PMP柱前衍生化HPLC法测定黄秋葵多糖的单糖组成

采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮为柱前衍生化试剂,结合反相高效液相色谱法,建立同时测定黄秋葵多糖中8?种单糖组分的方法。采用InfinityLab Poroahell C18色谱柱为固定相,流动相为磷酸盐缓冲液（0.1?mol/L,pH?6.85）-乙腈（82∶18,V/V）,流速为1.0?mL/min,柱温25?℃,紫外检测器,波长250?nm。各单糖组分的线性范围较宽,相关系数均大于0.999,检出限为0.13～0.45?mg/kg,定量限为0.43～1.49?mg/kg,相对标准偏差小于5%,加标回收率为94.51%～106.44%。方法灵敏度高、准确性好、实用可靠,适用于黄秋葵多糖的单糖组分分析。同时测定从黄秋葵中顺序提取的热水浸提物（hot buffer soluble solution,HBSS）、螯合剂浸提物（chelating agent soluble solution,CHSS）和碱提物（dilute alkaline soluble solution,DASS）的单糖组成,确定其单糖组分的物质的量比。HBSS中,甘露糖∶鼠李糖∶葡萄糖醛酸∶半乳糖醛酸∶葡萄糖∶半乳糖∶阿拉伯糖=0.1∶7.0∶0.4∶5.8∶0.9∶14.6∶1.5;CHSS中,鼠李糖∶半乳糖醛酸∶半乳糖∶阿拉伯糖=4.7∶61.8∶9.6∶5.3;DASS中,甘露糖∶鼠李糖∶半乳糖醛酸∶葡萄糖∶半乳糖∶阿拉伯糖=9.5∶5.4∶1.3∶10.8∶2.4∶7.6。     

PMP柱前衍生化HPLC法测定地参多糖的单糖组成

采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone,PMP)试剂柱前衍生结合高效液相色谱法同时测定地参多糖中的8种单糖组分。样品经石油醚脱脂、超声提取、Sevage试剂除蛋白,无水乙醇沉淀制得多糖溶液,然后加入2 mol/L三氟乙酸,在110℃下水解5 h,得到单糖溶液,最后加入0. 5 mol/L PMP-甲醇溶液在70℃水浴中衍生1 h,进行测定。结果表明,地参多糖主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和岩藻糖组成,在各自质量浓度范围内线性关系良好(r≥0. 999 5),平均回收率为82. 58%～108. 71%,检出限为0. 16～0. 85μg/m L,各单糖组分平均物质的量比为:1. 00∶0. 60∶0. 54∶5. 15∶266. 53∶890. 11∶4. 12∶1. 05,其中半乳糖的平均质量分数为120. 446 mg/g、葡萄糖的平均质量分数为35. 306mg/g,为地参中单糖主要成分。主成分分析表明,地参单糖含量的高低在我国地域上呈现出北方>南方>西南的趋势。该方法...     

石花菜多糖的分离纯化及单糖组成分析

以石花菜为原料,对石花菜多糖进行分离纯化,并对纯化后多糖组分的理化性质及单糖组成进行分析。利用复合酶法提取石花菜多糖并采用Sevage法脱蛋白,通过DEAE-52离子交换柱层析及Sephadex G-200凝胶柱层析对粗多糖进行分离纯化,按峰收集主要的多糖组分GAP1,对其总糖、蛋白质、糖醛酸及硫酸基质量分数进行测定,并采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone,PMP)对多糖进行衍生化,通过高效液相色谱法测定其单糖组成。结果表明:石花菜粗多糖经柱层析后收集得到主要多糖组分GAP1,其总糖质量分数为92. 56%,糖醛酸质量分数为44. 53%,硫酸基质量分数为6. 92%,不含蛋白质; PMP柱前衍生高效液相色谱法测得GAP1主要由鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖和L-岩藻糖6种单糖按照不同比例缩合而成,各单糖物质的量比为1. 00∶1. 00∶4. 45∶27. 31∶2. 27∶1. 88。     

