阿霉素耐药的乳腺癌MCF-7/Adm细胞系的建立及其耐药特性

建立肿瘤耐药细胞系是研究肿瘤细胞的重要手段之一,也是探讨肿瘤多药耐药机制及其逆转的基础。采用大剂量间歇诱导法诱导MCF-7细胞,建立MCF-7/Adm耐药模型;MTT法检测耐药倍数;流式细胞术检测MCF-7细胞和MCF-7/Adm细胞中阿霉素的积累量;real-time PCR检测MCF-7/Adm细胞中ABCG2、ABCC1、ABCB1基因的表达。结果显示,阿霉素抑制MCF-7和MCF-7/Adm细胞存活的IC50值分别为0.535μg/mL和173.275μg/mL,耐药倍数为324;MCF-7细胞中的阿霉素积累量较MCF-7/Adm明显高;MCF-7/Adm细胞中mRNA水平ABCB1基因表达明显上调,ABCG2和ABCC1基因表达下调。成功获得对阿霉素耐药的人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/Adm,为进一步研究乳腺癌多药耐药机制及其逆转提供有利工具,并且对乳腺癌化疗药物的筛选具有一定的意义。     

阿霉素耐药的乳腺癌MCF-7／Adm细胞系的建立及其耐药特性

建立肿瘤耐药细胞系是研究肿瘤细胞的重要手段之一,也是探讨肿瘤多药耐药机制及其逆转的基础。采用大剂量间歇诱导法诱导 MCF-7细胞,建立 MCF-7/Adm耐药模型;MTT 法检测耐药倍数;流式细胞术检测MCF-7细胞和MCF-7/Adm细胞中阿霉素的积累量;real-time PCR检测MCF-7/Adm细胞中 A BCG2、A BCC1、A B-CB1基因的表达。结果显示,阿霉素抑制 MCF-7和 MCF-7/Adm 细胞存活的 IC50值分别为0．535μg/mL 和173.275μg/mL ,耐药倍数为324;MCF-7细胞中的阿霉素积累量较MCF-7/Adm明显高;MCF-7/Adm细胞中mR-NA水平 A BCB1基因表达明显上调,A BCG2和 A BCC1基因表达下调。成功获得对阿霉素耐药的人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/Adm ,为进一步研究乳腺癌多药耐药机制及其逆转提供有利工具,并且对乳腺癌化疗药物的筛选具有一定的意义。     

瓜蒌皮抗肿瘤活性成分的初步研究

采用改进的MTS法来探究瓜蒌皮石油醚相不同极性成分对结肠癌HCT-116细胞和乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用,探讨其抗肿瘤活性。利用硅胶柱色谱制备极性不同的五种成分,改进的MTS法检测细胞的增殖作用,Propidium Iodide染色法分析HCT-116细胞周期;Annexin V-FITC/Propidium Iodide染色法分析HCT-116细胞凋亡。在低浓度情况下发现,瓜蒌皮醚相极性成分促进MCF-7细胞生长,成分E诱导细胞停滞在S-期而起到抑制癌细胞增殖的作用,并且成分C及E抗癌细胞增殖作用是通过诱导细胞凋亡介导的作用机制,并以剂量依赖方式诱导其细胞凋亡。通过硅胶柱色谱制备的石油醚相不同极性成分具有抗肿瘤活性。     

家蝇幼虫凝集素的分离纯化及其抑制MCF-7细胞活性的研究

家蝇幼虫血淋巴粗提液经过亲和层析,分离出3种与D-半乳糖特异性结合的蛋白,经高效液相色谱和聚丙烯酰胺凝胶电泳。分离出分子质量为38ku的家蝇幼虫凝集素（MLL-2）,该组分具有明显的凝血活性．圆二色谱结果表明,MLL-2的二级结构主要是以／3折叠（80．3％）和无规卷曲（19．5％）的构象存在．MTT实验结果显示,MLL-2对人乳腺癌（MCF-7）细胞的生长具有明显的抑制作用,其抑制效果具有时间和浓度依赖性．形态学观察表明,MLL-2处理过的MCF-7细胞出现凋亡小体、染色质浓缩凋亡现象．经流式细胞仪分析MCF-7细胞被阻遏在G2／M期,并且凋亡率随作用时间的延长而增加．MLL-2通过诱导MCF-7细胞发生凋亡,从而起到抑制肿瘤细胞生长的作用．     

