白藜芦醇治疗非小细胞肺癌机制的网络药理学分析及实验验证

目的：采用网络药理学和分子对接技术识别分析白藜芦醇抗非小细胞肺癌（NSCLC）的潜在靶点和作用机制,并结合临床数据以及分子生物学实验进行初步验证。方法：通过Swiss Target Prediction数据库和Target net数据库筛选白藜芦醇靶点,通过数据库Genecards、OMIM、TTD收集NSCLC靶点,利用Venny 2.1.0平台获得药物和疾病靶点的交集;应用Cytoscape 3.7.2软件与String数据库生成靶标蛋白互作网络（PPI）,并进行拓扑分析;利用Metascape数据库对交集靶标进行基因本体（GO）功能富集与京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析,得到交集靶标的基因图谱;利用Autodock Vina 软件对排名前三位的核心靶基因与白藜芦醇进行分子对接验证;通过癌症基因组图谱（TCGA）数据库获得临床病例样本,分析相关靶基因在NSCLC患者（n=1017）和健康人群（n=627）的表达情况;细胞水平采用Western Blot检测不同浓度（30、50 μmol/L）白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞SRC、EGFR及PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响。结果：筛选得到的潜在靶点共有40个,经过拓扑分析得到关键靶点8个,其中EGFR、SRC、ESR1等靶点与NSCLC密切相关;白藜芦醇抗NSCLC主要涉及肿瘤蛋白多糖、雌激素信号通路、PI3K/AKT等多条信号通路;分子对接显示,白藜芦醇与关键靶点具有稳定的结合能力;临床样本结果显示,靶基因EGFR、SRC、ESR1、HSP90AA1以及MMP9的表达在NSCLC中上调;TNF、CDC42以及RELA的表达在NSCLC中下调;细胞实验结果表明,白藜芦醇药物干预以剂量依赖的方式抑制了人肺腺癌A549细胞中SRC、EGFR、p-PI3K和p-AKT的蛋白表达。结论：揭示了白藜芦醇在治疗NSCLC的过程中涉及多个作用靶点及多条信号通路,明确了白藜芦醇可通过抑制PI3K/AKT信号通路发挥其抗癌效应。

     

甘草甜素调节U14宫颈癌小鼠免疫功能及诱导凋亡的作用

为探讨甘草甜素调节U14 宫颈癌小鼠免疫功能及诱导凋亡作用,将U14宫颈癌小鼠随机分为模型组、甘草甜素低、中、高剂量组（25、50、100 mg/kg）及环磷酰胺组（25 mg/kg）,另设正常组,每组10只;灌胃给药,1次/d,共21 d。测量各组小鼠瘤体积（最大直径）、瘤质量,计算胸腺指数、脾脏指数,TUNEL法检测细胞凋亡指数,实时定量PCR法检测Caspase-3、Bax及Bcl-2 mRNA表达,Western Blot法检测p-PI3K、p-AKT蛋白表达等指标。结果发现,与模型组比较,甘草甜素低、中、高剂量组小鼠瘤体积（最大直径）及瘤质量显著降低（P<0.05或P<0.01）,抑瘤率分别为15.68%、25.41%和38.38%;与模型组比较,甘草甜素低、中、高剂量组小鼠胸腺指数、脾脏指数、IL-2、IFN-γ、TNF-α含量、凋亡指数、Caspase-3及Bax mRNA表达显著增加（P<0.05或P<0.01）,而Bcl-2 mRNA及p-PI3K、p-AKT蛋白表达显著降低（P<0.05或P<0.01）。上述结果表明,甘草甜素具有抑制U14宫颈癌小鼠肿瘤生长的作用,该作用与改善免疫功能及诱导凋亡作用有关。     

连翘苷对食管上皮恶性转变细胞和食管癌Eca-109细胞的抑制作用及机制

目的：探究连翘苷对食管上皮恶性转变细胞和食管癌Eca-109细胞增殖、周期、凋亡、迁移、侵袭的影响,分析其对这两种细胞的抑制效果及其作用机制。方法：取食管上皮恶性转变细胞和食管癌Eca-109细胞,使用不同浓度（10、100μmol/L）的连翘苷处理干预细胞24 h,采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK8)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期、凋亡,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭,蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测细胞中磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphoinositide 3-kinase,PI3K）、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB),（也称为AKT）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（phosphorylated phosphatidylinositol-3-kinase,p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-PKB)（也称为p-AKT）、p21蛋白、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和基质金属蛋白酶9(ma...     

