基于UPLC/Q-TOF-MS/MS分析鳖血柴胡皂苷类化学成分

以鳖血柴胡(Bupleuri radix with turtle blood)炮制品为原料,基于超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF-MS/MS)分析手段,建立皂苷类成分快速分析方法。采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.01%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,体积流量0.3 mL/min,进样量2μL,柱温40℃,ESI采用负离子扫描模式采集数据。结果表明:利用已建立的筛查数据库将满足质量误差小于5×10-6、同位素分布正确且含有二级质谱裂解碎片的离子作为分析目标化合物,结合软件Formula Finder,Mass Calculators等功能、在线数据库(Human Metabolome Database、Pub Chem、Mass Bank、Chem Spider等)及二级碎片裂解规律,从鳖血柴胡中共分离和鉴定出44个皂苷类成分,主要为环氧醚型、异环双烯型、12-烯型、12-烯-28-羧酸型柴胡皂苷。综上分析,UPLC/Q-TOF-MS/MS方法能快捷、准确、较全面地鉴定鳖血柴胡中皂苷类成分,为鳖血柴胡的质量评价指标选择和药效物质基础的研究提供可行方法。     

基于UFLC-Triple TOF MS/MS技术分析竹节参中皂苷类成分

采用超快速液相色谱-三重四极杆飞行时间质谱技术对竹节参中皂苷类成分进行分析。采用色谱柱SynergiTM Hydro-RP 100 ?（2.0 mm×100 mm,2.5 μm）,以0.1%甲酸-水（A）-0.1%甲酸-乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱;在电喷雾负离子扫描模式下采集数据。根据高分辨质谱提供的准分子离子和碎片离子的精确分子质量信息,结合标准品对照与参考相关文献数据,初步鉴定出53 种皂苷,包括18 种原人参二醇型、21 种原人参三醇型、10 种齐墩果烷型和4 种奥寇梯木醇型皂苷。本实验可为探索竹节参药材的药效物质基础和建立其药材品质的综合评价体系提供基础资料。     

高效液相色谱-串联质谱法测定婴幼儿配方乳粉中A1 β-酪蛋白、A2 β-酪蛋白含量

建立婴幼儿配方乳粉中A1、A2 β-酪蛋白的高效液相色谱-串联质谱测定方法。乳粉经尿素溶液溶解稀释,胰蛋白酶酶解,过膜后利用ACQUITY UPLC Peptide BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱分离,0.1%甲酸水、0.1%甲酸乙腈为流动相梯度洗脱,高效液相色谱-串联质谱仪测定。结果表明,A1、A2 β-酪蛋白在0.02～2.00 mg·mL^-1线性范围内,相关系数(R²)均≤0.99,检出限为0.05～0.10 g·kg^-1;定量限为0.2～0.5 g·kg^-1;平均回收率在92.08%～105.29%;平均相对标准偏差为1.5%～7.9%。随机选取了10个品牌的婴幼儿配方乳粉进行测定,得到A1 β-酪蛋白、A2 β-酪蛋白的含量在0～30.3 g·kg^-1。     

UPLC-MS/MS法测定食品接触用竹制品中12种抑菌剂

建立了超高效液相色谱-串联质谱法同时测定食品接触用竹制品中12种抑菌剂含量的分析方法。竹制品样品经乙腈超声提取后,萃取液经NH₂固相萃取柱净化和水浴旋转蒸发浓缩,采用Acquity UPLC HSST3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)进行分离,以流动相A 0.05%甲酸+5 mmol·L^-1甲酸铵水溶液-B 0.05%甲酸+5 mmol·L^-1甲酸铵甲醇溶液进行梯度洗脱,色谱柱温度为40℃,流速为0.35 mL·min^-1,电喷雾离子源(ESI)正/负离子扫描,多反应监测模式对12种抑菌剂进行定量检测。结果表明,待测组分在对应的标准曲线浓度范围内线性关系良好,R²≥0.995 6;方法检出限在0.25～1.63μg·L^-1,定量限在0.77～4.95μg·L^-1;回收率在85.4%～110.4%,相对标准偏差在2.6%～8.7%。该方法样品前处理简单、重现性好、灵敏度高、准确度高,适用于食品接触用竹制品中12种抑菌剂的...     

