玫瑰蜂花粉中不同存在形态酚类物质的组成及其抑制B16黑色素瘤细胞的活性

本文研究了玫瑰蜂花粉中游离态和结合态酚酸类物质含量和组成;采用铁离子还原能力、ABTS和DPPH自由基清除能力三种模型评价其抗氧化能力;同时测定了其对蘑菇酪氨酸酶活性的抑制作用;并进一步研究了对B16细胞的增殖形态、黑色素含量和酪氨酸酶活性的影响。结果表明,蜂花粉中游离态和结合态的总酚含量分别为23.36和1.47 mg GAE/g干重(DW),总黄酮含量为19.12和2.42 mg RE/g DW。酚酸类物质大多以游离态形式存在,富含槲皮素和芦丁,而结合态中鞣花酸和3,4-二甲氧基苯甲酸含量较高;游离态和结合态多酚在三种模型中均显示较好的抗氧化活性;抑制蘑菇酪氨酸酶活性IC50分别为22.26和26.34μg/m L,显著高于Vc;一定程度上影响了B16细胞的增殖和形态,同时显著降低细胞内相对黑色素含量和酪氨酸酶活性。玫瑰蜂花粉中不同形态多酚的活性与其酚酸的含量和组成有直接的关系。     

不同品种茶叶单宁的含量与结构测定

测定了本山、黄旦和铁观音三个品种茶树成熟叶片的总酚及可溶缩合单宁含量,并通过基质辅助激光解吸附飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)研究了茶叶缩合单宁的基本结构。结果显示,三种茶叶均具有较高的总酚含量,大约为200mg/g;三种茶叶的缩合单宁是以(表)儿茶素(EC/C)和(表)棓儿茶素(EGC/GC)为基本结构单元的均聚物和杂聚物,且大部分聚合物的结构单元之间存在A 型和B 型两种连接方式,其中本山和黄旦缩合单宁的最高聚合度要大于铁观音。     

鸡爪皮胶原多肽对蘑菇酪氨酸酶及B16黑色素瘤细胞的作用

研究分子质量低于3 kDa鸡爪皮胶原多肽对蘑菇蘑菇酪氨酸酶的抑制及对小鼠B16黑色素瘤细胞黑色素合成的影响。以L-多巴为底物,研究胶原肽对蘑菇酪氨酸酶抑制作用及抑制动力学。然后采用B16黑色素瘤细胞验证提取鸡爪皮胶原多肽的安全性及对黑色素合成影响的效果。结果表明,分子质量低于3 kDa的鸡爪皮胶原多肽抑制蘑菇酪氨酸酶的IC50值为0.570 mg/mL,抑制属于非竞争性抑制,米氏常数Km和抑制常数Ki分别为24.68μmol/mL和10.76 mg/mL。鸡爪皮胶原多肽在0²00μg/mL的质量浓度范围内对细胞的增殖活性没有影响,而且能够有效地抑制细胞黑色素的生成。     

藜麦皂苷的提取及其酪氨酸酶抑制活性

探究藜麦"陇藜1号"籽粒中皂苷的最佳提取条件并验证其酪氨酸酶抑制活性。设计三因素三水平正交实验,探索料液比,乙醇浓度及超声时间对藜麦皂苷提取得率的影响。构建L-多巴诱导的B16细胞模型,测定藜麦皂苷对细胞活性及酪氨酸酶活性的影响,最终通过免疫印迹法(Westernblot)探索藜麦皂苷影响酪氨酸酶活性的作用通路。结果显示:藜麦皂苷最佳提取条件为料液比1:40,70%浓度的乙醇下超声60 min,得率为17.85 mg/g。当藜麦皂苷的浓度低于200μg/m L时,其对B16细胞无显著抑制作用,但能显著抑制酪氨酸酶的活性和黑色素的形成,200μg/m L藜麦皂苷处理B16细胞72 h,黑色素相对含量降至73.85%,酪氨酸酶活性降至53.31%。藜麦皂苷通过抑制小眼畸型相关转录因子(MITF)及酪氨酸酶(TYR)蛋白表达来抑制黑色素形成。藜麦皂苷可以作为一种具有美白活性的组分在化妆品或药品中应用。     