基于PI3K/Akt信号通路研究积雪草中微量皂苷（CA-1）的神经保护作用

利用6-羟基多巴胺（6-Hydroxydopamine,6-OHDA）诱导分化型PC12细胞构建的帕金森病（Parkinson’s Disease,PD）体外细胞模型,研究了从积雪草中提取的微量皂苷（Centella Asiatica Saponins-1,CA-1）的神经保护作用。通过高分辨二级质谱鉴定化学结构、分析了积雪草中常用皂苷和CA-1对PC12细胞存活率的影响,进一步通过半定量和实时定量聚合酶链式反应、蛋白印迹等技术检测PC12细胞中相关基因和蛋白表达。结果表明在该模型中100 μmol/L CA-1、积雪草苷（Asiaticoside,AS）、羟基积雪草苷（Madecassoside,MA）分别将细胞存活率提高了28.63%、16.69%、17.54%,CA-1的神经保护作用强于AS和MA（p<0.05）。与模型组相比,CA-1剂量依赖性地提高了6-OHDA诱导PC12细胞的存活率且在CA-1浓度为25 μmol/L与模型组有显著差异（p<0.05）,降低了细胞内活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）的水平,上调了Sod1、Cat、Bcl2基因表达。蛋白印迹法（Western Blot,WB）显示,CA-1提高了p85、PDK1、Akt的蛋白表达水平。在该研究中明确了CA-1的神经保护作用揭示了其作用可能通过PI3K/Akt信号通路。     

灵芝醇提物对改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用

研究讨论灵芝醇提物对地塞米松诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的影响。采用地塞米松诱导脂肪细胞胰岛素抵抗模型,将细胞分成正常组、模型组、灵芝醇提物组、二甲双胍（阳性对照）组,检测各组的葡萄糖消耗量和甘油三酯含量,分析灵芝醇提物对胰岛素抵抗的影响。建立模型的地塞米松处理组与正常组相比,1 μmoL/L地塞米松处理72 h显著降低了3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖消耗量（P＜0.05）,且胰岛素抵抗状态在24 h内维持稳定,脂肪细胞胰岛素抵抗模型构建成功。10、50、100 mg/L灵芝醇提物对细胞活力均无显著影响,灵芝醇提物处理细胞24 h能显著提高脂肪细胞的葡萄糖消耗量和细胞内甘油三酯的含量且呈剂量依赖性。同时灵芝醇提物处理后显著增加了胰岛素受体底物1、葡萄糖转运体-4、磷脂酰肌醇-3-激酶p110亚基、磷脂酰肌醇-3-激酶p85亚基、磷酸化蛋白激酶、磷酸化糖原合酶激酶3β蛋白的表达。结果表明灵芝醇提物通过IRS1/PI3K/AKT信号途径改善地塞米松诱导的脂肪细胞胰岛素抵抗。     

