胰蛋白酶提取硫酸软骨素单因素优化研究

以鸡胸软骨为原料,采用稀碱-双酶(胰蛋白酶和胃蛋白酶)相结合的方法提取硫酸软骨素。胰蛋白酶主要是使硫酸软骨素长链上的蛋白进一步得到水解破坏,从而提高硫酸软骨素的纯度。研究了胰蛋白酶水解硫酸软骨素的显著影响因素,为工业生产提供理论依据。单因素优化结果显示:pH值8.3,料液比1 000∶0.9,水解温度46℃。该条件下,所得硫酸软骨素的产品产率达到20.61%,纯度为83.66%,质量有较大提高。     

不同蛋白酶对天龙粉水解作用的比较研究

目的以天龙粉为原料,用五种蛋白酶分别进行酶解,以蛋白质的水解度为指标,评价不同酶对天龙粉的水解效果。方法天龙粉分别经过胰蛋白酶、胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解得到酶解液,采用茚三酮比色法测定蛋白质的水解度。结果胃蛋白酶和弹性蛋白酶的水解度较高,分别为73.18%、76.33%,木瓜蛋白酶的水解度为57.34%,胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的水解度较低,分别为29.68%、34.05%。结论不同酶酶解天龙粉,弹性蛋白酶的酶解作用最强,其次是胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰凝乳蛋白酶,胰蛋白酶水解作用最弱。     

鼠妇粉酶解最佳用酶的初步筛选

用胰蛋白酶、胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶四种酶对鼠妇粉进行酶解并选出最佳用酶。利用四种酶分别酶解鼠妇粉,通过观察乳腺癌MCF-7细胞的抑制率以及蛋白质的水解度,作为实验评价指标,综合评价四种酶对于鼠妇粉的酶解效果,最终甄选出最佳酶解用酶。实验测得胃蛋白酶酶解液水解度为19.36%,胰凝乳蛋白酶酶解液水解度19.97%,胰蛋白酶酶解液水解度为34.70%,弹性蛋白酶水解度分别为34.90%。体外抗肿瘤试验表明,在浓度为0~2 mg·mL~(-1)范围内,胰蛋白酶酶解液对乳腺癌MCF-7细胞抑制效果最佳,胃蛋白酶酶解液抑制效果更低,未酶解的抑制率最低,几乎无效。当浓度低于0.7 mg·mL~(-1)时,弹性蛋白酶水解提取液抑制率高于胰凝乳蛋白酶水解提取液的抑制率,当浓度在0.7~2 mg·mL~(-1)时,两种酶的抑制作用恰好相反。鼠妇粉酶解工艺最佳用酶为胰蛋白酶,胃蛋白酶效果最差,弹性蛋白酶和胰凝乳蛋白酶效果介于二者之间。     

硫酸软骨素生产新酶解法工艺

软骨在90～100℃熟化5小时后再酶解,55%酒精浓度沉淀获得高纯度硫酸软骨素(95%以上),收率16.65%。     

地龙粉酶解用酶初步筛选

分别利用胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶、木瓜蛋白酶对地龙粉进行酶解,以水解度和对肺腺癌细胞抑制率为指标筛选最佳用酶。利用五种酶对地龙粉进行酶解,同时进行空白实验,采用MTT体外抗肿瘤技术,通过水解度和酶解液对肺腺癌细胞的抑制率筛选最佳用酶。胃蛋白酶和胰凝乳蛋白酶对地龙粉的水解度分别为9.42%、7.95%,且两者的酶解液对肺腺癌细胞A549的抑制率与浓度成负相关;木瓜蛋白酶对地龙粉的水解度最低且酶解液对肺腺癌细胞A549无抑制作用;胰蛋白酶对地龙粉的水解度为17.96%,其酶解液对肺腺癌细胞A549在低浓度下无抑制作用,在1 mg/L时抑制作用达最大,为83.08%;弹性蛋白酶对地龙粉的水解度最大,为30.61%,且其酶解液对肺腺癌细胞A549的抑制作用与浓度成正相关。地龙粉酶解最佳用酶为弹性蛋白酶和胰蛋白酶混合使用。     

基于半仿生及体外抗肿瘤细胞株实验技术对土鳖虫最佳用酶的筛选

以半仿生技术结合体外抗肿瘤细胞实验,筛选出土鳖虫的最佳用酶。方法:以土鳖虫为底物,用胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶进行酶解,同时以不加酶的水提液为对照组,测定每组的水解度,采用MTT法,以对肿瘤细胞株的抑制率为指标,分别对土鳖虫的最佳用酶进行筛选。水解度从高到低的顺序依次为弹性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶和胰凝乳蛋白酶,它们的水解度分别为9.95%、6.76%、4.94%、2.29%;不同酶解液对不同肿瘤细胞抑制效果不同。土鳖虫酶解液对肝癌细胞的最佳用酶是胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胰凝乳蛋白酶;对喉癌细胞的最佳用酶是胰蛋白酶和弹性蛋白酶。胃蛋白酶对两个肿瘤细胞的抑制效果最弱可忽略不计。     