葡萄籽多酚抑制血管紧张素转化酶活性的研究

为了研究葡萄籽多酚对血管紧张素转化酶(ACE)活性的影响,选取赤霞珠、霞多丽和山葡萄3种葡萄籽,通过丙酮法回流提取葡萄籽总酚,采用调节p H结合溶剂萃取法分离得到中性酚和酸性酚。采用高效液相色谱法测定马尿酸生成量,以此评价总酚、中性酚和酸性酚抑制ACE的活性。将具有较高抑制活性的中性酚经C18固相萃取小柱分离得到3种组分(F1,F2,F3),高效液相色谱-质谱联用鉴定各组分的成分并比较抑酶能力。结果表明,葡萄籽的不同类型的多酚对ACE活性均有抑制作用,其抑制效果不同:中性酚的抑酶效果显著优于酸性酚,且与总酚相似。液质谱检测结果表明,F1为儿茶素、表儿茶素没食子酸酯和异槲皮苷;F2为原花青素B1;F3为大分子质量聚合物。其中,F2的抑酶效果显著强于F1和F3。     

异鼠李素对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力的抑制机理

异鼠李素是沙棘果实和美白类中草药白蒺藜、白鲜皮的主要黄酮类活性成分,具有广泛的药理活性。酪氨酸酶是人体细胞产生黑色素和果蔬褐变的关键酶。本文研究了异鼠李素对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力的抑制机理。以L-多巴为底物,测定异鼠李素对酪氨酸酶二酚酶活性的IC50、抑制类型和抑制常数。抑制类型由Lineweaver-Burk双倒数作图法来判断,并计算相应的抑制常数(KI和KIS)。实验结果显示,异鼠李素对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力抑制效果显著,IC50为25μmol/L,是混合型可逆抑制,抑制常数KI为20.1μmol/L,KIS为108.6 mol/L。总之,异鼠李素对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力有很好的抑制作用,是值得进一步研究的美白类候选药物和防止果蔬褐变的食品添加剂。     

香榧不同部位提取物的抗氧化和酶抑制活性比较分析

通过分析香榧的叶、茎、假种皮、种壳和种仁提取液中总酚、总黄酮和缩合单宁的含量,及其自由基清除能力、α-葡萄糖苷酶和黄嘌呤氧化酶活性抑制能力,比较香榧不同部位活性成分含量和抗氧化能力的差异,间接证明其在降血糖和预防痛风中的应用潜力。结果表明：香榧不同部位提取液的主要活性成分、抗氧化和α-葡萄糖苷酶活性抑制能力存在显著差异（P＜0.05）。香榧仁和香榧叶分别含有最高的总酚和缩合单宁含量,分别为25.28?mg?GAE/g和1.10?mg?CE/g,而香榧茎和香榧假种皮中的黄酮含量最高（P＞0.05）。生物活性分析显示,香榧仁具有最高的DPPH自由基清除能力、ABTS＋·清除能力、α-葡萄糖苷酶活性抑制能力和黄嘌呤氧化酶活性抑制能力,且其α-葡萄糖苷酶活性抑制能力（IC50=0.14?mg/mL）高于阳性对照品阿卡波糖（IC50=1.29?mg/mL）。因此,香榧仁是优于香榧叶、茎、假种皮和种壳的天然抗氧化剂、α-葡萄糖苷酶和黄嘌呤氧化酶抑制剂资源。     