密生波罗花中神经酰胺类成分的抗炎作用

该研究运用硅胶柱层析法,结合超高效液相色谱-高分辨串联质谱联用技术以及核磁共振氢谱/碳谱等鉴定方法,从密生波罗花中分离鉴定了一组以神经酰胺为主的混合物,其中,神经酰胺类成分含量为81.53%,并对其抗炎作用进行了初步评价。噻唑蓝（MTT）检测结果显示低浓度的密生波罗花神经酰胺（6.25~50 μg/mL）对RAW264.7的细胞活性没有显著影响。密生波罗花神经酰胺能显著减少脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞一氧化氮（NO）的释放量,且当浓度为100 μg/mL时,对NO释放的抑制率最高,为91.07%±0.11%。密生波罗花神经酰胺能高效抑制LPS诱导RAW264.7细胞中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子（TNF-α）及一氧化氮合酶（iNOS）等炎症因子的mRNA表达水平,显著降低LPS诱导RAW264.7细胞中核因子κB抑制蛋白α（IκBα）、丙酮酸脱氢酶激酶1（PDK1）及AKT蛋白的表达及磷酸化水平。结果表明密生波罗花神经酰胺具有显著的抗炎活性,并可通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）信号通路发挥其抗炎作用,可为相关保健食品开发和该植物资源的合理利用提供一定的科学依据和数据支撑。     

D-手性肌醇对STZ诱导的2型糖尿病大鼠糖原合成的影响

主要探究D-手性肌醇对链脲佐菌素(STZ)诱导的2型糖尿病大鼠糖原合成的影响。实验选用SPF级雄性SD大鼠作为实验动物,高脂高糖饲料配合注射STZ溶液建造2型糖尿病模型,将实验动物分为正常对照组、模型对照组、D-手性肌醇低剂量组(L,30 mg/(kg BW·d))、D-手性肌醇高剂量组(H,60mg/(kg BW·d))和D-手性肌醇正常高剂量组(NH,60 mg/(kg BW·d))。N组和NH组饲喂正常饲料,其余3组饲喂高脂高糖饲料,5周后大鼠处死,对其肝脏和骨骼肌中的糖原含量进行检测,并利用PCR技术对大鼠肝脏和骨骼肌中的PI3K、Akt、GSK-3β和GS的表达量进行检测。实验结果表明:D-手性肌醇可以显著提高肝糖原含量(p0.01)肌糖原含量有提高的趋势,且能促进肝脏和骨骼肌中PI3K、Akt和GS基因的表达,抑制GSK-3β基因的表达。     

豌豆低聚肽对2型糖尿病小鼠肝脏PI3K/AKT/FOXO1信号通路的调节作用

本文旨在探究豌豆低聚肽对2型糖尿病(T2MD)小鼠肝脏磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/转录因子FoxO1(PI3K/AKT/FOXO1)蛋白表达的影响.通过对小鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ),建立2型糖尿病小鼠模型,并用二甲双胍和豌豆低聚肽分别饮食干预4周.结果表明,豌豆低聚肽组的小鼠糖尿病指征较模型组均有一定改善,且...     

巴戟天对人源结肠癌细胞HCT-116移植瘤的抑制作用及机制初步探讨

目的:检测巴戟天对人源结肠癌细胞HCT-116移植瘤的抑制作用及初步探讨其作用机制。方法:于雄性裸鼠腋下注射人源结肠癌HCT-116细胞,建立移植瘤模型,随后采用巴戟天乙醇提取物（Ethanol extract of Morinda officinalis, EEMO）（12 mg/kg/d）和巴戟天生药（Crude drug of Morinda officinalis, CDMO）（200 mg/kg/d）为实验组进行灌胃给药,以5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil, 5-FU）为阳性药（30 mg/kg,每3 d给药一次,腹腔注射）,以水（一次/d）为对照组,共四组（EEMO组、CDMO组、5-FU组和对照组）,持续给药23 d。通过检测各干预组动物的肿瘤重量、肿瘤体积、肿瘤组织病理变化判断巴戟天的抑癌作用;通过检测肿瘤组织血管生成因子（VEGF）、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和环氧化酶-2（COX-2）的表达水平以及巨噬细胞的极化趋势初步探讨其抑癌途径。结果:EEMO和CDMO能不同程度抑制小鼠移植瘤体积的增长（P<0.05）、降低移植瘤的重量（P<0.01）和降低血清前列腺素E2（PGE2）的水平（P<0.05）。蛋白免疫印迹和免疫组化的检测结果显示EEMO和CDMO可显著下调肿瘤组织VEGF、HIF-1α和COX-2的表达水平（P<0.01和P<0.05）。免疫荧光检测结果显示,EEMO和CDMO极显著增加iNOS的表达水平（P<0.01）,并且极显著提高iNOS/CD206的比例（P<0.01）。结论:EEMO和CDMO对小鼠体内的移植瘤发生有抑制作用,可能与其下调VEGF、HIF-1α和COX-2/PGE2信号通路的表达、增强巨噬细胞向M1型极化有关。     

