大规模生产静脉注射用人血免疫球蛋白工艺的研究

本文介绍一种制备静脉注射用人血免疫球蛋白(IVIG)的工艺。工艺流程为:以低温乙醇法的 FⅢ上清为原料,经 NMWL 为3万的超滤膜脱醇,DEAE-Sephadex-A-50吸附,pH3.8～4.0条件下超滤,最后添加麦芽糖等稳定剂冻干。本工艺具有收率高、质量好、生产过程简单温和、经济效益显著等特点,适于大规模生产。     

静脉注射用免疫球蛋白的抗补体活性及部分免疫学特性测定

本文采用100CH_(50)法测定静脉注射用免疫球蛋白(IVIG)的抗补体活性(ACA)。对IVIG的pH,Na~+含量及不同成分的缓冲液进行了试验比较;ACA重复测定结果的变异系数在15％以内;MG在含微量IgG多聚体情况下,多聚体与ACA的关系不明显;17批MG都含有麻疹抗体和白喉抗体,IgA含量不等,不含IgM。     

冻干低pH静脉注射用人血免疫球蛋白的试制

作者参照美国 Cutter Biological 的免疫球蛋白第三代产品 Gamimune-N~R 的工艺,以低温乙醇法从人血浆分离的组分Ⅱ沉淀糊为原材料,经过再加工制得最终酸碱度为 pH 4.0、蛋白浓度为5%,麦芽浓度为10%的冻干制剂。该制剂的 r 球蛋白纯度>98%;IgG 分子单体为100%,无聚合体和碎片;IgG 亚类均存在并与正常人血浆构成比相似;抗补体活性(ACA)和前激肽释放酶激活物活性(PKA)测定均符合有关质量标准。该制剂的冻干剂型较液体剂型对热的稳定性明显提高。安全性良好、疗效肯定。     

静脉注射人免疫球蛋白的质量控制

静脉注射用人免疫球蛋白 (IVIG)在抗体置换、免疫调节等方面有着广泛的应用。由于IVIG经静脉注射 ,且用量较大 ,其质量控制尤为重要。控制IVIG质量主要包括IgG的完整性、抗补体活性 (ACA)、多聚体含量、杂蛋白含量、抗体效价、病毒安全性等方面。     

影响静注免疫球蛋白抗补体活性分析

经检测分析表明 :(1)不同聚合体含量的IVIG中ACA差异有显著意义 ;(2 )不同pH的IVIG中ACA明显不同 ,即随pH升高而增加 ;(3)用生理盐水溶解的IVIG中ACA明显高于用注射用水溶解的IVIG ;(4)在pH4 0～5 0的加温样品中ACA明显低于未加温样品 ,且差异有显著意义。     

静脉注射用免疫球蛋白抗补体活性试验条件的比较

<正> 目前,静脉注射用免疫球蛋白(IVIG)抗补体活性(ACA)试验方法较多,有2CH_(50)、5CH_(50)及100 CH_(50)等方法,虽都自称源于Mayer法,但实际应用中已做了较大修改。目前国内使用的方法及条件也不完全一样。为此,我们以100 CH_(50)法为基础,对一些不同的试验条件进行了比较,供同行们参考。 1.Mayer介绍绵羊红血球(SRBC)用EDTA洗涤的目的主要是为了除去SRBC表面上的C_1。而而C_1是一种不耐热补体,采集SRBC放置一周后才能使用,在此期内SRBC表面上的C_1应会自然失     

应用ELISA间接法检测乙肝核心抗体

作者应用高纯度基因重组的酵母菌生产的 HBcAg(YrHBcAg),建立了 ELISA 间接法。用酶标记抗人 Ig 检测结合于固相 YrHBcAg 上的抗-HBC。检测阳性血清的敏感性比竞争性抑制法高3个滴度;在36份参比血清的检测中,间接法和竞争性抑制法与 Abbott 试剂的符合率分别为72.1%和33.3%;在558份献血员血清的检测中,间接法比竞争性抑制法的检出率高7.7%。     