水飞蓟宾对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的体外抑菌作用的研究

水飞蓟宾是来源于菊科植物水飞蓟中的一种黄铜木质素类化合物,具有明显的抗氧化、抗炎、抗肿瘤等特性.通过SDA-PAGE和碱性磷酸酶实验分析水飞蓟宾作用前后的菌体蛋白质及碱性磷酸酶的变化,研究其对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果的差异.研究结果表明,水飞蓟宾是通过破坏细胞壁结构、抑制菌体对蛋白质的利用,导致金黄色葡萄球菌正常生理功能的丧失或减退,达到抑菌的目的;而对大肠杆菌的作用不敏感.     

脂肪酸与细胞凋亡

脂肪酸是食物脂质基本成分之一,不同种类脂肪酸对机体的细胞凋亡起不同作用。饱和脂肪酸可诱导胰岛β细胞、乳腺癌细胞、内皮细胞、神经细胞和生殖细胞等产生凋亡,而不饱和脂肪酸则可抑制凋亡。由于细胞凋亡发生的机制不尽相同,脂肪酸诱导凋亡或抑制凋亡的过程中就可能涉及细胞的不同信号通路,并且可能具有细胞特异性。对不同脂肪酸与细胞凋亡关系及其可能作用机制作一综述。     

脂肪酸与细胞凋亡

脂肪酸是食物脂质基本成分之一,不同种类脂肪酸对机体的细胞凋亡起不同作用。饱和脂肪酸可诱导胰岛β细胞、乳腺癌细胞、内皮细胞、神经细胞和生殖细胞等产生凋亡,而不饱和脂肪酸则可抑制凋亡。由于细胞凋亡发生的机制不尽相同,脂肪酸诱导凋亡或抑制凋亡的过程中就可能涉及细胞的不同信号通路,并且可能具有细胞特异性。对不同脂肪酸与细胞凋亡关系及其可能作用机制作一综述。     

p38MAPK抑制剂增强阿霉素抑制乳腺癌细胞增殖的体外研究

以乳腺癌细胞株MCF-7为研究对象,经阿霉素及阿霉素联合p38MAPK抑制剂(SB20580)作用细胞,通过MTT法测定细胞存活率、光学显微镜观察细胞形态变化。实验数据显示相同药物浓度下,SB20580可以明显降低MCF-7细胞存活率。结果表明p38MAPK抑制剂可以促进阿霉素抑制细胞增殖的效果。     

ER阳性乳腺癌中西达本胺逆转内分泌耐药

内分泌治疗是雌激素受体阳性乳腺癌的主要治疗手段,但耐药的发生限制了其应用,本研究目的为验证组蛋白去乙酰化酶抑制剂西达本胺是否可用于逆转雌激素受体阳性乳腺癌内分泌耐药,通过MTS细胞增殖检测实验发现,4-羟他莫西芬与西达本胺单药均对雌激素受体阳性乳腺癌细胞MCF-7的增殖具有一定抑制作用,且在两药联合时表现为药效叠加.表皮生长因子可诱导MCF-7对4-羟他莫西芬的耐药,而西达本胺可逆转这种耐药.通过Western blot实验发现,西达本胺可抑制表皮生长因子引起的MEK、ERK和AKT等激酶的磷酸化,并抑制雌激素受体的磷酸化.原位移植瘤动物模型的体内药效实验也显示,药物联用组比单药组有更强的抑瘤作用.研究表明,西达本胺在雌激素受体阳性乳腺癌细胞中具有逆转内分泌耐药的作用,作用机制可能与其对表皮生长因子下游通路及雌激素受体活化通路的抑制有关.     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导肝癌细胞Hep3B凋亡的机制

研究探讨蛋白酶体抑制剂MG132(Z-Leu-leu-leu-CHO)诱导肝癌细胞Hep3B凋亡的作用与机制.实验采用不同浓度梯度和时间梯度,通过荧光显微镜、Hoechst33342染色、MTT检测和Western 印迹分别检测MG132 对Hep3B细胞的形态、凋亡小体形成、细胞存活率、细胞凋亡相关蛋白表达的影响.结果表明,MG132能够选择性抑制肝癌细胞生长,对正常肝细胞没有明显影响.此外,MG132可以通过内质网应激途径诱导肝癌细胞Hep3B凋亡,呈现剂量和时间的双重依赖性.提示通过抑制蛋白酶体来达到诱导肿瘤细胞凋亡的方法是可行的,MG132此类药物的研究与应用将为肿瘤治疗提供新的选择.     

