英国红芸豆抗氧化肽对氧化应激斑马鱼的保护作用研究

为探究英国红芸豆抗氧化肽组分(BRKBPAPC)的体内抗氧化作用,利用2,2′-偶氮二异丁基脒二盐酸盐诱导建立氧化应激斑马鱼模型,研究BRKBPAPC对氧化应激斑马鱼的影响。结果表明：BRKBPAPC能显著提高(P<0.05)斑马鱼体内过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力和总抗氧化能力(T-AOC),显著降低(P<0.05)丙二醛(MDA)含量;同时BRKBPAPC还具有调节斑马鱼脂代谢的能力,随着处理浓度的增加斑马鱼脂代谢指标逐渐恢复正常水平;高剂量BRKBPAPC可使斑马鱼行为轨迹增多,高速运动次数、时间、距离显著上升。高剂量抗氧化肽处理21 d时,CAT、SOD、T-AOC、GSH-Px分别增至(28.29±3.29)、(126.59±6.39)、(2.07±0.18)、(84.75±7.77)U/mg prot, MDA含量降至(3.35±0.29)nmol/mg prot。由此可见,BRKBPAPC具有较好的体内抗氧化作用及脂代谢调节能力。     

纳豆抗氧化肽对H2O2诱导HEK293细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 评价纳豆肽的抗氧化能力以及对氧化应激HEK293细胞的保护效果。方法 首先以DPPH、ABTS+、·OH和O2-清除能力以及总还原能力为指标,测定酶解得到纳豆肽粗品的抗氧化能力。利用超滤技术对纳豆肽进行分离,测定分离后各组分在不同浓度下对DPPH及ABTS+清除活性。将活性最强的两个组分作为纳豆抗氧化肽,测定它们对H2O2诱导氧化损伤HEK293细胞抗氧化酶含量的影响,评价其对氧化损伤HEK293细胞的保护效果。结果 纳豆肽粗品在8 mg/mL时具有良好的DPPH、ABTS+、·OH和O2-清除能力以及总还原能力,初步证实了其抗氧化潜力。超滤后得到了相对分子质量分别大于30 kDa、10~30 kDa、3~10 kDa、小于3 kDa的四个纳豆肽组分,其对DPPH及ABTS+清除活性均随着浓度的增加呈现上升趋势,特别是在8 mg/mL时,相对分子质量为3~10 kDa和小于3 kDa组分表现出最强的抗氧化活性,将这两个组分作为纳豆抗氧化肽继续研究。后续的细胞试验表明,这两个组分能够显著提高氧化应激下HEK293细胞的存活率。在50~300μg/mL的剂量范围内,小于3 kDa组分的纳豆抗氧化肽可使细胞存活率恢复至未损伤时的水平,而3~10 kDa组分也使损伤细胞的存活率提高了40.8%。同时,纳豆抗氧化肽均能提高氧化损伤HEK293细胞中的SOD、GPX和CAT等抗氧化酶的含量,小于3 kDa组分和3~10 kDa组分的纳豆抗氧化肽分别使SOD含量提高了49.52%和50.80%,GPX含量提高了49.52%和50.81%,CAT含量提高了93.64%和91.97%。结论 纳豆抗氧化肽可以有效地缓解H2O2诱导的HEK293细胞的氧化应激损伤,为纳豆抗氧化肽的应用提供理论依据。     

糖基化改性对英国红芸豆抗氧化肽抗氧化活性的影响

为了提高英国红芸豆抗氧化肽的抗氧化活性,利用木糖对其进行糖基化改性。首先利用单因素和正交试验对糖基化改性条件进行优化,然后利用荧光光谱、紫外-可见光谱和傅里叶中红外光谱对糖基化改性产物进行分析。研究结果表明,糖基化改性的最佳反应条件为：抗氧化肽浓度 10 mg/mL、反应温度 90℃、pH 7、反应时间 4 h、糖肽比为 1:1；在此条件下制备的糖基化产物的羟基自由基清除率、DPPH自由基清除率、还原力和亚铁离子螯合能力分别提高了80.9%、75.1%、135.7%、27.2%,褐变程度为 0.52,接枝度为 39%。糖基化改性产物的荧光和紫外吸收特性增强,产物的 -OH 含量增加,在 N-H、C=O 和 C-N 键都发生了伸缩和振动。糖基化改性可以显著提高英国红芸豆抗氧化肽的抗氧化活性。     

