超声波辅助酶解制备泥鳅蛋白源ACE抑制肽

以泥鳅为原料,采用超声波辅助菠萝蛋白酶水解泥鳅蛋白制备降血压肽。在单因素试验的基础上,通过正交试验优化超声及酶解处理工艺,得到最佳的试验条件:超声功率300 W,超声波酶解处理时间2 h,处理温度50℃,p H=6.5、底物质量分数30%,此时泥鳅蛋白酶解液的ACE抑制率为90.8%。同未经超声波处理的泥鳅蛋白酶解液相比,酶解时间降低了2 h,处理温度降低5℃,加酶量降低18%,而且酶解液的ACE抑制活性得到提高。试验结果表明,超声波辅助酶解泥鳅蛋白可显著提高酶解效率,增强活性肽的ACE抑制活性。     

超声波辅助酶法制备辣木籽ACE抑制肽工艺优化

为进一步提高辣木籽蛋白资源的开发利用,采用盐提法提取辣木籽蛋白,再采用超声波辅助酶法制备辣木籽ACE抑制肽。以水解度和ACE抑制率为评价指标,通过单因素实验探究超声波功率、超声酶解时间、超声酶解温度及料液比对制备ACE抑制肽的影响,采用响应面法对制备工艺条件进行优化。结果表明：超声波辅助酶法制备辣木籽ACE抑制肽的最佳酶解工艺条件为碱性蛋白酶添加量5.5 mg/mL、pH 9、超声波功率500 W、超声酶解时间1.7 h、超声酶解温度55℃、料液比1∶45,在此条件下制备的酶解物ACE抑制率达到78.32%,水解度为7.78%。以辣木籽为原料制备ACE抑制肽作为功能性蛋白肽产品,可有效提高辣木籽蛋白资源的开发利用。     

酶解玉米胚芽粕制备ACE抑制肽的条件优化

采用碱性蛋白酶酶解玉米胚芽粕制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽,并以ACE抑制率为指标,在单因素的基础上,通过L9(34)正交试验来确定酶解的最佳工艺条件。最佳酶解条件为:底物浓度5%(w/v)、加酶量3%(w/w)、温度60℃、pH 8.5、水解时间2.5 h,在此条件下,水解物对ACE抑制作用最强,抑制率可以达到86.38%(此时水解度为22.76%)。以截留分子量为6KDa的超滤膜分离该水解物,测定两组分的ACE抑制活性。酶解液经超滤后组分Ⅱ(M6 kDa)的IC50值达到1.38 mg/mL,优于未超滤的酶解液的IC50值(3.16 mg/mL)。     

逆流超声辅助酶解法制备大米ACE抑制肽

研究逆流超声预处理大米蛋白对其碱性蛋白酶酶解制备血管紧张素转换酶(Angiotensin-I Converting Enzyme,ACE)抑制肽的影响。首先从米渣中提取大米蛋白,以ACE抑制率为主要指标,水解度为辅助指标,运用单因素逐级优化法对酶解反应的底物浓度、时间、温度、加酶量和pH进行参数优化,在此基础上筛选逆流超声模式的最佳超声参数。结果表明最佳酶解参数为底物浓度30 g/L、加酶量(E/S)7.5%、温度50 ℃、pH8.5和酶解时间60 min,此时酶解产物ACE抑制率为45.59%,水解度为21.49%。最佳超声参数为超声频率20 kHz、功率密度170 W/L、时间12.5 min。此时酶解液ACE抑制率达72.24%,水解度为21.64%,相较于未超声组ACE抑制率提高了57.42%,相较于传统超声组,ACE抑制率提高了11.36%。结果表明逆流超声波辅助酶解法能有效提高酶解效率、减少能耗、促进ACE抑制肽制备。     

扫频超声波预处理对麦胚蛋白制备ACE抑制肽的影响

研究了扫频式超声波预处理对小麦胚芽蛋白制备ACE抑制肽的影响。以ACE抑制活性和水解度为指标,为了提高蛋白质酶解制备ACE抑制肽的反应效率,改善酶解物的ACE抑制活性,考察了超声频率、扫频周期、上、下振板间距、超声时间和料液浓度对小麦胚芽蛋白预处理效果的影响。试验结果表明,在超声波总功率600 W/30 L、料液初始温度35℃和超声波每工作250 s间歇5 s的前提下,扫频式超声波预处理麦胚蛋白的最佳条件是:上、下振板的超声波频率分别为(24±2)k Hz和(68±2)k Hz、扫频周期170 ms、振板间距5 cm、超声波时间140 min、料液质量浓度1.0 g/100 m L。在此条件下,酶解产物的ACE抑制率可达到36.50%,半数抑制剂浓度IC50为0.53 mg/m L,产物转化率77.5%±2.8%。超声波预处理对麦胚蛋白的水解度和酶解产物的转化率没有明显影响,而使其水解产物的ACE抑制活性显著提高。扫频式超声波的预处理效果优于定频式超声波。     