人参皂苷Compound K对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响

对人膀胱癌T24细胞进行体外培养,采用MTT方法观察不同浓度人参皂苷Compound K处理细胞24、48、72h后对细胞增殖的抑制作用,利用Hoechst33342对细胞进行染色,荧光显微镜观察细胞形态学变化,应用流式细胞术观察人参皂苷Compound K对T24细胞凋亡的诱导作用,并应用WesternBlotting检测不同浓度人参皂苷Compound K处理后T24细胞中caspase-3及相关蛋白的表达情况。结果显示,人参皂苷Compound K对膀胱癌T24细胞的增殖具有较强的抑制作用,呈浓度和时间依赖关系,并诱导肿瘤细胞凋亡,同时caspase-3活化型表达量增加。说明人参皂苷Compound K能够显著抑制膀胱癌T24细胞的活力,有效地诱导T24细胞凋亡。     

在乳腺癌细胞MCF-7中紫杉醇诱导硫氧还蛋白结合蛋白-2的表达

探讨紫杉醇在人乳腺癌细胞株MCF-7中诱导硫氧还蛋白结合蛋白-2表达及与其诱导的相关途径．用不同浓度的紫杉醇刺激MCF-7细胞,MCF-7细胞生长受抑制．通过荧光实时定量PCR检测,发现紫杉醇刺激MCF-7细胞后硫氧还蛋白结合蛋白-2mRNA的表达升高．经荧光素酶活性检测,得出紫杉醇诱导硫氧还蛋白结合蛋白-2基因启动子活性的增高．p38丝裂原激活蛋白激酶（p38MAPK）抑制剂,SB203580抑制了紫杉醇诱导的硫氧还蛋白结合蛋白-2mRNA的表达．因此,紫杉醇抑制MCF-7细胞生长,并通过p38丝裂原激活蛋白激酶途径诱导硫氧还蛋白结合蛋白-2表达．     

莪术油对胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响

研究莪术油影响人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的机制。采用台盼蓝拒染法检测不同剂量莪术油对胃癌细胞SGC-7901的生长抑制率;光学显微镜观察细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测细胞DNA片段化情况;流式细胞术检测细胞线粒体膜电位的改变、细胞凋亡率以及细胞周期分布。实验结果表明：作用48h时,最佳浓度为110μg／mL,IC50值为104．958μg／mL。DNA电泳可见有梯状条带出现,流式细胞术法显示有凋亡峰出现。莪术油可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡。     

白藜芦醇抗肿瘤作用机制的研究现状

白藜芦醇是一种天然多酚类化合物,存在于葡萄、花生等多种植物中,是预防肿瘤的绿色抗癌药物。白藜芦醇可通过抗氧化、调节细胞的氧化还原代谢、干扰细胞自噬和降低细胞的侵袭力等途径发挥抗肿瘤作用。近年来,白藜芦醇在抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡及抑制血管生成等方面越来越受到临床关注,其不仅可以通过胞内胞外途径和周期阻滞诱导肿瘤细胞凋亡,还可以通过调节细胞体内相关信号靶点来抑制肿瘤的迁移。本文就白藜芦醇抗肿瘤作用机制的研究进展进行综述。     

A New Type of Nanogel Carrier based on Mixed Pluronic Loaded with Low-Dose Antitumor Drugs