烟台刺参酶解工艺最佳用酶初筛及体外抗肿瘤研究

通过考察不同酶对海参酶解产物的体外抗肿瘤活性及水解度的影响,确定最佳用酶,为海参抗肿瘤研究提供新思路。以海参水提液及100μg/mL顺铂为对照组,对比不同提取条件下海参水提液对喉癌Hep-2细胞的增殖抑制率,结合茚三酮显色法测定海参酶解液水解度,确定最佳用酶。结果显示:弹性蛋白酶、胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶处理组水解度分别为10.05%、7.86%、1.54%,其IC_(50)分别为0.642、0.763、0.917 mg/mL,胃蛋白酶处理组水解度为2.72%,抗肿瘤效果极差。说明海参酶解最佳用酶为弹性蛋白酶,其次是胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶。     

白沙参多糖与真鱿多糖的对比研究

采用蛋白酶水解白沙参与真鱿软骨,从组织中释放出多糖糖链,乙醇沉淀去除蛋白质,得到白沙参多糖与真鱿多糖,检测两种多糖中硫酸软骨素的二糖组分、多糖分子量及其抗凝活性。结果表明,白沙参多糖与真鱿多糖中硫酸软骨素均含有硫酸软骨素E二糖单位,在硫酸软骨素中的含量分别为34.8%和31.1%,两种硫酸软骨素分子量分别为105 000和259 000。两种多糖的硫酸化程度高,硫酸基含量分别为13.4%和10.2%。白沙参多糖与真鱿多糖均具有一定的抗凝活性,白沙参多糖的抗凝活性更高。     

中药蜣螂酶解提取工艺及抗肿瘤药效研究

目的研究用四种不同蛋白酶对蜣螂粉进行酶解并分别进行抗肿瘤实验,从而优选出最佳用酶及酶解液抗肿瘤方面的药效。方法将蜣螂粉分别用胰蛋白酶,胰凝乳蛋白酶,胃蛋白酶,弹性蛋白酶进行酶解,以蜣螂水提物作为对照组,采用茚三酮法测定蛋白质的水解度并利用MTT法研究水提物对肺腺癌细胞A549的抑制效果,评价4种蛋白酶对蜣螂粉的水解效果,研究蜣螂粉酶解液抗肿瘤方面的药效。结果胰蛋白酶、弹性蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的水解度分别为26.62%、24.99%、21.76%,在较低药物浓度下,酶解蜣螂粉对肺腺癌A549无明显抑制作用,而在较高浓度下,酶解蜣螂粉对肺腺癌A549的抑制率大小中,胰凝乳蛋白酶弹性蛋白酶胰蛋白酶。胃蛋白酶的水解度为7.64%,其酶解液对肺腺癌A549细胞几乎没有抑制作用。4种酶解液对肺腺癌A549的抑制率均小于酶解前的水提液。结论在蜣螂酶解工艺4种蛋白酶中,无最佳用酶。蜣螂经酶解后会使其抗肿瘤药理活性降低,进而说明中药蜣螂在抗肿瘤方面不宜口服入药。     

地胆粉最佳用酶及其酶解物的抗肿瘤作用研究

初步筛选了地胆粉的最佳用酶及通过了MTT法测定酶解产物的抗肿瘤活性。模拟体外胃肠道消化系统以胃蛋白酶、弹性蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶4种蛋白酶进行酶解反应,采用MTT法检测酶解产物对肝癌细胞BEL-7402、乳腺癌细胞MCF-7的抑制效果。结果弹性蛋白酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶的水解度分别为2.84%、13.11%、10.31%,其中胰蛋白酶的酶解液对肝癌细胞BEL-7402的抑制率明显高于对照组,且成剂量依赖性,其他酶解液的抑制作用不显著。胰蛋白酶的酶解液对乳腺癌细胞MCF-7也有一定的抑制作用,其他酶解液无效果。胰蛋白酶是地胆粉抑制肝癌细胞的最佳酶,酶解度与抑制肿瘤细胞生长没有直接关系。     

芹菜中膳食纤维提取工艺研究

研究了酶解芹菜干粉末制备膳食纤维的生产工艺,对影响酶解的因素进行单因素实验。进而响应面实验。最终得出适宜的酶解条件为：加酶量10％（1×10^4U／g）、温度50℃、pH4．5～5．5,在此条件下获得的膳食纤维量较高。纯度分析表明,2种膳食纤维的纯度均较高,且含较多天然叶绿素。故不溶性膳食纤维（IDF）呈淡绿色,可溶性膳食纤维（SDF）呈乳白色。     