超声预处理辅助酶解玉米胚芽ACE抑制肽的研究

旨在研究不同工作模式的超声预处理对玉米胚芽蛋白酶解制备血管紧张素转换酶(Angiotensin-I Converting Enzyme,ACE)抑制肽的影响。以蛋白转化率和高活性肽占比为指标,利用聚能逆流双频、发散三频和对振双频的超声设备,对玉米胚芽粕进行预处理,得到最优的超声预处理模式;采用单因素逐级优化法来确定最佳超声预处理参数;在最优超声处理条件下,优化酶解反应条件。结果表明分子量在300~1000 Da的多肽ACE抑制活性最高,IC₅₀值为0.78 mg/mL;最优的超声模式为20/40 kHz交替双频,最佳超声预处理参数为功率密度100 W/L、底物浓度为8%、超声时间20 min、超声温度30 ℃,酶解条件为加酶量2000 U/g蛋白、酶解时间2.5 h。在最优条件下,蛋白转化率为85.00%,相比于未超声组的73.01%提高了16.42%;高活性肽占比为29.63%,相比于未超声组的26.00%提高了13.96%。因此,逆流双频超声波辅助酶解法能有效提高蛋白转化率和产物ACE抑制活性,有利于ACE抑制肽的制备。     

米糠蛋白源ACE抑制肽的酶解制备及活性研究

目的：开发米糠新产品。方法：以ACE抑制率为指标,通过单因素和响应面试验对米糠蛋白进行酶解工艺优化研究,并对最优酶解物活性肽进行超滤分离、活性评价和氨基酸组成分析。结果：米糠蛋白最优酶解工艺条件为：pH 7.2,底物质量浓度8.2 g/100 mL,酶解温度46 ℃,酶解时间3 h,酶添加量0.3 g/100 g米糠蛋白,在此条件下所得酶解物ACE抑制率为(73.15±0.64)%,而且酶解物含有丰富的疏水性氨基酸(23.09 g/100 g);活性分析表明,分子量＜3 kDa活性肽组分在同质量浓度(1.0 mg/mL)下ACE抑制活性[(81.68±1.08)%]优于分子量＞3 kDa活性肽组分[(58.65±2.21)%]和酶解物[(72.64±1.61)%]。结论：米糠蛋白酶解物具有显著的ACE抑制活性,活性肽组分的分子量对ACE抑制活性具有显著影响。     

超声波辅助酶解法制备豆粕ACE抑制肽的工艺优化

该试验采用超声波辅助酶解法,研究豆粕血管紧张素转化酶（angiotensin-converting enzyme,ACE）抑制肽的制备工艺条件,并通过响应面优化单因素试验结果。选用5种蛋白酶分别水解豆粕,以ACE抑制率为指标,挑选出最适蛋白酶,结果表明：碱性蛋白酶的ACE抑制率最大,所以选择碱性蛋白酶进行酶解。为提高ACE抑制率,加入超声波预处理,最终确定最佳工艺条件为在超声温度73℃、超声时间39 min、料液比1∶6(g/mL)条件下,再加入7.20%碱性蛋白酶水解3.6 h,在此条件下所制备的豆粕ACE抑制肽的ACE抑制率为61.02%。     

超声波辅助酶解制备猪肩胛骨降血压肽的工艺及酶解效果比较

采用超声波辅助风味蛋白酶酶解制备猪肩胛骨降血压肽并与常规酶解(未经超声处理的酶解)所得酶解液做比较。以酶解液的血管紧张素转化酶(ACE)抑制率为主要指标,考察超声功率、超声时间、超声温度、超声工作间隙、超声后酶解时间对酶解液ACE抑制率的影响,并在此基础上进行响应面优化实验。通过实验,获得的最佳超声条件为:超声时间25min,超声功率717W,超声温度40℃,超声工作间隙比1∶1.5(s/s),酶解时间3h,在该条件下,得到的酶解液ACE抑制率理论值为75.29%。此条件下制备出ACE抑制率为75.58%的猪肩胛骨降血压肽,比常规酶解提高了10.27%。半数抑制浓度(IC50)值下降32.8%,酶解时间缩短1.5h。     