人血清中猪抗人淋巴免疫球蛋白双抗体夹心ELISA检测法的建立及验证

目的建立人血清中猪抗人淋巴免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte porcine immunoglobulin,ALG)双抗体夹心ELISA检测法,并进行验证。方法以兔抗猪Ig G包被酶标板,HRP酶标记的鼠抗猪Ig G为二抗,建立人血清中ALG含量的双抗体夹心ELISA检测法,并对方法中包被浓度及二抗浓度进行优化,同时验证该方法的重复性、敏感性、准确性、特异性及稳定性。采用优化后的方法对14位严重型再生障碍性贫血(severe aplastic anemia,SAA)患者进行ALG的血药浓度监测(therapeutic drug monitoring,TDM)。结果最佳包被浓度为1∶2 000,最佳二抗稀释度为1∶8 000。参考品浓度在4.9~5 000μg/ml范围内标准曲线的四参数Logistic曲线拟合较好,R2值为0.991 1,在4.9~156μg/ml范围内的线性拟合也较好,R2值为0.991 5,批内重复性CV值均10%;其检测底限为0.39μg/ml;浓度为500、50及5μg/ml参考品的回收率为91.2%~107.0%;该方法可特异性检测出注射ALG患者血清中ALG含量;包被好的ELISA板及二抗、底物于4及37℃条件下分别保存1~3周及1~3 d后检测结果均较稳定。经DAS 3.1.4软件分析,14名经ALG治疗的SAA患者血清中ALG的曲线下面积(AOC)为(7.3±5.1)mg/(L·d)(95%CI),半衰期(t1/2)为(20.65±38.67)d(95%CI)。结论该方法具有良好的重复性、准确度及稳定性,可用于ALG的TDM。     

海洋放线菌S187产抗补体活性物质的发酵工艺优化

海洋放线菌S187的代谢产物具有较好的抗补体活性。以抗补体活性为评价指标,在单因素实验的基础上,采用正交实验优化菌株S187产抗补体活性物质的发酵工艺。确定最佳发酵工艺为:可溶性淀粉20 g·L~(-1),大豆粉35 g·L~(-1),(NH_4)_2SO_4 2 g·L~(-1),NaCl 2 g·L~(-1),K_2HPO_4 0.5 g·L~(-1),CaCO_3 5 g·L~(-1),初始pH值7.5,于28℃、220 r·min~(-1)下发酵7 d。在此条件下,菌株S187代谢产物的抗补体活性为69.35%。     

Ⅱ度烧伤患者外周血和创面水疱液中免疫球蛋白、补体的变化

目的观察Ⅱ度烧伤患者外周血和创面水疱液中免疫球蛋白、补体的变化,探讨烧伤后机体免疫功能改变的可能机制及创面水疱对创面愈合的影响。方法测定60例Ⅱ度烧伤患者外周血和创面水疱液中IgA、IgM、IgG和C3、C4含量,并于正常对照组比较。结果与正常对照组比较,Ⅱ度烧伤患者外周血中IgA、IgM、IgG和C3、C4均不同程度下降;烧伤患者创面水疱液中IgA、IgM、IgG和C3、C4与外周血中比较也呈不同程度下降。结论Ⅱ度烧伤患者机体免疫功能下降;是否保留水疱皮根据烧伤创面深度。     

用高压液相色谱法测定静脉注射用人免疫球蛋白(pH4)中麦芽糖含量

目的 用高压液相色谱法测定静脉注射用人免疫球蛋白（ｐＨ４）中麦芽糖含量。方法 采用外标 法,将麦芽糖含量与其相应峰面积进行直线回归,建立标准曲线。样品经磺基水杨酸去蛋白处理后,取上清液进样 测定。将样品峰面积代入标准曲线,计算出麦芽糖含量。结果 标准曲线回归系数ｒ≥０．９９９０;回收率为９９．６％～ １０２．６％;以含９．００％、１０．００％和１１．００％麦芽糖的制品重复测定６次,ＣＶ值分别为１．０１％、１．１５％和０．５９％;对一 批制品进行日间重复性测定,ＣＶ值为０．６％。本方法相关性和重复性好,回收率高,操作简便。结论 可作为静脉 注射用人免疫球蛋白（ｐＨ４）中麦芽糖含量的常规检测方法。     