芸豆蛋白抗氧化肽组分对大豆油热氧化稳定性的影响

为了探索英国红芸豆蛋白抗氧化肽组分的抗氧化作用及对油热稳定性的影响,将不同分子量的抗氧化肽组分添加到大豆油中,利用Schaal烘箱法,在63 ℃下加速氧化15 d,研究抗氧化肽对大豆油的过氧化值、酸价、P-茴香胺、羰基价等指标的影响,并对大豆油的氧化稳定性进行评价。结果表明:从0到15 d,SO（不含肽的油）、SO-h₁（含小于1000 Da肽的油）、SO-h₂（含1000～3000 Da肽的油）的过氧化值分别由0.50增加至2.91、1.48及1.57 mmol/kg,酸价分别由0.19增加至0.41、0.37及0.38 mg/kg,P-茴香胺值分别由2.34增加至9.96、8.06及9.75 mg/kg,羰基价分别由5.59增加至14.53、11.87及11.92 meq/kg。SO的增加幅度最大,SO-h₁的增加幅度最小,以上结果均差异显著（P<0.05）。由此可见,氧化指标均随大豆油氧化时间的延长呈增加趋势,从而导致油的热稳定性下降;抗氧化肽组分的抗氧化活性与分子量有关,其中分子量<1000 Da和1000～3000 Da的组分抗氧化效果最佳。此研究为英国红芸豆蛋白抗氧化肽组分的进一步应用提供了理论依据。     

芸豆蛋白抗氧化组分在大豆油热氧化过程中的抗氧化作用

为了寻找高效、安全性好的食用油脂天然抗氧化剂,利用差示热量扫描技术,采用非等温线和等温线分析方法,评价英国红芸豆蛋白抗氧化组分(相对分子质量1 000 u,1 000～3 000 u,3 000～5 000 u)在植物油热诱导中的抗氧化作用。研究结果表明,三种相对分子质量组分均具有抗氧化作用,其中相对分子质量为1 000～3 000 u的组分抗氧化活性最强。在β=10℃/min升温速率下,大豆油中添加相对分子质量为1 000～3 000 u的抗氧化组分后,起始氧化温度比未添加的大豆油高13. 3℃,大豆油热氧化反应的活化能提高了18.6℃。可见,芸豆蛋白抗氧化组分在植物油热氧化中具有抗氧化作用,能增加大豆油热氧化稳定性。研究为进一步探讨芸豆蛋白抗氧化组分的抗氧化机理提供了参考。     

红酵母红素对氧化应激细胞PC12细胞的保护机制

探究红酵母红素对氧化应激细胞的保护机制。PC12细胞（大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞）分为对照组、模型组（200μmol/L H₂O₂）、番茄红素组（20μmol/L番茄红素+200μmol/L H₂O₂,阳性对照组）和红酵母红素组（1μmol/L红酵母红素+200μmol/L H₂O₂、2μmol/L红酵母红素+200μmol/L H₂O₂和3μmol/L红酵母红素+200μmol/L H₂O₂）,分别观察PC12细胞的形态变化,检测细胞凋亡率、半胱氨酸蛋白酶Caspase-3的活性及细胞中促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达含量。结果表明,与模型组相比,3μmol/L的红酵母红素能维持细胞原有形态,降低了11.6%的细胞凋亡率（p<0.05）,抑制了62.92%的Caspase-3活性（p<0.01）,进一步研究发现红酵母红素能够下调Bax的表达（p<0.01）,上调Bcl-2的表达（p<0.01）,从而阻止了凋亡链反应。综上所述,红酵母红素可能通过抑制Caspase-3活性,调节Bax和Bcl-2的表达来发挥对氧化应激细胞的保护作用,且其作用存在剂量依赖性。      