双酶水解乳清蛋白ACE抑制肽的制备工艺优化

以乳清蛋白为原料,采用胃蛋白酶和胰蛋白酶双酶先后水解乳清蛋白,通过单因素试验和正交试验优化胃蛋白酶和胰蛋白酶水解乳清蛋白制备血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的工艺,将水解物以3 kDa超滤膜过滤,研究表明,胃蛋白酶水解乳清蛋白最佳酶解工艺条件为水解温度37℃、底物质量浓度6 g/100 mL、酶与底物比3 728 U/g,此时乳清蛋白ACE抑制率为86%;胰蛋白酶水解乳清蛋白最佳酶解条件为温度55℃、底物质量浓度6 g/100 mL、酶与底物比3 480 U/g,此时ACE抑制率为72%。利用超滤离心管获得分子量小于3 kDa的乳清蛋白ACE抑制率96%。     

超声波和微波技术在芝麻饼粕ACE抑制肽制备中的应用

为了探索超声波和微波技术在芝麻饼粕ACE抑制肽制备中的应用,分别以超声波和微波对芝麻饼粕预处理,超声波辅助酶解,研究了超声波功率、超声波时间、微波功率、微波时间和加酶量对ACE抑制率的影响。结果表明:超声波预处理功率为4 W/m L、预处理10 min、添加1 300 U/g碱性蛋白酶时得到的芝麻饼粕ACE抑制肽的IC50值为2.81 mg/m L。超声波辅助酶解过程中超声功率选择0.5 W/m L、添加1 700 U/g碱性蛋白酶、酶解15 min时得到的芝麻饼粕ACE抑制肽的IC50值为2.96 mg/m L。微波预处理功率为1.33W/m L、微波预处理5 min时得到的芝麻饼粕ACE抑制肽的IC50值为2.81 mg/m L。     

超声预处理时间对金枪鱼皮酶解过程ACE抑制肽释放的影响

以水解度、ACE抑制率为指标,并通过电泳、HPLC、红外光谱(FTIR)、热稳定性分析(DSC)研究不同超声预处理时间对金枪鱼皮酶解过程ACE抑制肽释放的影响。结果表明,酶解5 min后,超声预处理组酶解液的水解度与未处理组呈现显著性差异(p<0.05),并且ACE抑制率均高于未处理组,说明超声预处理可改变金枪鱼皮胶原酶解模式,加快短时酶解过程中ACE抑制肽的快速释放。电泳和HPLC分析表明,随着酶解过程的进行,10 kDa以下小分子组分含量呈现往复增减变化,超声预处理会加速该过程进行,从而提高其释放效率。FTIR和DSC分析可知,超声处理会破坏鱼皮胶原蛋白内部氢键的平衡,使其三螺旋结构松散,更多酶切位点暴露,说明超声处理能促进短时酶解过程ACE抑制肽的快速释放。     

响应面优化超声波辅助酶法提取油莎豆ACE抑制肽的工艺

本文在单因素实验的基础上用响应面法优化了超声辅助酶提取油莎豆ACE（angiotensin converting enzyme）抑制肽工艺,并通过对血管紧张素转化酶的抑制实验选取了最佳辅助酶。结果表明,底物浓度3%、超声处理20 min、酶解温度45 ℃、加酶量5000 U/g、超声功率180 W、酶解3 h是超声波辅助酶法提取油莎豆ACE抑制肽的最佳工艺条件,最佳辅助酶-碱性蛋白酶,在此条件下ACE抑制率为74.16%。本研究为提取油莎豆ACE抑制肽提取了一定理论依据,为进一步研究油莎豆ACE抑制肽奠定了基础。     

利用对虾消化腺丝氨酸蛋白酶制备鲍鱼外套膜ACE抑制肽

利用鲍鱼加工副产物外套膜制备具有抑制血管紧张素转移酶(angiotensin converting enzyme,ACE)活性的生物活性肽,为鲍鱼加工副产物的高值化利用提供新思路.采用从凡纳滨对虾消化腺中制备的丝氨酸蛋白酶,酶解皱纹盘鲍外套膜蛋白,以酶解物ACE抑制活性为评价指标优化条件.酶解液通过3 kDa超滤膜后,...     