国产静脉注射人免疫球蛋白制品中凝血激活物水平分析

目的分析11家中国血液制品企业共计64批次上市后的静脉注射人免疫球蛋白(immunoglobulin for intravenous injection,IVIG)(p H 4)制品中凝血激活物水平,对国内IVIG制品在促凝血方面的安全性作出评估,为提高制品质量标准提供参考。方法利用非活化的部分凝血活酶时间法(non-activated partial thromboplastin time,NAPTT)、凝固法(一期法)及本实验室建立的改良凝血酶生成试验(modified thrombin generation test,M-TGT),分别测定64批次国产和7批次进口IVIG样品的NAPTT、系列凝血因子活性、活化凝血因子Ⅺ(FⅪa)的含量及凝血酶生成含量达到最高值时所需时间(time to peak,TTP),分析IVIG的凝血激活物水平。结果除国内厂家F所生产的2批IVIG中FⅪ活性为0.030~0.036 IU/ml外,其余国产62批次产品中FⅪ活性均低于试剂最低检测限未检出;所有产品中TTP均大于40 min,FⅪa含量均小于0.37 nmol/L,NAPTT均大于203 s。结论所调查的11家共计64批次的国产IVIG制品的凝血激活物水平均较低。今后在我国是否推行IVIG制品的凝血激活物检测尚需进一步研究。     

静脉注射人免疫球蛋白生产工艺、质量控制的演变及评价思考

<正>人血浆中含有约20种蛋白,其中大部分是白蛋白(35～40 mg/mL),免疫球蛋白的浓度约为8～12 mg/mL。血液中的免疫球蛋白分为IgG、IgA、IgM、IgD及IgE,前3者占比分别约为75%、15%、10%,根据亚型不同IgG可分为IgG1、IgG2、IgG3和IgG4,不同亚型的IgG半衰期不同,IgG1、IgG2和IgG4的半衰期3～4周,IgG3的半衰期仅约2周。     

一种抗人T淋巴细胞免疫球蛋白淋巴细胞毒效价检测方法的建立

目的 建立基于人白血病T细胞株Jurkat的抗人T淋巴细胞免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte immunoglobulin,ALG)淋巴细胞毒效价定量检测方法,并进行验证。方法 采用人Jurkat细胞作为靶细胞,抗人T细胞兔免疫球蛋白(商品名：Grafalon)作为待检样品,建立其淋巴细胞毒效价定量检测方法。优化反应体系,考察细胞培养密度、细胞代次对待检样品效价的影响,并对方法的精密度进行验证。结果 优化的反应体系组成为50μL待检样品+50μL补体(1∶5稀释)+50μL细胞(5×10⁶个/mL);细胞传代密度为2×10⁵个/mL传代培养72 h或3×10⁵个/mL传代培养48 h用于效价测定最佳;当细胞生长状态较好且一致时,从P10到P25代次的细胞效价测定结果较一致。采用该方法板内重复测定待检样品效价,变异系数(CV)为6.32%,重复性良好;不同代次Jurkat细胞测定待检样品效价6次,CV为4.15%,中间精密度良好。结论 建立了一种便捷、精确的测定ALG淋巴细胞毒效价的定量检测方法,为...     

人血清中抗鼠抗体间接ELISA检测方法的建立及临床应用

目的建立检测人血清中抗鼠抗体(HAMA)的间接ELISA法,并进行临床标本检测。方法采用间接ELISA法,选择最佳实验条件,确定阴阳性血清判定的界值,并进行方法学验证;用该方法检测WuTacⅠ期临床观察的健康志愿者血清抗鼠抗体。结果间接ELISA的最佳试验条件为:抗原包被浓度0.313μg/ml,血清稀释度1∶160,酶标抗体稀释度1∶80 000;阴阳性血清界值为0.210;该方法检测HAMA阳性标本的试验内和试验间变异系数分别为7.46%和5.48%,检测HAMA阴性标本的试验内和试验间变异系数分别为8.03%和14.7%;与马、山羊、兔、猴等动物血清无交叉反应;健康志愿者HAMA约在用药后10～14 d产生。结论已成功建立了检测人血清中抗鼠抗体的间接ELISA法,符合我国生物药品临床试验检测的要求。     