鱼油对KKAy糖尿病小鼠糖代谢及PI3K/Akt信号通路的影响

目的：探讨鱼油对KKAy糖尿病小鼠糖代谢及磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）/蛋 白激酶B（protein kinase B,Akt）信号通路的影响。方法：40 只KKAy小鼠,分为模型组和鱼油低、中、高剂 量组,每组10 只。另设10 只C57BL/6小鼠为正常对照组。灌胃12 周后,测定血糖、胰岛素、脂联素、瘦素及 PI3K/Akt信号通路中相关基因的表达水平。结果：与模型组相比,鱼油低剂量组血糖水平极显著降低（P＜0.01）, 鱼油低、中剂量组胰岛素水平显著提高（P＜0.05）,鱼油各剂量组的脂联素水平显著提高（P＜0.05）。此外,鱼油 各剂量组可上调胰岛素受体底物-1、PI3K、Akt、葡萄糖转运蛋白-4基因的表达,其中低剂量鱼油对Akt和葡萄糖转 运蛋白-4基因的调控效果更显著。结论：低剂量鱼油可能通过调节PI3K/Akt信号通路改善糖代谢。     

茶枝柑皮多糖对H2O2诱导人神经细胞U251的保护作用

本论文研究了茶枝柑皮多糖H2O2诱导人神经细胞U251的保护作用。采用酸提法、经纯化后得到茶枝柑皮多糖。建立人神经细胞U251细胞损伤模型,测定细胞增殖率,采用0.30 mg/mL、0.60 mg/mL、1.25 mg/mL、2.50 mg/mL茶枝柑皮多糖干预,计算细胞存活率,检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽(GSH)的含量水平。茶枝柑皮多糖CPA-Ⅰ相对分子质量为7.96×10^4,20、50、180、375μmol/L H2O2细胞增殖率分别为91.60%、84.40%、60.00%、37.40%、12.30%与对照组比较,具有统计学差异(p<0.05)。180.0μmol/L H2O2导致人神经细胞U251损伤的最佳浓度。0.30、0.60、1.25、2.50mg/mL茶枝柑皮多糖细胞存活率分别为64.30%、76.10%、93.40%、98.20%与模型组53.00%比较,具有统计学差异(p<0.05)。2.50mg/mL茶枝柑皮多糖对细胞损伤模型干预的效果最明显,抗氧化作用最强。茶枝柑皮多糖对H2O2诱导人神经细胞U251具有一定的保护作用,通过调控SOD、GSH-Px、GSH、MDA水平起到抗氧化作用。     

海带多糖对人肝癌细胞Bel-7402增殖的抑制作用及其机制

目的：探讨不同质量浓度的海带多糖对人肝癌细胞Bel-7402增殖的抑制作用。方法：分别以质量浓度为5、10、20、30 mg/mL的海带多糖处理Bel-7402细胞,48 h后观察海带多糖对细胞增殖的抑制情况,Annexin V-FITC试剂盒检测细胞凋亡状况,酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法检测Caspase-3活性,Western blotting法检测细胞内Caspase-3和甲胎球蛋白（alpha-fetoprotein,AFP）表达量。结果：海带多糖对Bel-7402细胞的增殖有明显抑制作用,最佳抑制剂量为30 mg/mL;随着海带多糖质量浓度的升高,细胞凋亡率明显增加（P＜0.05）,海带多糖处理组Bel-7402细胞内的Caspase-3表达水平同正常对照组细胞相比呈上升趋势,差异具有统计学意义（P＜0.05）;AFP蛋白表达水平呈下降趋势。结论：海带多糖对人肝癌细胞Bel-7402增殖具有抑制作用,其机制可能是激活Caspase-3,引起细胞凋亡和AFP蛋白表达水平下降所致。     