红酵母红素对氧化受损PC12细胞的保护作用

研究红酵母红素对氧化受损PC12细胞的保护作用。将培养的PC12细胞分为7组:对照组和模型组(在培养液中加入200μmol/L H2O2),番茄红素组(阳性对照组)和实验组Ⅰ—Ⅳ在氧化应激条件下分别添加红酵母红素(1、2、3、4μmol/L)。采用MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒观察细胞的存活率以及毒性变化;通过酶标法测定胞内抗氧化酶系的活性和丙二醛(MDA)的含量变化;应用流式细胞术分析细胞内活性氧(ROS)的聚集变化。结果显示,实验组Ⅰ—Ⅳ都明显提高了细胞存活率(p0.01)和降低了细胞毒性(p0.05),也显著增强了胞内抗氧化酶系的活性(p0.05),减少了丙二醛(MDA)的生成(p0.05),还抑制了细胞内活性氧的聚集。其中,实验组Ⅲ的抗氧化效果最好。红酵母红素对氧化受损PC12细胞有保护作用,在红酵母红素的四个浓度梯度中,3μmol/L红酵母红素抗氧化能力最强。     

巫山神茶对H2O2诱导293T细胞氧化损伤的改善作用

以巫山神茶为研究对象,通过DPPH、ABTS、OH及O₂^-自由基清除实验考察其体外抗氧化活性。采用MTT法测定巫山神茶对293T细胞氧化损伤的细胞存活率,并使用试剂盒比色法和实时荧光定量PCR法测定MDA、SOD、CAT、GSH、GSH-Px含量及相关基因的表达。另外,以HPLC法分析了巫山神茶的主要活性成分。结果表明,巫山神茶对DPPH、ABTS、羟基及超氧阴离子自由基有显著的清除效果,且呈现浓度-效应依赖性。不同浓度巫山神茶(40、100、160 μg/mL)处理后的293T细胞存活率均超过93%,说明无明显的毒性作用。对比正常组,过氧化氢(0.3 mmol/L)可显著(P<0.05)导致293T细胞氧化应激损伤,经巫山神茶处理后受损细胞的存活率提高,其中高浓度(160 μg/mL)处理下的细胞的存活率达75.6%。同时,巫山神茶处理还能显著(P<0.05)降低MDA含量,提高CAT、SOD、GSH及GSH-Px含量。实时荧光定量PCR检测相关抗氧化基因也提示巫山神茶能上调CAT、SOD、GSH及GSH-Px的mRNA表达量。此外,通过HPLC分析,从巫山神茶中检测到以下9种生物活性成分:绿原酸、表儿茶素没食子酸酯、对香豆酸、异槲皮苷、二氢槲皮素、槲皮苷、黄芩苷、槲皮素、根皮素。总之,巫山神茶具有较好的体外抗氧化能力,能够改善由H₂O₂诱导的293T细胞氧化损伤且效果显著,其药理价值可考虑进一步深入研究。     

不同蛋白源酶解产物对过氧化氢诱导损伤PC12细胞的保护作用研究

本文以H_2O_2诱导损伤的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞为细胞模型,分别研究了三种蛋白源酶解产物(脑活素、鳕鱼蛋白肽和核桃蛋白肽)对H_2O_2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用。结果表明,H_2O_2的加入会使得PC12细胞的细胞数目减少,部分胞体皱缩成圆形或椭圆形,周围光晕消失,且随着H_2O_2浓度的增加,细胞存活率逐渐降低。脑活素可获得最好的PC12细胞损伤保护作用,核桃蛋白肽次之,而鳕鱼蛋白肽作用不明显;此外,结果表明脑活素、鳕鱼蛋白肽和核桃蛋白肽对受损伤细胞的存活和增殖也能起一定的改善作用。因此,核桃蛋白肽是一种改善脑部功能性障碍的潜在原料。     

番茄红素对鱼藤酮损伤PC12细胞的保护作用研究

目的:探讨番茄红素(Lycopene)对鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法:采用鱼藤酮诱导PC12细胞损伤模型,给予番茄红素预处理后,CCK-8法检测细胞存活率;倒置显微镜观察细胞形态,测定细胞培养液上清乳酸脱氢酶(LDH)释放量;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞周期变化;比色法测定细胞内谷胱甘肽(GSH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC);DCFH-DA染色检测细胞内活性氧类物质(ROS)水平。结果:番茄红素能明显提高鱼藤酮损伤PC12细胞存活率(p<0.05),恢复细胞增殖;明显减轻了细胞损伤的形态的改变,降低LDH的释放、MDA和ROS含量(p<0.05),提高PC12细胞内SOD活性、GSH含量、T-AOC能力(p<0.05)。结论:番茄红素拮抗鱼藤酮致PC12细胞的损伤,其机制可能与抗氧化,清除细胞内ROS,诱导抗氧化酶的活性有关。     