高效液相色谱法测定油茶饼粕多糖组成

提出并对比了3种分析油茶饼粕多糖组成的高效液相色谱方法——氨基柱-折光示差检测器法、氨基柱-串级质谱法、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生-C18柱-紫外检测器法（柱前衍生法）。综合考虑分离效果、灵敏度、仪器成本等因素,最终选定柱前衍生法。柱前衍生法可同时测定油茶饼粕多糖中的鼠李糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸,线性关系良好（线性系数>0.99）,检出限为0.02~0.29 mg/L,定量限为0.06~0.96 mg/L;单糖及糖醛酸的加标回收率分别为77.2%~111.9%、60.1%~87.0%;峰面积日内精密度为0.08%~3.77%,日间精密度为0.39%~17.15%。利用柱前衍生法检测油茶饼粕多糖样品,结果显示所检的4个样品中均含有5种或6种单糖及2种糖醛酸,且含量最高的组分均为葡萄糖。     

刺参多糖中糖醛酸、氨基糖和中性单糖的同步测定方法研究

建立柱前1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生高效液相色谱法(HPLC)测定刺参多糖中糖醛酸、氨基糖和中性单糖的方法。刺参多糖用2mol/L三氟乙酸水解、PMP衍生化后,用反相HPLC检测,实现了糖醛酸,氨基糖和中性单糖的良好分离和测定。测定结果表明,刺参多糖含有甘露糖、半乳糖、岩藻糖、氨基葡萄糖、氨基半乳糖和葡萄糖醛酸6种单糖。该方法简便快捷,灵敏度高,重现性良好。     

兴化香葱加工废弃物葱白多糖的单糖组成分析

文章采用柱前衍生化高效液相色谱(HPLC)法测定兴化香葱加工废弃物葱白多糖的单糖组成及摩尔比。采用Eclipse XDB-C18柱,以0.1 mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.7)-乙腈(体积比为83∶17)为流动相,DAD二极管阵列检测器检测,检测波长为254 nm。柱前衍生剂为1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)。结果表明葱白多糖主要由甘露糖(Man)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、阿拉伯糖(Ara)组成,它们的摩尔比约为0.10∶3.15∶2.26∶0.51。柱前衍生化HPLC分析葱白多糖中的单糖组成方法简便、快速、准确。     

RP-HPLC用于芦荟多糖的单糖组成研究

采用水提醇沉法提取芦荟多糖,用三氟乙酸(TFA)水解,通过1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生水解后的单糖,衍生物用反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析,紫外检测,研究了三种常见芦荟多糖的单糖组成及摩尔比。结果表明:利用RP-HPLC研究芦荟多糖的单糖组成简便易行,并且芦荟多糖因品种不同存在单糖组成差异。从而建立了研究芦荟多糖的新方法。     

柱前衍生化HPLC法测定葡萄皮多糖中5种单糖的含量

葡萄皮干燥磨粉,经水浸法提取、乙醇沉淀、石油醚脱脂、Sevage脱蛋白方法提取多糖,多糖用三氟乙酸水解,衍生化处理后,采用反相高效液相色谱-紫外检测法分析检测。经研究,适合PMP衍生物分离的色谱柱为TC-C_(18),流动相为0.05 mol/L磷酸盐缓冲液-乙睛,最佳柱温为25℃,适宜梯度洗脱流速为1 mL/min。结果显示,5种单糖的含量为甘露糖0.114 7 mg/g、鼠李糖1.290 7 mg/g、半乳糖醛酸0.346 5 mg/g、半乳糖3.9514 mg/g、阿拉伯糖3.127 9 mg/g。     

铁皮石斛多糖分离纯化及单糖组成测定

将铁皮石斛粗多糖经DEAE-52纤维素柱分离得到了四个多糖组分(DO-1、DO-2、DO-3、DO-4),并将组分DO-1经Sephadex G-200柱纯化得到多糖DOP。采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化方法进行高效液相色谱分析,分析结果得出,多糖DOP由D-甘露糖、L(+)-鼠李糖和D-葡萄糖三种单糖组成,通过外标法定量得知D-甘露糖∶L(+)-鼠李糖∶D-葡萄糖=1.936∶0.856∶0.691。测定了多糖DOP抗氧化活性,结果显示其具有良好的清除能力。     