婴儿源双歧杆菌对人胎结肠上皮细胞的增殖作用及机制研究

分析12株婴儿源双歧杆菌的发酵上清液和破碎物对人胎结肠上皮细胞(CCD841 CoN)的增殖效果。筛选出对细胞增殖促进效果最好的菌株,提取其表面蛋白和分泌蛋白,检测这两类蛋白对细胞增殖、周期及增殖相关基因表达的影响,探讨其对CCD841 CoN细胞增殖促进的作用。结果表明:筛选出双歧杆菌H3-R2,其浓度为50 μg/mL表面蛋白和10 μg/mL分泌蛋白与CCD841 CoN细胞共作24 h后,对细胞有显著增殖促进作用(P<0.05),提高细胞S期比例,降低G0/G1期比例(P<0.05),提高细胞内 β-catenin、c-Myc和Cyclin D1基因mRNA的转录水平(P<0.05),降低 Axin2、GSK-3β 基因mRNA的转录水平(P<0.05)。综上,婴儿源双歧杆菌可在mRNA转录水平上对人胎结肠上皮细胞有增殖促进作用,具有促进新生儿肠道发育的潜在应用价值。     

豆豉香气成分对CNE-1人鼻咽癌细胞凋亡诱导效果及机制

豆豉是一种具有很多益处的传统大豆发酵食品。本研究的目的是确定其香气成分在体外诱导细胞凋亡的作用及检验豆豉香气成分（volatile components of Douchi,VCD）与抗癌作用之间的关系。经0.4、0.8、1.6 mg/mL的VCD处理48 h后,人鼻咽癌CNE-1细胞的增殖受到抑制,且1.6 mg/mL的VCD具有最高的抑制效果（抑制率84.6%）。0.4 mg/mL和0.8 mg/mL的VCD处理同样表现出很好的抑制效果,抑制率分别为29.7%和55.6%。流式细胞术分析结果显示1.6 mg/mL VCD作用CNE-1细胞后处于G1期细胞有36.2%。通过逆转录-聚合酶链反应分析,VCD通过上调天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（cysteine-aspartic acid protease,caspase）-3、caspase-8、caspase-9、B细胞淋巴瘤因子-2相关X蛋白、p53、p21、E2F1、p73、核因子κB抑制蛋白-α和下调B细胞淋巴瘤因子-2、超大B细胞淋巴瘤因子-2、人凋亡抑制蛋白（human inhibitor of apoptosis protein,HIAP）-1、HIAP-2、核因子活化B细胞κ轻链增强子-κB的mRNA的表达来显著诱导癌细胞凋亡（P＜0.05）,并呈剂量依赖性。VCD包含的63 种化合物可能导致CNE-1细胞的凋亡。这些结果表明,VCD具有体外诱导CNE-1 细胞凋亡的作用,这些效果来源于VCD复杂的化学成分。     

甘油三酯体外抗肿瘤活性

经非水反相高效液相色谱(NARP-HPLC)纯化,从癞葡萄籽油(MCVO)中分离得到了6 个含共轭亚麻酸(CLns)的甘油三酯(TGs)组分。以纯度为96% 的α- 桐酸(α-ESA)为对照,考察甘油三酯组分对5 个人体肿瘤细胞株(ECA-109、SGC-7901、Bel-7402、LS-174-T、KB)和1 个人体正常细胞株(L02)的生长抑制效果。结果显示含CLn 的TG组分对人体肿瘤细胞的抑制作用远强于α-ESA,而且由3 个CLns 组成的TG 是TG 组分中效果最弱的。结果表明：TG 的脂肪酸组成和TG 的分子结构(可使CLn 稳定性提高)对含CLn 的TG组分抑制人体肿瘤细胞的生长具有重要影响。     