藜麦甾醇提取工艺优化及脂肪酸组成分析

以藜麦为原料,藜麦甾醇得率为考察指标,利用超临界CO2-皂化法萃取藜麦甾醇,通过单因素和正交试验确定最佳提取工艺条件,利用气相色谱串联质谱法（gas chromatography-mass spectrometer,GC-MS）对藜麦油脂进行成分分析。结果表明,提取藜麦甾醇的最佳条件为：萃取压力25 MPa、萃取温度50℃、萃取时间2.0 h,在此条件下,藜麦甾醇的得率可达20.20 mg/g。从藜麦油脂中共分离鉴定出29种脂肪酸,其中主要的脂肪酸为亚油酸、亚麻酸和油酸,不饱和脂肪酸的含量为74.59%,超长链脂肪酸含量高达27.66%,是其它品种藜麦含量的2倍;支链脂肪酸的含量达0.63%。该研究为藜麦的深度开发和质量评价提供理论依据。     

高效液相色谱-蒸发光散射法同时测定山银花提取物中5种皂苷的含量

目的建立高效液相色谱-蒸发光散射法(high performance liquid chromatography-evaporative light scattering,HPLC-ELSD)同时测定山银花提取物中5种皂苷的含量的分析方法。方法采用Agilent ZORBAX SB-C_(18)(250 mm×4.6 mm, 5μm),以乙腈-0.1%甲酸溶液作为流动相进行梯度洗脱,流速为0.8 mL/min,柱温为30℃,漂移管温度为60℃。结果 5种皂苷(灰毡毛忍冬皂苷乙、灰毡毛忍冬皂苷甲、川续断皂苷乙、灰毡毛忍冬次皂苷乙和灰毡毛忍冬次皂苷甲)在一定范围内线性关系良好(r为0.9989～0.9999),回收率为95.74%～97.02%,相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)为0.9%～1.4%(n=6)。结论本法简便、可靠、准确,适用于山银花提取物的质量控制。     

UPLC-MS/MS法同时快速测定保健食品中7种非法添加药物

目的：建立同时快速测定保健食品中阿伐那非、米罗那非、乌地那非、西地那非、他达拉非、沙格列汀和西布曲明等7种非法添加药物的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。方法：试样前处理采用乙腈为提取溶剂,经超声处理,Waters ACQUITY UPLC?BEH C₁₈(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱分离,以水(含0.1%甲酸)-乙腈(含0.1%甲酸)为流动相梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温30℃,进样量2μL。质谱采用电喷雾离子源,以正离子多反应监测模式进行定性和定量分析。结果：7种非法添加药物在本方法色谱和质谱条件下8 min内能得到快速分离,在10～500 ng·mL^-1线性关系良好,相关系数R为0.997 1～0.999 2,检出限为0.002 5 mg·kg^-1。结论：本方法前处理过程简单快速,选择性强,灵敏度高,能够快速、准确地同时对保健食品中非法添加的阿伐那非、米罗那非、乌地那非、西地那非、他达拉非、沙格列汀和西布曲明进行定性及定量测定。     

HPLC-DAD-MS/MS法分析金银花中化学成分

目的采用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)和液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)法分析金银花中的化学成分。方法 Hypersil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相A为水(0.1%甲酸),B为乙腈(0.1%甲酸),梯度洗脱,流速1.0 m L/min,DAD扫描波长范围为200~400 nm。质谱采用电喷雾离子源(ESI),正、负两种离子检测模式同时对金银花中化学成分进行多级质谱裂解分析。以对照品及文献数据为对照,通过解析各成分的MS/MS谱图,指认各成分。结果共鉴定了17个金银花中的主要成分,包括6个有机酸类成分,3个黄酮类成分,及8个环烯醚萜。结论此法操作简单、快速、灵敏,适用于金银花中化学成分的分析和结构鉴定。     