To design a new type of antitumor nanodrug carrier with good biocompatibility, a drug delivery system with a 2.19% drug-loading rate, measured by high-performance liquid chromatography(HPLC), was prepared by membrane hydration using a mixed polymer: Pluronic~? F-127, which binds folic acid(FA), Pluronic~? F-68 and triptolide(TPL)(FA-F-127/F-68-TPL). As a control, another drug delivery system based on a single polymer(FA-F-127-TPL) with a 1.90% drug-loading rate was prepared by substituting F-68 with F-127. The average particle sizes of FA-F-127/F-68-TPL and FA-F-127-TPL measured by a particle size analyzer were 30.7 nm and 31.6 nm, respectively. Their morphology was observed by atomic force microscopy(AFM). The results showed that FA-F-127-TPL self-assembled into nanomicelles, whereas FA-F-127/F-68-TPL self-assembled into nanogels. An MTT assay showed that a very low concentration of FA-F-127/F-68-TPL or FA-F-127-TPL could significantly inhibit the proliferation of multidrug-resistant(MDR) breast cancer cells(MCF-7/ADR cells) and induce cell death. The effects were significantly different from those of free TPL(P 0.01). Using the fluorescent probe Nile red(Nr) as the drug model, FA-F-127/F-68-Nr nanogels and FAF-127-Nr nanomicelles were prepared and then incubated with human hepatocarcinoma(HepG2) and MCF-7/ADR cells, and the fluorescence intensity in the cells was measured by a multifunctional microplate reader. The results indicated that both FA-F-127/F-68-Nr and FA-F-127-Nr had sustained release in the cells, but HepG2 and MCF-7/ADR cells exhibited significantly higher endocytosis of FA-F-127/F-68-Nr than that of FA-F-127-Nr(P 0.01). A nude mice transplanted tumor model was prepared to monitor FA-F-127/F-68-Nr in the tumor tissue and organs by whole-body fluorescent imaging. The results showed that FA-F-127/F-68-Nr targeted tumor tissues. The prepared nanogels had small particle size, were easy to swallow, exhibited slow release property,targeted tumor cells, and could improve the antitumor effects of TPL; hence, they are ideal carriers for low-dose antineoplastic drugs.     

双靶向溶瘤腺病毒联合奥沙利铂对肿瘤细胞凋亡的研究

研究化疗药物奥沙利铂(Oxaliplatin)联合AdCN205-IL-24对人结肠癌细胞的体外杀伤作用。实验采用MTT法检测肿瘤特异性增殖腺病毒AdCN205-IL-24联合奥沙利铂对两种肿瘤细胞以及正常细胞增殖的抑制作用;Hoechest33342染色,在荧光显微镜对病毒联合化疗诱导的肿瘤细胞凋亡进行形态学观察。结果表明:AdCN205-IL-24联合奥沙利铂处理4 d后对结肠癌细胞株HT-29和SW620的增殖抑制率达到23.17%和22.98%,并且联合化疗并未增加对人正常细胞株L-02的毒性。     

双基因溶瘤腺病毒联合5-FU抑制肺癌细胞增殖的研究

研究携带TRAIL和Smac的双基因溶瘤腺病毒（ZD55-TRAIL-IETD-Smac）联合化疗药物5-氟尿嘧啶（5-FU）对肺癌细胞的体外杀伤作用。通过MTT法检测细胞抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western Blot检测杀伤性基因表达与凋亡相关蛋白表达。结果显示ZD55-TRAIL-IETD-Smac与5-FU联合应用能有效地抑制肺癌细胞的增殖,并通过激活Caspase通路诱导肺癌细胞产生凋亡,表明,5-FU能够显著增强携带TRAIL和Smac的双基因溶瘤腺病毒对肺癌细胞的杀伤作用,为肺癌的临床应用提供了参考。     

海嘧啶对肿瘤细胞内[Ca^2＋]i的影响

研究表明海嘧啶抗癌疗效确切,抗癌机制与其诱导肿瘤细胞凋亡有关,旨在进一步揭示海嘧啶诱导肿瘤细胞凋亡的机制,采用激光扫描共聚焦技术观察海嘧啶对肿瘤细胞内[Ca^2 ]i的影响及[Ca^2 ]i变化时Ca^2 的来源,采用定磷法测定海嘧啶对肿瘤细胞膜钙泵活性的影响,海嘧啶可显著升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i的浓度;[Ca^2 ]i升高时,Ca^2 同时来源于细胞外钙内流和细胞内钙释放,海嘧啶可显著降低肿瘤细胞膜钙泵活性,海嘧啶通过升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i的浓度,从而启动肿瘤细胞凋亡机制,诱导肿瘤细胞凋亡;海嘧啶升高肿瘤细胞内的作用是通过开放肿瘤细胞膜钙通道、引起肿瘤细胞内钙库释放、降低肿瘤细胞钙泵活性三条途径达到的。