罗非鱼鱼鳞粉直接酶解制备胶原蛋白的工艺研究

研究了罗非鱼鱼鳞粉直接酶解制备胶原蛋白的工艺条件。以胶原蛋白提取率为考核指标,采用单因素实验和正交实验确定最佳酶解条件为;100目罗非鱼鱼鳞粉质量分数7％、酶解温度65℃、酶解pH值8．5、酶加量0．05AU·g-1、酶解时间2．0h,在此条件下,胶原蛋白提取率迭95．79％。     

蛋白水解制备肉味香精的研究概况

综述了酶解技术用于水解蛋白质制备水解动物蛋白(HAP)、水解植物蛋白(HVP),并由肉味香料的前体物进行热反应(重点美拉德反应)制备肉味香精的研究现状。阐述了酶解反应机理、酶的选择及使用,以及蛋白原料的来源及特点;介绍了美拉德反应的原理及反应条件对产生肉类风味物的影响。蛋白酶水解氮源物质,再经美拉德反应制备肉味香精是肉味香精的主流技术,是将来风味食品工业的发展方向。     

苦瓜多肽的分离纯化研究

以苦瓜为原料分离纯化制备多肽,通过正交试验确定了酶解的最佳工艺条件:加酶量为4%,温度45 ℃,酶解时间为1 h,料液比为2,多肽得率提高19.7%.采用葡聚糖凝胶G-50纯化得到2组洗脱液.此分离纯化工艺简单可行,成本低,可适用于工业化生产.     

氢氧化钠预处理对甘蔗渣酶解和发酵性能的影响

采用氢氧化钠预处理甘蔗渣,通过单因素和正交试验考察了不同预处理条件对甘蔗渣酶解和发酵性能的影响,并进一步分析了比表面积和木质素含量对酶解性能的影响。结果表明：预处理温度、氢氧化钠质量分数及预处理时间对酶解和发酵效率影响较为显著,最佳的预处理条件为：温度85℃、时间11 h、NaOH质量分数4.5%,在此优化条件下预处理的甘蔗渣,含纤维素56.46%,与原料相比提高了46.16%;半纤维素20.30%、Klason木质素5.79%,与原料相比分别降低了15.77%和72.87%,酶解36 h的还原糖得率为0.69 g/g（以甘蔗渣质量计）。经过氢氧化钠预处理后的甘蔗渣比表面积显著增加（由原料的0.07 m²/g最大可增加到1.07 m²/g）,木质素显著降低,有利于提高酶解和发酵效率。当比表面积超过0.30 m²/g时,酶解初始速率和酶解效率达到平衡;当木质素低于11%时,酶解效率达到平衡。     

碱-氧-蒽醌蒸煮法制取麦草浆纤维素的酶解

用碱-氧-蒽醌蒸煮麦草所得纤维素为原料,研究了纤维素酶解的影响因素.结果表明:预处理后的麦草纤维素,其木质素含量较低,而酶解率和木质素脱除率均较高,在45～50℃、pH为4.4、底物与酶量之比为1:0.02、反应时间为30h、转速为100r/min时,可获得较理想的酶解率和木质素脱除率,二者分别可达74.5%和19.2%.     

青霉纤维素酶酶解芦竹的研究

以青霉纤维素酶酶解芦竹,探讨了酶解温度、酶解时间、pH值和酶载量对芦竹酶解效果的影响。结果表明,青霉纤维素酶酶解芦竹的最适条件为:酶解时间72h、酶解温度45℃、pH值4.8、酶载量30FPU.g-1 DM,在此条件下,葡萄糖产率为(61.75±1.22)%、木糖产率为(40.07±6.88)%;通过添加商业酶调配酶系中不同酶活比例,可进一步提高还原糖产率,当增加β-葡萄糖苷酶至40CBU.g-1 DM时,葡萄糖产率达68.96%、木糖产率达98.16%。     

一次烷基化法制取高纯度均三甲苯的工艺研究

对一次烷基化-分离法制取高纯度的均三甲苯过程进行了实验研究和理论分析,先在反应器中进行富集均三甲苯与丙烯的烷基化初步反应,然后进一步采用正交试验方法,考察了不同反应条件对均三甲苯收率的影响,确定最佳反应条件.     

用sp.2262菌制备D-对羟基苯甘氨酸反应动力学

研究了以DL -对羟基苯海因为原料 ,用sp 2 2 62恶臭假单胞菌 (Pseudomonasputida)直接酶催化生产D -对羟基苯甘氨酸的反应动力学 .考察了DL -对羟基苯海因溶解过程和海因酶、氨甲酰水解酶酶解反应的动力学特性 .建立了全过程的动力学模型并进行了计算 ,求解了过程的参数值 ,讨论了 pH值对各参数的影响 ,确定了反应的优化操作条件 .