铁皮石斛多糖分离纯化及单糖组成测定

将铁皮石斛粗多糖经DEAE-52纤维素柱分离得到了四个多糖组分（DO-1、DO-2、DO-3、DO-4）,并将组分DO-1经Sephadex G-200柱纯化得到多糖DOP。采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）柱前衍生化方法进行高效液相色谱分析,分析结果得出,多糖DOP由D-甘露糖、L（+）-鼠李糖和D-葡萄糖三种单糖组成,通过外标法定量得知D-甘露糖∶L（+）-鼠李糖∶D-葡萄糖=1.936∶0.856∶0.691。测定了多糖DOP抗氧化活性,结果显示其具有良好的清除能力。      

蒲公英多糖酶解辅助提取工艺优化及其单糖组成分析

本试验以蒲公英多糖含量为指标,利用单因素结合Box-Behnken响应面法对酶解工艺进行研究,并测定了未酶解和酶解蒲公英粗多糖的单糖组成及扫描电镜。结果表明:蒲公英原料中添加10%麸皮,在温度57.6 ℃、酶添加量1532 U/g、含水量55%的条件下酶解12.3 h后,蒲公英多糖含量可达到218.21 mg/g,较酶解前（122.53 mg/g）提高了78.09%。酶解后蒲公英多糖主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、岩藻糖组成,其摩尔比为2.99:10.65:18:14.82:8.61:9.20:0.83;与酶解前相比,甘露糖、鼠李糖、半乳糖、木糖含量分别增加了0.74%、490.54%、1.56%、87.79%,同时产生了岩藻糖,但葡萄糖、阿拉伯糖下降了11.05%、8.66%。酶解后蒲公英多糖变得表面粗糙,孔洞增多,结构疏松,但其原因还有待进一步探讨。本试验研究结果将为深度开发利用蒲公英资源提供一定的理论依据。     

人参多糖提取工艺优化及其组成分析

以超临界脱脂、脱皂苷后的人参渣为原料,采用超临界辅助热水浸提法提取人参多糖,采用正交试验确定提取人参多糖的最佳工艺条件。结果表明：在萃取压力30 MPa、萃取温度80 ℃、萃取时间1.5 h 、物料粒度0.20 mm、原料-夹带剂比例1∶2.5（g/mL）时,人参多糖提取率为（38.03±1.43）%,多糖纯度为（54.71±2.16）%,与热水浸提法相比,提取率和纯度分别提高了16.15%和13.44%。采用高效液相色谱法和高效凝胶渗透色谱法对人参多糖中的单糖组成和多糖平均分子质量进行分析,发现人参多糖含有较多的葡萄糖以及少量的半乳糖、阿拉伯糖,且超临界辅助热水浸提法中这3 种单糖的含量均显著高于热水浸提法。超临界辅助热水浸提法与热水浸提法提取的人参多糖重均分子质量分别为123 847 u和127 016 u,但是超临界辅助热水浸提法的人参多糖中多糖种类多于热水浸提法。     

胭脂果多糖提取工艺优化及其抗氧化活性分析

为了考察超声辅助水提法对胭脂果多糖得率的影响,本研究应用单因素实验对超声功率、超声时间、提取温度和液料比展开了研究。在此基础上,采用响应面法优化了工艺参数,并分析了胭脂果粗多糖的体外抗氧化活性。结果表明,当胭脂果多糖最佳提取工艺为超声时间6 min、超声功率97 W、提取温度86℃、提取时间150 min和液料比40 mL/g时,粗多糖得率可达12.55%±0.31%,仅低于预测值0.23%,而且其中多糖含量达到了(413.75±0.41)mg/g,说明该模型能较好地预测实际得率。胭脂果多糖对DPPH·和·OH以及总还原能力与质量浓度呈量效关系,对DPPH·和·OH的IC₅₀分别为0.0203、1.44 mg/mL。因此,响应面法优化超声辅助水提法提取胭脂果多糖工艺方便可行,得到的多糖有较好的体外抗氧化活性,可为进一步的合理开发利用提供理论依据。     

