黄柏花粉多糖除蛋白方法比较及其对抗氧化功能的影响

黄柏花粉为研究对象,以蛋白清除率和多糖保留率为指标进行比较三氯乙酸法(TCA法)、Sevage法、木瓜蛋白酶法去除黄柏多糖中的蛋白质,并采用清除羟自由基能力和总还原力为2个体外指标来评价不同除蛋白方法对多糖抗氧化性能力的影响。结果表明,TCA法和Sevage法的最佳蛋白脱除率分别为92.21%和49.60%,其多糖保留率分别为53.76%和84%,木瓜蛋白酶法除蛋白(酶解温度45℃,时间2 h,p H=5.0),蛋白清除率为53.24%,多糖保留率为83.88%。比较3种除蛋白方法对多糖抗氧化能力的影响,发现清除羟自由基能力和总还原能力由强到弱依次为木瓜蛋白酶法、Sevage法、TCA法。因此说明,利用木瓜蛋白酶法除多糖中的蛋白质,多糖保留率较高,对多糖抗氧化能力破坏性小。     

三种多糖降解复合物体外抑制HeLa细胞的增殖作用

本文探讨了毛头鬼伞、龙须菜和坛紫菜三种多糖降解复合物体外抑制HeLa细胞增殖的协同效应及其作用机制。将毛头鬼伞、龙须菜和坛紫菜的多糖降解物复配成复合多糖降解物,采用MTT法检测复合多糖降解物对HeLa细胞增殖影响,DCFH-DA检测细胞内活性氧水平,JC-1检测线粒体膜电位变化情况。正交实验结果显示,当毛头鬼伞、龙须菜和坛紫菜三种多糖降解物以质量比为4:4:5组合时,对HeLa细胞的增殖抑制作用最强,在浓度为100μg/m L时,抑制率达75.72%,远高于三种单味多糖降解物单独使用时的最高抑制率56.09%;DCFH-DA、JC-1检测结果表明,复合多糖降解物可以显著提高细胞内活性氧水平,降低线粒体膜电位。以上结果均说明毛头鬼伞、龙须菜和坛紫菜三种多糖降解物复合后,对HeLa细胞的增殖抑制活性存在协同增效作用,该复合多糖降解物的作用机制可能与提高细胞内活性氧水平和降低线粒体膜电位有关。     

超声波辅助水提-蛋白酶法提取末水坛紫菜多糖的研究

[目的]对坛紫菜养殖的下脚料末水坛紫菜提取多糖以实现高值化利用。[方法]采用超声波辅助水提-蛋白酶法提取末水坛紫菜多糖。首先通过单因素试验考察了提取温度、提取时间及水料比三个重要因素对多糖提取率的影响,并通过正交试验优化了超声波辅助水提末水坛紫菜多糖工艺参数。然后,通过单因素试验考察了木瓜蛋白酶加酶量、水解温度及水解时间对多糖提取率的影响,并通过正交试验优化了木瓜蛋白酶去除蛋白质工艺参数。[结果]确定超声波辅助水提-蛋白酶法提取末水坛紫菜多糖的最优工艺参数为:提取温度65℃、提取时间3.5 min、水料比30∶1(mL/g)、加酶量2%(mg/mL)、水解温度50℃、水解时间60 min。在上述最优条件下提取末水坛紫菜多糖,多糖提取率可达9.5%。[结论]末水坛紫菜富含多糖,采用超声波辅助水提-蛋白酶法可高效提取。     

响应面法优化蓝刺头多糖除蛋白工艺的研究

目的:筛选蓝刺头多糖的除蛋白工艺。方法:以蛋白清除率和多糖保留率为指标,比较了三氯乙酸法(TCA法)、Sevage法、木瓜蛋白酶法的除蛋白效果,并利用响应面法选取反应温度、时间、pH为因素优化了木瓜蛋白酶法除蛋白的最佳工艺。结果:TCA法和Sevage法的最佳蛋白清除率分别为45.13%和47.47%,其多糖保留率分别为61.05%、67.65%,优化的木瓜蛋白酶法除蛋白最佳工艺为酶解温度64℃,时间2.6h,pH6.0,在此条件下的蛋白清除率为56.57%,多糖保留率为98.12%。结论:综合考察各指标,说明木瓜蛋白酶法除蛋白方法效果较好,为蓝刺头多糖制备工艺的进一步研究提供了参考。     

