,细胞壁破裂,细胞内容物有溶出。研究表明,甘薯渣中DHEA对大部分细菌有抑制作用。     

复合生物保鲜剂对金黄色葡萄球菌的抑菌作用研究

研究了壳聚糖、溶菌酶与茶多酚配制而成的复合保鲜剂对金黄色葡萄球菌的抑菌作用。采用琼脂平板打孔法确定复合保鲜剂对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)与最小杀菌浓度(MBC),结合抑菌率、抑菌活力、细菌生长曲线、膜完整性、AKP活性与细菌超微结构,综合评价复合保鲜剂对金黄色葡萄球菌的影响。结果得出,复合保鲜剂对金黄色葡萄球菌的MIC与MBC分别为0.8 mg/mL与1.6 mg/mL,随着作用时间的延长,复合保鲜剂对金黄色葡萄球菌的生长抑制明显,菌体的细胞壁与细胞膜完整性受到破坏,菌体细胞中的AKP量增多,影响菌体细胞的代谢循环,菌体内部的核酸与蛋白质外泄,抑制其正常生长。由细菌超微结构观察发现,菌体细胞经复合保鲜剂处理后,造成菌体扭曲变形,细胞壁破裂,细胞质外渗。表明复合保鲜剂可破坏菌体的细胞壁,影响胞膜稳定性与胞内环境,最终导致菌体死亡。     

丁香油与月桂酸对金黄色葡萄球菌的协同抑制作用

该研究探讨了丁香油、百里香油、薄荷油等三种植物精油以及中链脂肪酸月桂酸对金黄色葡萄球菌的抑制作用,筛选出具有协同抑制作用的组合丁香油与月桂酸,测定协同组合对金黄色葡萄球菌生长、细胞膜通透性的影响,并将该组合制成抑菌保鲜液,应用于生鲜米粉保鲜。结果表明,丁香油、薄荷油、百里香油及月桂酸对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为2.00μg/mL、4.00μg/mL、7.50μg/mL以及9.00μg/mL,丁香油和月桂酸联合使用,在浓度为1/4 MIC丁香油+1/4 MIC月桂酸时具有协同抑菌效果,此时分级抑菌浓度系数为0.50。丁香油与月桂酸协同处理使金黄色葡萄球菌细胞膜损伤,增加通透性。抑菌保鲜液对生鲜米粉中的菌落总数、金黄色葡萄球菌均有抑制作用,对维持生鲜米粉品质具有积极影响。72 h贮藏期间,处理组初始菌落总数比对照组至少低1.50 lg CFU/g;金黄色葡萄球菌降低1.65 lg CFU/g;酸度值比对照组至少低0.8°T;感官评价得分均高于对照组。结果表明,丁香油与月桂酸协同组合制成抑菌保鲜液有可能成为生鲜米粉的可替代复合保鲜液。     

用于PCR检测的乳品中金黄色葡萄球菌DNA提取方法比较研究

比较了乳品中金黄色葡萄球菌DNA的6种提取方法的效果,确定了一种可有效从乳品中提取金黄色葡萄球菌DNA的方法。该方法无需对样品进行增菌,可直接从乳品中提取金黄色葡萄球菌DNA,作为模板进行PCR检测,检测效果良好,对UHT全脂乳、脱脂乳和奶酪的最低检出限分别为10、10CFU/mL和55CFU/g。     

靓果安和大蒜油的联合抑菌作用及抑菌机理

本文以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为供试菌,用抑菌圈法测定靓果安、大蒜油以及靓果安与大蒜油复配抑菌液(复配液)对供试菌株的最小抑菌浓度;通过紫外分光光度法测定靓果安、大蒜油以及靓果安与大蒜油复配抑菌液影响供试菌的生长曲线;光学显微镜、透射电子显微镜观察菌体形态,探讨靓果安的抑菌机理。结果显表明,靓果安对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最小抑菌浓度分别为20、40 mg/mL;大蒜油对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最小抑菌浓度分别为0.4、51.2 mg/mL。复配液对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最小抑菌浓度分别为0.3125、10 mg/mL;靓果安、大蒜油以及复配液对两种供试菌的生长具有抑制作用,菌体形态发生改变、菌体散乱、变小,同时对供试菌的细胞壁以及细胞膜进行破裂、使得内容物流出,从而导致细胞的死亡。     

基于叠氮溴化丙锭与恒温核酸扩增技术快速检测亚致死状态食源金黄色葡萄球菌

建立一种将荧光染料叠氮溴化丙锭（propidium monoazide,PMA）与环介导等温扩增（loop-mediatedisothermal amplification,LAMP）技术相结合的方法,用于快速高效检测金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）。同时,采用人工污染金黄色葡萄球菌的速冻水饺和奶粉作为食品样品,研究PMA-LAMP方法的检测灵敏度。结果表明,PMA溶液质量浓度3 μg/mL,650 W卤素灯下曝光5 min,PMA能够完全抑制1.2×107 copies/mL金黄色葡萄球菌死菌核酸扩增。PMA-LAMP方法能够在恒温65 ℃、60 min内完成对亚致死型金黄色葡萄球菌特异性nuc基因的特异性检测,其对亚致死状态金黄色葡萄球菌的检出限为34 CFU/mL,对食物样品速冻水饺和奶粉的检出限分别为17 CFU/mL和1.70×102 CFU/mL。建立的PMA-LAMP方法可以有效检测亚致死态金黄色葡萄球菌,提供了一种新的检测技术和解决方案。     

多重PCR快速检测三种食品病原菌

建立一种快速、经济、实用的可以同步检测食品中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的方法。根据金黄色葡萄球菌的nuc基因,沙门氏菌的invA基因,小肠结肠炎耶尔森氏菌的ail基因,分别设计了三对引物,对单个基因PCR和单管多重PCR扩增进行特异性、灵敏性实验以及优化反应体系。三对引物能特异性扩增出236、475、127bp的目的条带。建立的多重PCR同时对3种食源性致病菌进行检测具有较高的灵敏度,灵敏度金黄色葡萄球菌为102CFU/mL、沙门氏菌为102CFU/mL、小肠结肠炎耶尔森氏菌为102CFU/mL。初步建立能同步、简便、快速、灵敏地检测食品中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和小肠结肠炎耶尔森氏菌的三重PCR方法。