一种姬松茸多糖的纯度鉴定与单糖组成分析

目的:鉴定一种经分离纯化得到的姬松茸多糖的纯度,并分析其单糖组成。方法:采用苯酚-硫酸法测定姬松茸多糖总糖含量,结合凝胶过滤法、高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法和紫外可见吸收光谱法鉴定其纯度,运用高效液相色谱-柱前衍生化法对其单糖组成进行定性、定量分析。结果:所得姬松茸多糖样品的多糖含量为99.50%±2.5%(W/W,以葡萄糖计),且不含核酸、蛋白质等杂质,纯度较高,其单糖组成为葡萄糖、半乳糖、甘露糖(含量比分别为99.2%、0.6%、0.2%)。结论:所得姬松茸多糖是一种纯度较高、葡萄糖为主要单糖的均一多糖。     

灵芝孢子多糖的提取工艺优化及单糖组成、抗氧化活性分析

为确定灵芝孢子多糖(GLSP)的最佳提取工艺,以料液比、提取时间、提取温度为因素,多糖提取得率为指标,在单因素试验的基础上,通过响应面法确定灵芝孢子多糖提取的最佳工艺为:提取温度81℃,料液比19:1,提取时间2 h,在该条件下灵芝孢子多糖提取得率为(1.507±0.028)％.以7种来源的灵芝孢子(GLS)为原料,通...     

红蓝草多糖提取工艺优化及其抗氧化活性分析

为探究红蓝草多糖的最佳提取工艺及其体外抗氧化活性。试验以红蓝草为原料,探究料液比、浸提温度、浸提时间、浸提次数对红蓝草多糖得率的影响,并结合响应面法优化红蓝草多糖提取工艺,通过测定红蓝草多糖对DPPH·、·OH、ABTS+·等自由基的清除能力探究其抗氧化活性。结果表明:在料液比1:31 g/mL、浸提温度85 ℃、浸提时间118 min、提取3次的条件下,红蓝草多糖得率最高,可达11.05%。在一定范围内,红蓝草多糖清除自由基能力与多糖的浓度呈量效关系,红蓝草多糖溶液清除DPPH · 、 · OH和ABTS + ·等自由基的IC₅₀值分别为0.18、0.73、0.64 mg/mL,说明红蓝草粗多糖具有一定的抗氧化活性。通过探究红蓝草多糖提取的最佳工艺及抗氧化活性,为今后红蓝草多糖的进一步开发与应用提供理论基础和参考。     

贯筋藤多糖的提取及其单糖组分分析

以云南西北部地区的野生植物贯筋藤鲜茎为原料,通过水提醇沉法研究提取工艺参数,并对其理化性质、提取率、含量、单糖组成进行研究。贯筋藤多糖呈灰白色粉末状,溶于水,不溶于有机溶剂,碘-碘化钾反应呈阴性,说明提取物为非淀粉性多糖。确定提取工艺参数为浸提温度75℃、浸提时间60 min、料液比1∶25(g/mL),多糖得率7.04%,总糖含量为16.7%,气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)检测分析结果贯筋藤多糖由5种单糖组成,葡萄糖80.3%、半乳糖11.7%、甘露糖3.98%、阿拉伯糖3.69%、岩藻糖0.349%,其中葡萄糖和半乳糖是主要成分。     