藜麦皂苷的提取及其酪氨酸酶抑制活性

探究藜麦"陇藜1号"籽粒中皂苷的最佳提取条件并验证其酪氨酸酶抑制活性。设计三因素三水平正交实验,探索料液比,乙醇浓度及超声时间对藜麦皂苷提取得率的影响。构建L-多巴诱导的B16细胞模型,测定藜麦皂苷对细胞活性及酪氨酸酶活性的影响,最终通过免疫印迹法(Westernblot)探索藜麦皂苷影响酪氨酸酶活性的作用通路。结果显示:藜麦皂苷最佳提取条件为料液比1:40,70%浓度的乙醇下超声60 min,得率为17.85 mg/g。当藜麦皂苷的浓度低于200μg/m L时,其对B16细胞无显著抑制作用,但能显著抑制酪氨酸酶的活性和黑色素的形成,200μg/m L藜麦皂苷处理B16细胞72 h,黑色素相对含量降至73.85%,酪氨酸酶活性降至53.31%。藜麦皂苷通过抑制小眼畸型相关转录因子(MITF)及酪氨酸酶(TYR)蛋白表达来抑制黑色素形成。藜麦皂苷可以作为一种具有美白活性的组分在化妆品或药品中应用。     

复合酶辅助提取藜麦种皮皂苷的工艺优化与结构鉴定

采用复合酶辅助乙醇提取藜麦种皮中皂苷，在单因素试验的基础上，通过响应面法优化提取工艺，并鉴定其结构。结果表明：最佳提取工艺为复合酶(纤维素酶∶果胶酶质量比1∶1)添加量2.1%(以藜麦种皮质量为基准)、酶解时间1.0 h、酶解温度48℃、pH 4.8,在此条件下藜麦皂苷得率为(42.220±0.620)mg/g,比乙醇提取法、纤维素酶法和果胶酶法分别高15.935、6.647、8.531 mg/g。经鉴定，该化合物为美商陆酸3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1,3)-α-L-吡喃阿拉伯糖基]-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，分子式为C₄₈H₇₆O₂₀。     

Quinoa saponins—analysis and preliminary investigations into the effects of reduction by processing

A gas chromatographic method has been developed for the analysis of saponins in quinoa (Chenopodium quinoa Willd). The method, which involves separation and quantitation of the trimethylsilylated sapogenols, has been applied to the analysis of the UK-grown crop obtained by selection from lowland Chilean ecotypes. Total saponin contents of 1·03 and 1·19% were found for material grown in 1987 and 1988. The major aglycone in the quinoa saponin mixture was identified as phytolaccagenic acid (>40% total), with hederagenin (～25%) and oleanolic acid (30%) aglycones also being present. The effects of washing and abrasion on total and individual saponin content were investigated; the data obtained suggest differential cellular locations of the individual saponins. The processing of quinoa led to changes in sensory characteristics; removal of saponins was associated with reductions in bitterness and astringency. Microscopic analysis revealed considerable differences in washed and abraded samples, both before and after cooking; in particular the abraded samples showed a greater degree of cellular disruption.     

Occurrence of saponins and sapogenols in Andean crops

Samples of bitter seeds of local ecotypes and cultivars of lupin (Lupin mutabilis), white and yellow ecotypes of quinoa (Chenopodium quinoa Wild) and a local ecotype of amaranth (Amaranthus caudatus) grown in the Peruvian highlands were analysed for total saponin content and sapogenol composition. Sweet cultivars of L albus and L luteus cultivated in mild-rainy lowlands of Chile were also analysed for comparison. Fast atom bombardment-mass spectrometry (FAB-MS) of the saponin extracts and gas chromatography (GC) analysis of the sapogenols after acid hydrolysis of the crude extract-were used for the identification and quantification of saponins. It was found that L albus and amaranth had undetectable levels of saponins making them attractive for human consumption. The cultivars and ecotypes of L mutabilis contained saponin levels in the range of 229.8–390.5 mg k^?1. FAB-MS showed the presence of soya saponins I and II, whereas GC allowed the identification of soya sapogenols A and B. The same saponin composition was determined in L luteus whose total content was 55.3 mg kg^?1. Saponin composition in quinoa seeds comprised oleanolic acid and three other sapogenols identified as hederagenin, phytolaccagenic acid and deoxyphytolaccagenic acid. Oleanolic acid saponins were found to be the main class of saponin in quinoa seeds sampled for this study. The yellow ecotype of quinoa presented a significantly higher content of saponins and of oleanolic acid as compared to white ecotypes. Since only one ecotype of amaranth was analysed, the nutritional significance of no detectable saponin needs further study. It was concluded that the environmental conditions in the Peruvian highlands are determinants of the amount and composition of saponins present in bitter lupine and quinoa.     