麦胚蛋白酶解产物对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的抗氧化作用

Wheat germ protein isolate hydrolysates (WGPIH) were prepared under different enzymolysis time and the antioxidant effects of different WGPIH against the H₂O₂-induced oxidative stress in PC12 cells were compared through MTT method combined with their antioxidant activities in vitro, and the changes of the PC12 cells surface microstructures were observed by SEM. The results showed that the hydrolysate WGPIH5 produced by hydrolyze for 240 min possessed the highest antioxidant activity, its IC₅₀value for ferrous iron-chelating activity was（0.37±0.05）mg/mL;TEAC value （Trolox） reached（0.81±0.01）mmol/L with 5 mg/mL WGPIH5; the autooxidation of linoleic acid was significantly inhibited by WGPIH5;WGPIH5 was able to attenuate H₂O_{2相似文献}   

绿豆皮牡荆素对H2O2损伤HUVEC细胞的预防和治疗作用

目的：研究绿豆皮牡荆素对过氧化氢（H2O2）损伤人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的保护作用。方法：H2O2诱导建立HUVEC细胞损伤模型，设置空白组、绿豆皮牡荆素低、中、高剂量组、VC对照组，噻唑蓝和试剂盒法分别测定细胞存活率、目标成分(MDA、 GSH、SOD、 LDH、GSH- Px)。结果：最佳H2O2损伤浓度为900 μmol/L此时细胞存活率为51.32% ；剂量组浓度为60、80、100 μg/ mL时，细胞存活率分别为110.61、122.30、131.68%，不同剂量组均能显著降低细胞及培养液中MDA含量，增加 GSH含量，提高SOD、GSH- Px活性；能显著提高细胞中LDH活性，降低培养液中LDH活性；绿豆皮牡荆素质量浓度为100 μg /mL时，细胞保护能力与同浓度下VC相当。结论：绿豆皮牡荆素能促进HUVEC细胞增殖，抑制自由基生成，增强抗氧化酶活性，降低细胞氧化损伤程度，且存在剂量依赖关系。     

Protective effect of whey protein hydrolysates on H2O2-induced PC12 cells oxidative stress via a mitochondria-mediated pathway

Whey protein hydrolysates (WPHs) were prepared with pepsin and trypsin. A PC12 cell model was built to observe the protective effect of WPHs against H₂O₂-induced oxidative stress. The results indicated that WPHs reduced apoptosis by 14% and increased antioxidant enzyme activities. Flow cytometry was used to assess the accumulation of reactive oxygen species (ROS), Ca²⁺ levels and the mitochondrial membrane potential (MMP). The results showed that WPHs suppressed ROS elevation and Ca²⁺ levels and stabilised MMP by 16%. The anti-apoptosis/pro-apoptosis proteins Bcl-2/Bax and poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) were investigated by Western-blot analysis, which indicated that WPHs increased the expression of Bcl-2 while inhibiting the expression of Bax and the degradation of PARP. WPHs also blocked Caspase-3 activation by 62%. The results demonstrate that WPHs can significantly protect PC12 cells against oxidative stress via a mitochondria-mediated pathway. These findings indicate the potential benefits of WPHs as valuable food antioxidative additives.     

肺炎克雷伯菌对H2O2氧化胁迫的响应机制研究

目的:研究宿主肠道氧化条件对肺炎克雷伯菌的影响及该菌响应氧化胁迫的机制。方法:通过体外模拟肠道氧化条件,将肺炎克雷伯菌接种在含不同浓度梯度H₂O₂的液体培养基中进行氧化胁迫处理;测定细菌的生长曲线、检测细菌的关键毒力因子-荚膜与生物膜的生成量。并进一步地利用qRT-PCR荧光定量分析荚膜与生物膜表型相关基因的表达差异。结果:在氧化因子胁迫下,当处于较低浓度范围(<1.56 mmol/L)时,肺炎克雷伯菌早期生长受到抑制作用,中后期逐渐适应胁迫、其生长未受明显影响。此外,肺炎克雷伯菌在氧化胁迫条件下荚膜生成量明显降低,呈剂量依赖效应;但在一定浓度范围氧化因子作用下,其生物膜的形成量增加。分子检测表明荚膜结构基因magA表达量明显下调,生物膜相关基因YbaJ出现显著的上调表达。结论:肺炎克雷伯菌通过上调YbaJ基因的表达促进毒力因子生物膜形成以此响应氧化因子胁迫,本研究可为食源性肺炎克雷伯菌与宿主肠道因子互作及致病机制研究提供新思路。