玫瑰发酵液的抗氧化及美白功效探究

通过对玫瑰发酵液的抗氧化和美白功效及皮肤安全性进行评价,探究美白机理。利用酿酒酵母发酵玫瑰获得玫瑰发酵液,检测其对自由基的清除作用以及对酪氨酸酶活性与黑色素合成的影响,利用基因芯片检测其美白机理,采用人体斑贴试验评估其皮肤安全性。结果表明,玫瑰发酵液具有较强的清除DPPH自由基能力,对细胞外酪氨酸酶活性的抑制作用与浓度呈正比,对B16细胞内酪氨酸酶活性以及黑色素合成都有一定的抑制作用;玫瑰发酵液能够抑制黑色素瘤通路上游的NGF和FGF2基因表达;人体斑贴试验显示玫瑰发酵液未引起阳性刺激反应。玫瑰发酵液具有较高的皮肤安全性,同时具有抗氧化、抑制酪氨酸酶活性与黑色素生成的功效,其通过抑制NGF和FGF2的表达发挥美白作用。     

羊栖菜多糖提取物对酪氨酸酶的抑制作用研究

目的:研究羊栖菜多糖提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用和对结构的影响。方法:提取羊栖菜多糖并测定含量,以L-DOPA为底物,在475nm处测定吸光度,观察羊栖菜多糖提取物对酪氨酸酶二酚酶活力的影响;测定羊栖菜多糖作用下酪氨酸酶内源荧光和ANS结合的荧光的变化,以判断对酶结构的影响情况。结果:羊栖菜多糖提取物对蘑菇酪氨酸酶有明显的抑制作用,可以导致酪氨酸酶的二酚酶活力下降。羊栖菜多糖使二酚酶活力下降一半时的抑制剂浓度(IC50)为(2.16±0.37)mg/mL。羊栖菜多糖对酪氨酸酶的抑制作用是一个可逆过程,抑制类型为混合型抑制。通过动力学分析,测得羊栖菜多糖对酪氨酸酶的抑制常数(Ki)为(4.34±0.56)mg/mL。荧光测定结果表明,羊栖菜多糖的结合引起酪氨酸酶三级结构的明显改变。结论:羊栖菜多糖与酪氨酸酶的结合引起酶结构的变化,并以混合抑制的方式可逆抑制酪氨酸酶的二酚酶活性。本实验为进一步研究和设计新型酪氨酸酶抑制剂奠定科学基础。     

远东拟沙丁鱼蛋白多肽(Sardinops sagaxp olypeptide)的制备及其对酪氨酸酶的抑制作用

以远东拟沙丁鱼为原料,采用动物蛋白水解酶和风味酶联合水解,通过膜分离等工序制备远东拟沙丁鱼蛋白多肽(Sardinops sagax Polypeptide/SSP),测定其分子量的分布,以生化水平上对酪氨酸酶的抑制率、细胞水平上对小鼠B16细胞中酪氨酸酶活性及黑色素含量的抑制率为检测指标,研究SSP对酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响。结果显示:SSP的重均分子量为1664 u,其分子量区间主要为500~3000 u;无论是在生化水平还是细胞水平上,SSP对酪氨酸酶都具有一定的抑制作用,且SSP还能在一定程度上抑制细胞中黑色素的合成,这一结果表明了SSP具有一定的美白功能,有望作为无毒副作用的天然酪氨酸酶抑制剂,在医药、食品、化妆品等行业具有广泛的应用前景。     

Effects of protein hydrolysate from chicken feather meal on tyrosinase activity and melanin formation in B16F10 murine melanoma cells

Tyrosinase is a copper-containing enzyme that controls mammalian melanogenesis. Tyrosinase inhibitors are important for their potential application in cosmetic products. Chicken feather meal is a rich source of amino acids, which have been linked with tyrosinase inhibition activity. This study investigated the tyrosinase inhibitory properties of protein hydrolysates prepared from chicken feather meal. Protein hydrolysates prepared by pepsin-pancreatin with MW <3 kDa exhibited strong tyrosinase inhibition activity for both monophenolase (IC₅₀ 5.780 ± 0.188 µg/mL) and diphenolase activities (IC₅₀ 0.040 ± 0.024 µg/mL) in a cell-free mushroom tyrosinase system. These samples were uncompetitive inhibitors with Ki values of 18.149 and 27.189 µg/mL in monophenolase and diphenolase activities, respectively. A cell culture model showed that this hydrolysate had the strongest inhibition on the viability of B16F10 cells (IC₅₀ 1.124 ± 0.288 µg/mL) and 0.210 µg/mL of the sample exhibited inhibition of tyrosinase activity by 50.493% and melanin synthesis by 14.680% compared to the control.     