高效液相色谱法测定静脉注射犬血免疫球蛋白的麦芽糖含量

目的采用高效液相色谱法测定静脉注射犬血免疫球蛋白中的麦芽糖含量。方法采用苯乙烯-二乙烯基苯共聚物为基质的阳离子交换色谱柱(300mm×7.8mm,8μm),流动相为0.004mol/L硫酸溶液,流速为0.8ml/min,柱温50℃;将麦芽糖含量与其峰面积进行直线回归,建立标准曲线;样品经磺基水杨酸处理后进样,根据峰面积计算麦芽糖含量。结果该方法的标准曲线相关性良好,r=0.99968,精密性检测RSD为0.35%,回收率为99.58%。结论高效液相色谱法快速、准确、回收率高,适用于检测静脉注射犬血免疫球蛋白的麦芽糖含量。     

应用ELISA间接法检测VZV IgG

应用ELISA间接法检测人血清的VZV抗体具有高度的特异性。在VZV患者恢复期血清中分别加入VZV、HSV－1、HSV－2和CMV抗原做阻断抑制试验，只有VZV抗原有阻断其IgG抗体的活性，其阻断率达98％以上；血清中存在HSV－1、HSV－2和CMV抗体不影响VZVIgG的检测结果。用本法检测VZVIgG滴度比IFA、CF和NT高数十倍，用于流行病学调查和免疫应答评价均获得满意的结果。     

静注人免疫球蛋白唾液酸含量测定方法的建立及初步应用

目的建立静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulins,IVIG)唾液酸含量的测定方法,并用该方法对国内外IVIG制品唾液酸含量进行检测。方法根据《中国药典》三部(2015版)和《欧洲药典》8.0中的相关内容建立唾液酸含量检测的方法,对方法中的检测波长、反应体系、沸水浴时间及样品检测浓度进行优化,并验证该方法的线性范围、精密性及准确性。采用建立的方法检测国内外7个厂家的21批IVIG制品唾液酸含量,并进行比较。结果最适检测波长为580 nm;最佳N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminicacid,NANA)标准品、间苯二酚反应液、异戊醇的加入量分别为0.2、0.5、0.5 ml;最佳沸水浴时间为30 min;最佳样品检测浓度为2 mg/ml。NANA标准品在5~80μg/ml浓度范围内,与A580值呈良好的线性关系,相关系数(R2)=0.998;5批IVIG制品检测结果的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)平均值为3.72%,同一批IVIG制品于3个不同时间检测结果的RSD值为3.1%;IVIG样品的加标回收率为(98.5±7.9)%。不同厂家的IVIG制品唾液酸含量存在较大差异。结论本研究建立的方法具有良好的精密性及准确性,可用于IVIG唾液酸含量的检测。     

对10厂家低pH静脉注射用人血丙种球蛋白病毒灭活工艺的验证

以水泡性口炎病毒 (VSV)为指示病毒 ,对 10厂家的人血静脉注射用丙种球蛋白 (IVIG)生产中的低pH病毒灭活工艺进行了验证 ,结果表明该方法是一种安全、有效且简便易行的病毒灭活方法 ,但仍存在局限性。同时 ,对病毒灭活验证实验中的一些问题进行了探讨。     

微柱凝胶法与试管抗人球蛋白法检测静注人免疫球蛋白中抗A、抗B血凝素滴度效果的比较

目的比较微柱凝胶法与试管抗人球蛋白法检测静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)中抗A、抗B血凝素滴度的效果。方法分别采用微柱凝胶法与试管抗人球蛋白法检测34批IVIG样品以及1批IVIG抗A、抗B血凝素最大效价国际标准品(07/310)中的抗A、抗B血凝素滴度,并分析两种方法检测结果的相关性、灵敏度和重复性。结果两种方法检测抗A、抗B血凝素滴度的结果均呈高度正相关性(r值分别为0.809 4和0.834 9,P均0.05);微柱凝胶法的灵敏度比试管抗人球蛋白法高约2个滴度;微柱凝胶法较试管抗人球蛋白法具有更好的重复性。结论微柱凝胶法与传统的试管抗人球蛋白法相比,具有高度相关性、更高的灵敏度和更好的重复性,可用于IVIG中抗A、抗B血凝素滴度的测定。