末水坛紫菜蛋白源抗氧化肽的制备、分离纯化与体外抗氧化活性

通过单因素试验、Box-Behnken设计响应面分析法优化酸性蛋白酶水解末水坛紫菜蛋白工艺,并测定不同水解时间的酶解产物体外抗氧化活性与分子质量分布。结果表明:当水解时间4 h、底物质量浓度2 g/100 mL、加酶量4 240 U/g、pH 3.7、温度54℃的条件下,水解度可高达11.40%。此外,通过调节水解时间以控制水解度,探讨了水解度与酶解产物抗氧化活性的关系,发现当水解时间为4 h、水解度为11.40%时,酶解产物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除活性最强,其清除DPPH自由基的半抑制率质量浓度为0.68 mg/m L,分子质量小于1 kDa的小分子肽占总量的73.46%。同时,采用凝胶色谱层析对末水坛紫菜酶解产物进行了分离纯化,得到末水坛紫菜抗氧化肽(Porphyra haitanensis antioxidant peptide,PHAP),其质量浓度为1 mg/m L时对DPPH自由基的清除率为73.32%,对羟自由基的清除率为30.15%。最后通过建立H2O2诱导人肝癌HepG2细胞的氧化应激模型,证实了PHAP对HepG2细胞的氧化损伤具有修复作用,可增强超氧化物歧化酶的活性,降低脂肪氧化产物丙二醛的含量。     

拟目乌贼肌肉多糖酶法脱蛋白工艺优化及体外清除自由基能力

以加酶量、酶解温度、pH值、酶解时间为影响因素,以蛋白脱除率和多糖损失率为评价指标,通过正交试验优化拟目乌贼肌肉多糖酶法脱蛋白工艺,并与三氯乙酸法、等电点法脱蛋白效果进行比较。同时对脱蛋白多糖的体外清除自由基能力进行研究。结果表明,拟目乌贼肌肉多糖脱蛋白最佳工艺条件为:加酶量3.0 g/100 m L、酶解温度53℃、p H 8.2、酶解时间1.5 h。此条件下蛋白脱除率为89.43%,多糖损失率为1.78%,优于三氯乙酸法和等电点法。清除自由基结果显示,多糖质量浓度为10 mg/m L时,酶法、三氯乙酸法和等电点法得到的脱蛋白多糖对羟自由基清除率分别为45.72%、38.72%和25.18%,相应的IC_(50)值分别为12.44、16.37、34.64 mg/m L;对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基的清除率分别为68.00%、30.08%和23.10%,相应的IC50值分别为7.62、16.71、28.96 mg/m L。3种脱蛋白方法所得拟目乌贼肌肉多糖清除自由基效果依次为:酶法三氯乙酸法等电点法。     

微波辅助提取花生粕多糖的五种脱蛋白方法研究

通过微波辅助提取法从花生粕中提取多糖,从而探索花生粕多糖脱蛋白的最优方法。以蛋白质脱除率和多糖损失率为指标,比较Sevag法、三氯乙酸法、木瓜蛋白酶法、木瓜蛋白酶–Sevag联用法和木瓜蛋白酶–TCA联用法脱除花生粕多糖蛋白的效果。结果显示:木瓜蛋白酶–TCA联用法效果最好,其脱蛋白的最佳条件为木瓜蛋白酶用量0.05 g、酶解温度45℃、酶解反应2 h,采用6%TCA溶液除蛋白1次,此时蛋白去除率为85.83%,多糖损失率为6.44%。     

蚕蛹多糖脱蛋白方法研究

以蛋白去除率和多糖损失率为指标,比较Sevag法、三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)法、木瓜蛋白酶法、木瓜蛋白酶-Sevag联用法和木瓜蛋白酶-TCA联用法脱除蚕蛹多糖蛋白的效果。结果显示：木瓜蛋白酶-TCA联用效果最好,其脱蛋白的最佳条件为木瓜蛋白酶用量[E]/[S] 2.0%、酶解温度50℃、酶解反应1.5h、采用TCA法除蛋白1次,此时蛋白去除率为97.98%,多糖损失率为18.76%;紫外光谱扫描定性实验显示脱蛋白的多糖在260～280nm处只有少量吸收,表明大多数蛋白已去除。木瓜蛋白酶-TCA联用法是一种有效的多糖脱蛋白方法。     

紫菜酶解物的制备及其特性

坛紫菜用纤维素酶和木瓜蛋白酶分别或联合处理,考察了提取物的得率、DPPH自由基清除率、氨基酸组成、蛋白溶解性和乳化性等性质.结果发现,利用木瓜蛋白酶对紫菜进行酶解时,固形物提取率稍微高于纤维素酶,利用这两种酶进行复合酶解时虽然可以提高紫菜的固形物得率,但不会改变蛋白提取率.紫菜酶解物的DPPH自由基清除率与蛋白含量之间存在显著的正相关关系,可能与提取物中具有抗氧化活性的氨基酸含量增加有关.另一方面,紫菜经复合酶酶解4h以上,提取物的蛋白溶解性在任一pH下都接近100％.而且,紫菜酶解物的乳化性在pH9最好,但乳化稳定性在pH7最低.     