超高压法提取藜麦皂苷的工艺研究

为寻找一种简单有效的提取藜麦皂苷的方法,本实验采用超高压提取技术对藜麦种皮中的皂苷进行提取,利用香草醛-高氯酸比色法对皂苷浓度进行测定,以提取时间、提取压力、乙醇体积分数、料液比为主要因素,通过Box-Behnken响应面实验对提取工艺进行优化,得到最佳工艺条件为:提取时间8.27 min,提取压力294 MPa,乙醇体积分数62%,料液比1∶162,在此条件下藜麦皂苷含量为(78.12±1.03) mg/g。说明超高压提取技术具有提取时间短,操作简单,提取率高等优点,是提取藜麦皂苷的一种简单有效的方法。     

藜麦麸皮皂苷的抗氧化活性及基于代谢组学探究其改善非酒精性脂肪肝的作用机制

探究藜麦麸皮总皂苷的体外抗氧化活性；建立SD大鼠非酒精性脂肪肝（Nonalcoholic Fatty Liver Disease，NAFLD）模型，经藜麦麸皮总皂苷干预后，通过肝脏油红染色和检测肝脏胆固醇（Total Cholesterol，TC）、甘油三酯（Triglyceride，TG）以及血清谷丙转氨酶（Alanine Aminotransferase，ALT）、谷草转氨酶（Aspartate Aminotransferase，AST）、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）和还原性谷胱甘肽（Glutathione，GSH），探究对脂质堆积和氧化损伤的影响。采用超高效液相色谱-质谱（Ultra-Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry，UPLC-MS）对尿液代谢物进行代谢组学分析，揭示皂苷预防NAFLD的机理。体外结果表明，皂苷质量浓度为0.1~10 mg/mL时，DPPH自由基清除能力和总还原力分别最高可达86.25%和0.49；动物实验表明，藜麦麸皮总皂苷有效减少肝脏脂质堆积，降低肝脏TC、TG和血清ALT、AST与MDA（P<0.05），升高GSH（P<0.05）；尿液代谢物谱发生明显变化，主要改善了甘氨酸和丝氨酸代谢和甜菜碱代谢等通路。综上，藜麦麸皮总皂苷具有良好的体外抗氧化活性；对高脂饮食诱导的NAFLD有显著的降脂护肝作用，可能与通过调节内源性代谢物，改善多条代谢途径有关。     

Variation in saponin content during the growing season of spotted medic [Medicago arabica (L.) Huds.]

BACKGROUND: Spotted medic [Medicago arabica (L.) Huds.] is a minor forage species containing saponins which are reported to be biologically active. This study assessed the concentration and composition pattern of spotted medic saponins during the growing season and at senescence. The pattern of saponins was based on identification and quantification of their constituent sapogenins. At senescence, individual saponin concentrations of aerial and subterranean plant organs were also determined. RESULTS: Leaf total saponin content did not vary during the growing season and decreased remarkably at senescence. Seven sapogenins were identified and quantified during the season, bayogenin and hederagenin being the most abundant ones throughout. Total saponin content varied among plant organs at senescence, with the highest concentration in roots. A variable number of saponins from one (in seeds) to 19 (in leaves) were quantified. A clear relationship between leaf concentrations of sapogenins and those of their derivative saponins was revealed by correlation analysis. CONCLUSION: The species displayed a sapogenins/saponins pattern markedly different from those of other perennial or annual Medicago species. Saponins of queretaroic acid and 2β‐hydroxy queretaroic acid had no precedent in the Leguminosae. The high concentration of biologically active hederagenin suggested further assessment of possible effects on feeding animals. Copyright © 2010 Society of Chemical Industry     