     

Protective Effects of Merlot Red Wine Extract and its Major Polyphenols in Pc12 Cells under Oxidative Stress Conditions

Abstract: The potential effect of the extracts from free‐run and pressed Merlot red wine has been evaluated in PC12 cells under oxidative stress situation. Comparing both vinification process, pressed Merlot red wine extract possessed higher neuroprotective activity than the free run wine, possibly attributed to the major content in all global polyphenolic families. High performance liquid chromatography determination of individual polyphenols showed that the major compounds found in Merlot red wine extract were quercetin, catechin, epicatechin, tyrosol, gallic acid, and procyanidins. Pretreatments with these polyphenolic compounds (0.25 mM and 0.1 mM, 24 h) significantly increased cell viability of H₂O₂ and Fenton reaction treated cells. Moreover, these polyphenols attenuated ROS production and decreased the Redox Index of glutathione (RI = GSSG/GSH + GSSG) in cells treated only with Fenton reaction. Furthermore, some polyphenols induced antioxidant enzymes activity and protein expression. Quercetin was the most active. These results support the beneficial effects of red wine extracts and some of its polyphenols under oxidative stress conditions. Practical Application: This research provides evidences of the preventive properties of wine extracts and its major polyphenols under oxidative stress conditions.     

桑葚多糖对H_2O_2诱导PC-12细胞氧化损伤的保护作用

采用水提法和乙醇沉淀法制备得桑葚多糖T2,利用质量分数为4%的Zn SO4盐析法去除桑葚多糖T2中的蛋白质,从而得到桑葚多糖T3,蛋白去除率高达88.52%。然后采用DEAE-52纤维素离子交换层析法对桑葚多糖T3进行分离纯化,共收集到4个组分T3-1、T3-2、T3-3及T3-4,其中T3-1和T3-3为桑葚多糖T3的主要组分。进而,从对细胞氧化损伤保护作用的角度对桑葚多糖T3的4个组分的抗氧化性进行了检测。选用700μmol/L的H2O2诱导PC-12细胞损伤8 h为细胞氧化损伤模型,考察T3各组分对正常PC-12细胞增殖的影响,发现T3-3可使细胞存活率增大至41.81%。最后以T3-3为研究对象考察其对H2O2诱导的PC-12细胞氧化损伤的保护作用。结果显示,600μg/m L的T3-3对PC-12细胞氧化损伤具有最强保护作用,表明高浓度的T3-3具有非常强的细胞抗氧化作用。     

小米抗氧化肽的纯化及其抑制H2O2诱导损伤的胰岛素瘤细胞氧化应激作用

本研究利用Sephadex G-25和DEAE-32对小米抗氧化肽进行纯化,利用醋酸纤维素薄膜电泳法测定小米抗氧化肽的纯度,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基清除实验考察纯化的小米抗氧化肽对自由基的清除能力。在细胞水平研究小米抗氧化肽对胰岛细胞的保护作用,利用H2O2进行大鼠胰岛素瘤细胞（INS-1）氧化应激造模,采用2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法检测细胞内活性氧（reactive oxygenspecies,ROS）水平,3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐法检测细胞活力,采用流式细胞技术检测细胞凋亡率,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测抗氧化酶的表达水平。结果表明：经过Sephadex G-25和DEAE-32两次层析,小米抗氧化肽达到了电泳纯;50 μg/mL小米抗氧化肽对超氧阴离子自由基、羟自由基和DPPH自由基的清除率分别为（62.71±3.86）%、（73.56±4.51）%和（82.62±5.25）%;小米抗氧化肽能显著提升H2O2损伤后细胞活力,降低细胞内ROS水平,抑制H2O2诱导损伤的INS-1细胞的凋亡（P＜0.05）,其可能的机制与超氧化物歧化酶1、过氧化氢酶、谷胱甘肽巯基转移酶、醌氧化还原酶1等抗氧化酶系的表达上调有关。结论：小米抗氧化肽对H2O2诱导损伤的INS-1细胞氧化应激具有一定的保护作用。