库拉索芦荟凝胶多糖脱蛋白方法研究

为研究库拉索芦荟凝胶多糖蛋白质的脱除工艺条件,本文以蛋白质脱除率和多糖保留率为指标,比较三氯乙酸(TCA)法、Sevag法、木瓜蛋白酶法、木瓜蛋白酶-TCA联用法、木瓜蛋白酶-Sevag联用法脱除芦荟凝胶多糖蛋白的效果。结果显示,木瓜蛋白酶-TCA联用法效果最好,其条件为酶用量2%、酶解温度60℃、酶解时间1h、pH为6,采用5%TCA除蛋白1次,此时蛋白质去除率为83.4%,多糖保留率为74.9%。不同脱蛋白法对芦荟凝胶多糖的脱蛋白效果有较明显差异,木瓜蛋白酶-TCA联用法是一种有效的芦荟凝胶多糖脱蛋白方法。     

响应面法优化芡茎多糖脱蛋白工艺

目的:研究芡茎多糖脱蛋白最优工艺。方法:以芡茎多糖蛋白脱除率和多糖损失率为指标,考察沙维积(Sevag)法、三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)法、木瓜蛋白酶法、木瓜蛋白酶-TCA法4种方法对芡茎多糖脱蛋白的效果,从而筛选得木瓜蛋白酶-TCA法为较优方法。利用响应面法对木瓜蛋白酶法脱蛋白工艺进行优化,并将最优工艺与TCA法结合处理1次。结果:木瓜蛋白酶-TCA法最优工艺为加酶量580 U·mL-1,酶解温度30 ℃,酶解时间2.0 h,pH7.0,TCA体积分数8.0%,在此条件下,芡茎多糖蛋白脱除率为85.1%,多糖损失率为16.3%。结论:木瓜蛋白酶-TCA法是一种较优的芡茎多糖脱蛋白方法。     

茄枝多糖的分离纯化及成分分析

研究茄枝多糖的提取工艺和主要单糖组分。通过水提工艺,比较三氯乙酸（trichloroacetic acid,TCA）、Sevag、TCA与木瓜蛋白酶结合、Sevag与木瓜蛋白酶结合4 种脱除蛋白方法,使用DEAE-D22纤维素柱与SephadexG-100柱层析精制获得茄枝多糖ESP1-1,并对其进行薄层色谱（thin layer chromatography,TLC）、高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）检测与组分分析。木瓜蛋白酶与TCA法结合脱除蛋白效果最佳,蛋白清除率达到93%,多糖损失率为45.3%;TLC、HPLC检测与分析证明ESP1-1具有多糖的理化性质,主要由甘露糖、葡萄糖、果糖、木糖4 种单糖组成。研究结果可为茄枝多糖的开发应用提供理论支持。     

啤酒花多糖的提取及脱蛋白工艺研究

以超临界液态二氧化碳萃取后的啤酒花残渣为原料,采用正交实验和单因素实验,确定了啤酒花多糖的热水微波辅助萃取的最佳工艺条件:提取时间2h,料液比1∶10,提取温度90℃,微波功率750W作用时间12min;此条件下多糖提取率为2.76%。对得到的粗多糖,以蛋白脱除率和多糖保留率为指标,在比较Sevag法,盐酸-正丁醇法,三氯乙酸-正丁醇法,木瓜/菠萝蛋白酶法对粗多糖中蛋白质的脱除效果的基础上,考察了酶法和化学法联用脱蛋白工艺,并最终确定菠萝蛋白酶-三氯乙酸-正丁醇的脱蛋白效果最好,最佳条件为温度45℃,酶解时间0.5h,酶添加量22.5U/mL,pH5.5,三氯乙酸-正丁醇法除蛋白1次,蛋白脱除率和多糖保留率分别为86.77%和77.37%;而木瓜蛋白酶-盐酸-正丁醇的脱蛋白工艺在有效脱除蛋白质的同时,多糖损失最少,最佳条件为温度55℃,酶解时间0.5h,酶添加量36U/mL,pH5.5,盐酸-正丁醇法除蛋白1次,蛋白脱除率和多糖保留率分别为77.37%和84.43%。     

坛紫菜蛋白质提取工艺优化及其特性分析

为了开展坛紫菜高值化加工利用，以坛紫菜为原料、蛋白质提取率为评价指标，通过考察提取溶剂、超声时间和功率、料液比、pH等单因素实验、正交试验设计优化超声波提取工艺，对其等电点、乳化性、起泡性等基础特性进行分析，并进行抗氧化活性测定。结果表明，在超声全程时间50 min、超声功率1350 W条件下，坛紫菜蛋白质提取率为60.98%±1.01%。同时通过对所提取的坛紫菜蛋白质特性分析结果显示，坛紫菜蛋白质的等电点为4.5，在等电点附近，坛紫菜蛋白质有较好的泡沫稳定性，可达80.84%±2.95%；抗氧化测定结果显示，坛紫菜蛋白质在5~50 mg/mL范围内具有较强的抗氧化活性，浓度为50 mg/mL时，总抗氧化能力为2.89±0.09 U/mL，ABTS+自由基清除能力相当于0.83±0.08 mmol/L Trolox，DPPH清除率在10 mg/mL时达到68.04%±0.73%。该研究可以为坛紫菜资源的开发利用提供一定的理论依据和技术支持。     