白藜芦醇对衰老小鼠脑神经细胞的保护机制

目的：探究白藜芦醇（resveratrol,RSV）对D-半乳糖（D-galactose,D-gal）致衰老小鼠脑神经细胞的保护机制。方法：采用腹腔注射D-gal建立小鼠亚急性衰老模型;检测其体质量、脑器官指数、记忆能力变化;用流式细胞仪检测脑神经细胞的凋亡率、活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平、线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,MMP）变化;测定线粒体Caspase-9和Caspase-3的活力;采用Western blotting法检测线粒体细胞色素c（cytochrome c,Cyt c）、胞浆Cyt c的表达差异。结果：实验周期内各组间小鼠体质量均无显著变化（P＞0.05）;而与对照组相比,D-gal组小鼠脑器官指数显著减小（P＜0.05）,穿越隐藏平台次数减少,脑神经细胞凋亡率极显著升高（P＜0.01）,表明D-gal对小鼠脑神经细胞造成明显损伤。与D-gal组相比,RSV处理组小鼠脑器官指数均上升,其中D-gal＋RSV（25）组效果最明显（P＜0.05）;穿越隐藏平台次数均有增加,但无显著性差异（P＞0.05）;神经细胞凋亡率均极显著降低（P＜0.01）,表明RSV对D-gal致衰老小鼠脑神经细胞具有保护作用。与Control组相比,D-gal组小鼠脑神经细胞ROS水平极显著升高（P＜0.01）,MMP极显著降低（P＜0.01）,Caspase-9和Caspase-3活力极显著上升（P＜0.01）,线粒体Cyt c表达下降、胞浆Cyt c表达增加,表明D-gal对小鼠线粒体功能造成损伤;而与D-gal组相比,RSV处理组小鼠脑神经细胞ROS水平均极显著下降（P＜0.01）,MMP均极显著升高（P＜0.01）,Caspase-9和Caspase-3活力均极显著降低（P＜0.01）,线粒体Cyt c表达显著上升（P＜0.05）,胞浆Cyt c表达显著降低（P＜0.05）。结论：RSV能通过线粒体通路对D-gal致衰老小鼠脑神经细胞产生保护作用。     

壳寡糖对过氧化氢诱导肝细胞损伤的改善作用及机制

目的：评估壳寡糖(chitooligosaccharides,COS)对过氧化氢(H₂O₂)诱导肝细胞损伤的改善作用。方法：通过H₂O₂建立L-02细胞氧化应激损伤模型,对活性氧(reactive oxygen species,ROS)、线粒体膜电位以及IL-6、TNF-α等病程相关基因水平进行分析。结果：COS可改善H₂O₂损伤L-02细胞的增殖活力、抑制线粒体膜电位下降和ROS水平升高(P<0.05)。单细胞纳米生化分析结果显示,COS处理可以平衡H₂O₂损伤L-02细胞的ROS水平波动幅度。另外,COS改善了炎症(IL-6、TNF-α)、凋亡(Caspase 3、Caspase 9、Bax、Bcl-2)及氧化应激(Nrf2、HO-1)相关基因转录水平,表现出抗凋亡和抗氧化应激的作用。结论：COS对H₂O₂损伤的L-02细胞具有保护作用,本实验可为COS的应用...     

反油酸对人脐静脉内皮细胞活力的影响

目的：观察反油酸对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖活力的影响。方法：采用50、100、200、400、600μmol/L 等5 个浓度的反油酸作用于人脐静脉内皮细胞,以正常组为阴性对照组,NaOH 组(200μmol/L)为阳性对照组,MTT 法和台盼蓝排斥实验检测其对内皮细胞的毒性。结果显示：反油酸组内皮细胞增殖活力明显低于正常组,且高浓度组(400、600μmol/L)对细胞增殖抑制率明显高于低浓度组(50μmol/L);而NaOH 组与正常组比较却无明显差异。此外,反油酸组活细胞率降低。结论：反油酸对内皮细胞有明显毒副作用,其生长抑制率与反油酸浓度和作用时间呈正相关。