黄金茶挥发油提取工艺优化、成分分析及抗氧化研究

目的:优选黄金茶挥发油提取的最佳工艺,并对黄金茶挥发油进行成分分析、抗氧化研究。方法:通过正交试验设计优化微波辅助水蒸气蒸馏法提取挥发油工艺;通过气相色谱-质谱（GC-MS）分析黄金茶挥发油的化学成分;以DPPH自由基、还原力和金属离子螯合能力为指标评价黄金茶挥发油的体外抗氧化能力。结果:微波辅助水蒸气蒸馏法提取黄金茶挥发油的最优工艺为微波时间10 min,料液比1: 25 g/mL,水蒸气蒸馏时间5 h,在此条件下提取黄金茶挥发油得率为1.7792%。黄金茶挥发油中鉴定出21种化学物质,其中成分主要为酯类和萜类化合物,（1-甲基-4-丙-1-烯-2-基环己基）乙酸酯的含量达到50.67%,其次是α-蒎烯（6.92%）、α-乙酸松油酯（5.77%）、环氧化蛇麻烯II（3.96%）、伪柠檬烯（3.21%）、右旋大根香叶烯（3.12%）等。抗氧化实验显示黄金茶挥发油具有抗氧化作用,清除DPPH自由基的IC₅₀为81.6 mg/mL,在10 mg/mL时与阳性对照BHT还原力接近,对金属离子螯合能力的半数抑制浓度为17.16 mg /mL。结论:本文采用微波辅助水蒸气蒸馏法对黄金茶挥发油的提取条件进行了优化,通过GC-MS分析了黄金茶挥发油的成分,并证实该挥发油具有抗氧化作用。     

酶法提取地桃花多糖的工艺优化及其抗氧化活性

目的:研究纤维素酶提取地桃花多糖的最佳条件,并探讨其体外抗氧化活性。方法:以地桃花多糖得率为响应值,在单因素试验基础上,以液料比、酶解温度、酶解时间、酶添加量为试验因素,采用响应面法建立数学模型,筛选最佳提取工艺条件;并使用DPPH和·OH自由基清除能力体系检测地桃花多糖的抗氧化活性。结果:纤维素酶酶解提取地桃花多糖最佳条件为:酶添加量10.8 mg/mL、酶解时间72 min、液料比7:1 mL/g、酶解温度43℃、pH为5.0,在此条件下地桃花多糖得率为13.32%,与理论值13.37%相对误差小于5%。地桃花多糖具有较强的抗氧活性,对DPPH和·OH自由基清除的半数抑制浓度IC₅₀分别为1.082、3.202 mg/mL,但与维生素C比较,抗氧化活性较弱。结论:通过响应面法获得地桃花多糖纤维素酶酶法提取的最佳条件,该工艺条件方便可行,提取到的多糖具有较强的自由基清除能力。     

芡实皮渣多糖的提取工艺优化及体外抗氧化活性研究

为了实现芡实加工副产物资源的高值化利用,优化芡实皮渣多糖的提取工艺参数,分析其理化性质,初步研究多糖的体外抗氧化活性。在单因素实验基础上,选择料液比、提取温度、提取时间、醇沉浓度为自变量,多糖得率为因变量,通过L₉(3⁴)正交试验法优化芡实皮渣多糖的提取工艺。利用5种体外抗氧化活性测试方法,即总还原力,清除羟自由基、DPPH自由基、超氧阴离子和亚硝酸盐,并与抗坏血酸进行对比,评价芡实皮渣多糖的抗氧化能力。结果表明:芡实皮渣多糖最佳提取工艺为料液比1:40、浸提温度55 ℃、浸提40 min、醇沉浓度80%,提取3次,得率45.94%,纯度82.67%。碘-碘化钾反应显示其属于非淀粉类多糖,HPLC分析显示该多糖的基本结构单元为葡萄糖。吸水性和吸油分别为(65.15±1.52)和(1.27±0.04) g/g,多糖凝胶质构特性结果显示其黏性很大,弹性较低,回复能力弱。多糖对羟基自由基、DPPH自由基、超氧阴离子和亚硝酸盐具有一定的清除能力,当芡实皮渣多糖浓度为1.0 mg/mL时,对羟基自由基、超氧离子和亚硝酸盐的清除率分别为35.56%、34.88%和20.63%,对DPPH自由基清除率IC₅₀为(0.307±0.008) mg/mL;本研究优选的芡实皮渣多糖提取工艺稳定可靠,多糖具有一定的抗氧化能力,实验结果可为芡实加工副产物资源的综合开发利用提供理论基础。