乙醇-硫酸铵双水相体系萃取坛紫菜多糖

探究不同系线长度的乙醇-硫酸铵双水相体系对坛紫菜多糖萃取的影响。采用浊点滴定法绘制乙醇-硫酸铵双水相相图,选取不同系线长度体系,测定其对紫菜多糖分配情况。结果表明：在乙醇质量分数27%、硫酸铵质量分数18%（即系线长度为40）、体系相比R为1.1时,紫菜多糖的回收率可达79.8%,分配系数K为0.23;其蛋白去除率明显高于传统醇沉法（双水相萃取多糖蛋白含量为1.20%,醇沉多糖蛋白含量为6.17%）,且具有较好的脱色效果,可用于紫菜多糖的分离纯化。     

芒果皮渣多糖脱蛋白和脱色工艺研究

探讨芒果皮渣多糖纯化过程中蛋白质和色素的脱除方法。以蛋白质脱除率和多糖保留率为评价指标,比较三氯乙酸法、三氯乙酸-正丁醇法、Sevage法、HCl法、木瓜蛋白酶法、三氯乙酸+Sevage法、木瓜蛋白酶+三氯乙酸法、木瓜蛋白酶+Sevage法和木瓜蛋白酶+三氯乙酸-正丁醇法对芒果皮渣多糖的脱蛋白效果;以脱色率和多糖保留率为评价指标,在单因素实验的基础上,通过正交实验优化活性炭对脱蛋白后多糖溶液的脱色工艺。结果表明:三氯乙酸-正丁醇法脱蛋白效果最佳,其条件为三氯乙酸-正丁醇与样液体积比2:1、三氯乙酸与正丁醇体积比1:20、振荡时间2 h,此时蛋白质脱除率为90.08%,多糖保留率率为94.40%;活性炭脱色最佳工艺条件为:样液pH3.0,活性炭添加量1.5%,脱色温度50℃,脱色时间75 min,此条件下脱色率为70.98%,多糖保留率为92.77%。本实验筛选的方法切实可行,可用于芒果皮渣多糖的脱蛋白和脱色。     

芦笋多糖提取纯化工艺及其体外抗氧化研究

目的：探讨芦笋多糖的提取纯化方法及其体外抗氧化活性。方法：采用L9(34)正交试验设计,考察提取温度、提取时间、料液比、提取次数等因素对芦笋粗多糖浸提效果的影响。进一步以酶法除蛋白纯化粗多糖,探索3种蛋白酶作用的最佳工艺条件及其除蛋白效果,用硫酸-苯酚法和DNS法定量分析粗多糖;并研究芦笋多糖对自由基的清除作用以及对红细胞溶血、肝线粒体肿大的抑制作用。结果：在提取温度100℃、提取时间3h、料液比1:20(g/mL),提取1次条件下,芦笋粗多糖的得率最高,为(8.50±1.07)%,经碱性蛋白酶纯化后,纯度可达(52.40±0.47)%。芦笋多糖在体外体系中可显著清除DPPH自由基、 ·OH、O2－ ·,并具有抑制红细胞溶血,抑制肝线粒体肿大的作用。结论：芦笋多糖具有较好的抗氧化活性。     

虾夷扇贝多糖提取及纯化方法的优化

以青岛虾夷扇贝为原料,利用单因素试验以及正交试验,对水提、酶提醇沉法结合超声波辅助提取扇贝柱多糖工艺及多糖脱蛋白进行研究,并对三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)和D-葡萄糖酸-δ-内酯(D-glucono-δ-lactone,GDL)的脱蛋白效果进行对比,其中利用GDL对多糖中的蛋白质进行脱除尚属首次。结果显示,多糖提取最佳工艺条件为液料比40∶1(m L/g)、加酶量2.5%、60℃提取3 h,在此条件下虾夷扇贝多糖得率可达10.90%;TCA法脱蛋白的最佳工艺条件为脱蛋白时间5 h、TCA质量分数5%、脱蛋白次数3次;GDL法脱蛋白的最佳条件为反应时间1 h、反应温度45℃、GDL质量分数0.3%。在两者最佳条件下,分别进行3次平行实验,TCA蛋白脱除率为88.654%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.905%;GDL蛋白脱除率为99.062%,RSD为0.679%;对比两种脱蛋白方法,GDL法脱蛋白效率更高,实验效果也更为稳定。