一种新型绵羊乳酪蛋白ACE抑制肽结构鉴定及分子结合机制分析

本研究旨在利用蛋白酶水解绵羊乳酪蛋白,制备新型血管紧张素转化酶（Angiotensin-I-Converting Enzyme,ACE）抑制肽并对其分子抑制机制进行分析,为功能性绵羊乳多肽乳制品开发提供技术支持。试验以绵羊乳酪蛋白为原料,以水解度、ACE抑制率和分子量分布为评价指标,从四种蛋白酶中筛选最适蛋白酶,选择<3 kDa的组分通过LTQ Orbitrap Velos质谱仪进行肽鉴定,筛选潜在的ACE抑制肽进行人工合成并测定其半抑制浓度（IC₅₀）,采用Linewaver-Burk作图确定酶抑制动力学,结合分子对接进一步解释肽段的抑制机制。结果表明:碱性蛋白酶为最佳水解蛋白酶;从κ-酪蛋白中筛选出一种新的ACE抑制肽KYIPIQY,半抑制浓度（IC₅₀）为5.73 μmol/L;Linewaver-Burk图表明该肽对ACE为混合型抑制模式;分子对接显示,KYIPIQY通过与ACE的S1和S2活性口袋形成氢键和疏水作用力发生紧密结合并且可以扭曲ACE的Zn2+四面体,抑制ACE催化活性的失活而发挥高效的ACE抑制活性。     

预处理对胶原蛋白水解和血管紧张素转化酶抑制肽段释放的影响

以胰蛋白酶为工具酶,研究短时热处理、超高压处理对胶原蛋白水解和血管紧张素转化酶（angiotensinconverting enzyme,ACE）抑制肽段释放的影响。结果表明：热处理可显著促进胰蛋白酶对胶原蛋白的水解和ACE抑制活性肽段释放,超高压处理组水解物水解度（degree of hydrolysis,DH）与无处理组无显著差异,ACE抑制活性显著低于无处理组。水解物DH和ACE抑制活性关系研究显示,胰蛋白酶水解胶原蛋白过程中,水解度小于5%时,ACE抑制率随水解度呈明显上升趋势,水解度大于5%后,其上升趋势不再明显。肽谱分析进一步证明热处理可有效促进胶原蛋白的水解,超高压处理可改变胰蛋白酶作用位点。热处理组水解物序列分析显示,获得序列均来源于胶原蛋白三螺旋区域,且大部分序列都具有潜在的ACE抑制活性。说明短时热处理可以有效破坏胶原蛋白的三螺旋结构,促进ACE抑制肽段的释放。     

龙须菜蛋白的提取工艺优化及降血压组分制备

目的 优化龙须菜蛋白的提取工艺,并制备降血压组分。方法 从胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶中筛选能获得最佳蛋白提取率的蛋白酶,采用单因素试验考查pH、底物浓度、酶解温度、酶底比、酶解时间对蛋白提取率和ACE抑制率的影响,采用响应面法确定最佳工艺条件,采用超滤膜分离技术龙须菜蛋白酶解液中制备血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme, ACE)抑制肽,并考察其ACE抑制率。结果 最佳酶解工艺条件为:pH 8.4、底物浓度18%、温度55℃、酶底比2.0%、碱性蛋白酶酶解3 h,酶解液的蛋白提取率为(19.54±0.56)%、ACE抑制率为(91.12±0.17)%;将酶解液分别通过10、5、1 kDa超滤膜,利用ACE抑制率来验证降血压活性, 1 kDa超滤膜的酶解液ACE活性最高,达到(71.37±0.22)%。结论 龙须菜可作为分离纯化制备龙须菜降血压肽的优质资源。     

益生菌发酵制备金针菇血管紧张素转化酶抑制肽

为了获得高活性的金针菇血管紧张素转化酶（ACE）抑制肽,该研究对益生菌发酵制备金针菇ACE抑制肽的工艺条件进行了优化,并采用超滤法对ACE抑制肽进行了分级分离和活性鉴定。试验以ACE抑制率为评价指标,对枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）和黑曲霉（Aspergillus niger）三种益生菌进行了筛选,优选出沉淀分离活性肽的最适pH,然后采用单因素和响应面设计对发酵条件进行了考察。结果表明,确定枯草芽孢杆菌为最适菌种;沉淀ACE抑制肽的最适pH为6;最佳发酵条件为蒸馏水与金针菇粉液料比5∶1(mL∶g)、发酵时间16 h、发酵温度37℃、金针菇粉用量35 g/500 mL三角瓶,于此条件下ACE抑制率实测值为（51.25±1.02）%;截留分子质量<3 kDa的ACE抑制肽活性最强。