Inhibitory effects of chestnut inner skin extracts on melanogenesis

Antioxidant capacities (ABTS radical scavenging assay and ferric reducing/antioxidant power assay), mushroom tyrosinase inhibitory effect, and α-melanocyte stimulating hormone (α-MSH) induced melanogenesis inhibitory effect of 60% methanol extracts and ethylacetate fractions from chestnut inner skin in B16F10 cells were investigated to inspect whitening effect. Above research showed that 60% methanol extracts and ethylacetate fractions from chestnut inner skin resulted in a dose-dependent manner on in vitro antioxidant effects. Especially, the ethylacetate fractions inhibited enzyme activity of mushroom tyrosinases with an IC₅₀ value of 160 μg/mL. Ethylacetate fractions from chestnut inner skin also decreased cellular melanin synthesis in B16F10 melanoma cells. Expression of tyrosinase showed that ethylacetate fractions from chestnut inner skin significantly decreased cellular melanogenesis. Consequently, these results suggest that chestnut inner skin extracts can be considered for a whitening agent of human skin.     

Suppression of the melanogenesis and cellular antioxidant activity in B16 melanoma cells

The results of antioxidant activities by ORAC assay and CAA assay were evaluated for melanogenesis. Although the antioxidant activity by ORAC was not correlated with the melanogenesis, the samples which showed high antioxidant activity by CAA tended to suppress melanogenesis. Caffeic acid and Citrus depressa juice, which demonstrated inhibitory effects on mela‐nogenesis, had high antioxidant activities but no inhibitory effects on tyrosinase activity. In addition, they inhibited the melanogenesis which was increased by inhibition of catalase activity. These results may suggest that antioxidant activity by CAA can contribute to the suppression of melanogenesis in B16 melanoma.     

咖啡浆果总多酚美白机制初探

考察咖啡浆果总多酚对体外培养的人黑素细胞A375增殖、凋亡、酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。采用大孔吸附树脂AB-8分离富集咖啡浆果中的总多酚;体外培养黑素细胞,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定总多酚对细胞增殖的影响,流式细胞仪测定其凋亡细胞,酶学方法测定其对酪氨酸酶活性的影响,比色法测定黑素含量变化情况。咖啡浆果总多酚在一定剂量下能明显抑制黑素细胞增殖且促进其凋亡,抑制酪氨酸酶活性,并显著降低A375细胞黑素的合成。结果表明,咖啡浆果总多酚可抑制黑素细胞增殖,促进其凋亡,降低酪氨酸酶活性,最终减少黑素合成,这可能是其具有美白作用的机制之一。     

葡萄酒缩合单宁测定方法的比较研究

目的：对比葡萄酒中测定缩合单宁的甲基纤维素沉淀法(MCP法)和蛋白质沉淀法(A-H法),以寻找一种快速准确的测定方法。方法：采用两种方法测定不同类型、产地、品种葡萄酒的缩合单宁,考察其测定值和变异系数;采用液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS法)测定缩合单宁含量,采用吸光度法(A280)测定总酚含量,并与上述两种方法的结果对照。结果：(1)MCP法和A-H法均只适用于红葡萄酒缩合单宁测定,MCP法精度略高但差异不显著。(2)MCP法测定值平均为A-H法的9.13倍,但二者存在较好的线性关系(R2=0.6029)。MCP法与HPLC-MS法线性关系良好(R2=0.7733),A-H法较差(R2=0.4843)。(3)MCP法与总酚存在良好的线性关系(R2=0.9095),A-H法与总酚无显著线性关系(R2=0.2872)。结论：两种方法均能反映红葡萄酒缩合单宁含量,但MCP法与HPLC-MS法、总酚具有更高的一致性,如采用A280测定总酚,应采用MCP法测定缩合单宁。