藜麦糠皮皂苷脱除技术进展

藜麦皂苷属于齐墩果烷型五环三萜化合物，具有广泛的生理和药理活性，可以发挥抗炎、抗菌、抗螺、抗氧化、免疫调节以及提高皮肤渗透性等作用，在食品、药品和化妆品等行业有着重要的商业用途。藜麦糠皮是藜麦加工的副产物，由于皂苷含量高而无法在食品领域得到合理利用。截至目前，尚缺乏高效脱除藜麦糠皮皂苷的技术手段，因此，研究藜麦糠皮皂素的脱除具有重要的应用价值。本文总结了超高压脱除、超声波辅助脱除、微波辅助脱除、生物酶辅助脱除、双水相脱除、丙酮溶液脱除、超临界CO2脱除、离子液体脱除及低共熔溶剂脱除藜麦皂苷的技术特点，并结合作者的实践经验对原料预处理以及如何选择溶剂、温度和料液比等工艺参数进行分析，提出了改进建议。本综述对完善藜麦皂苷脱除技术、提高藜麦糠皮的综合利用效率具有重要的参考价值。     

藜麦皂苷研究进展

藜麦(Chenopodium quinoa Willd.)是南美洲特有的一种植物,其叶片、花、果实、籽实和种皮中富含皂苷,藜麦皂苷是一种苦味物质和抗营养因子。目前常用的皂苷提取方法主要有溶剂提取法、酸碱水解法、沉淀法、超临界CO_2法及超声波萃取法等。近年来的研究表明,藜麦皂苷具有抗氧化、抗肿瘤、抑菌、免疫调节等药理活性,这些特性都使藜麦皂苷成为医学、保健品、食品等行业的重点研究对象。本文主要对藜麦皂苷的研究现状、结构组成、提取方法、分离纯化、分析测定、生物活性、以及环境对藜麦皂苷的影响进行了概述,以期为藜麦的进一步研究开发提供参考。     

海苔发酵提取物对原发性高血压大鼠的降压效果研究

使用可以产生GABA的植物性乳酸菌对海苔进行发酵,得到富含10.5%GABA的海苔发酵提取物。本实验验证了海苔发酵提取物对原发性高血压模型大鼠(SHR)的降压效果。单次经口灌胃给药实验中,分别以2mg/kg·bw和0.2mg/kg·bw剂量的海苔发酵提取物一次性灌胃给药,给药后2、5、9、24h进行血压测定。结果表明,海苔发酵提取物2mg/kg·bw剂量组在给药后5h和24h均有显著降压效果(p<0.05,p<0.01)。长期摄食给药实验中,含有海苔发酵提取物0.001%和0.003%的饲料剂量组对成长期SHR和老龄期SHR分别摄食给药,给药后每2～3d进行一次血压和体重测量,结果显示含有海苔发酵提取物0.003%的饲料剂量组使成长期SHR和老龄期SHR血压均显著下降(p<0.01,p<0.05)。     

3种藜麦发芽过程中生物活性物质及其抗氧化活性的变化规律

分别以秘鲁黑藜麦、红藜麦、白藜麦为原料,研究其发芽过程中生物活性物质(γ-氨基丁酸、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、皂苷和多酚)含量及抗氧化活性的变化规律。结果表明:经72h发芽处理的黑、红、白藜麦中的γ-氨基丁酸含量有所增加,最高可分别达110.10,157.40,135.70mg/100g;表儿茶素含量增幅最大,分别增加了7.11,5.32,1.32倍;表没食子儿茶素没食子酸酯含量分别增加了4.23,2.79,3.29倍;此外,3种藜麦的皂苷含量和总多酚含量均随发芽时间的延长而增加;DPPH自由基清除率和铁离子还原能力的升高在一定程度上说明了发芽能提高藜麦的体外抗氧化活性。综上,通过发芽处理可有效提高藜麦中有益生物活性物质含量和抗氧化能力。     

水溶性苦瓜皂甙和苦瓜多糖提取方法的研究

以苦瓜为原料,采用微波辅助萃取、热水浸提、膜分离、大孔树脂层析等方法,对苦瓜中的主要活性成分苦瓜皂甙和苦瓜多糖进行了综合提取、分离和纯化。苦瓜皂甙晶体的得率为苦瓜干粉的0.024%,纯度为98.1%;苦瓜多糖的得率为苦瓜干粉的3.02%,纯度为87.5%。该工艺简单可行,提高了原料利用率和苦瓜中主要活性成分的综合提取率。