鱿鱼酶解工艺优化及酶解液抗氧化活性的研究

以鱿鱼为原料,探讨了酶法水解鱿鱼的工艺条件,同时研究了最佳工艺条件下酶解液的抗氧化活性.试验结果表明:鱿鱼酶解最佳工艺参数为温度55℃、pH值为8、反应时间为5h,加酶量为40％,通过验证试验,在此条件下,鱿鱼的水解度为56.82％.鱿鱼酶解液具有一定的抗氧化活性,对O2-·和·OH的IC50分别为7.2765mg/mL和0.1121mg/mL.     

响应面优化鱿鱼须酶法脱皮工艺及其质构特性

采用不同蛋白酶进行鱿鱼须脱皮实验,以白度值和原料保留率为指标,筛选出最适蛋白酶。在单因素试验基础上,采用Box-Behnken试验设计优化秘鲁鱿鱼须酶法脱皮工艺参数,并通过挥发性盐基氮（total volatile basicnitrogen,TVB-N）含量、质构与显微组织分析样品的新鲜度及质构特性。结果表明,回归模型能较好反映因素水平与响应值的关系,并确定最适酶法脱皮工艺为胰酶添加量0.25%、料液比17∶20（g/mL）、酶解时间20 min,在此条件下,样品的白度值为63.95±0.31,原料保留率为（81.22±0.28）%,TVB-N含量为（27.60±0.34） mg/100 g,且质构特性与肌纤维组织均无显著变化。脱皮后的秘鲁鱿鱼须TVB-N含量符合GB 2733-2005《鲜、冻动物性水产品卫生标准》规定,色泽鲜亮、肉质有弹性、原料保留率高,该工艺适合生产实际需求。     

响应面试验优化裙带菜蛋白酶解工艺及酶解液抗氧化活性

运用响应面分析方法对裙带菜蛋白酶解工艺条件进行优化。经单酶筛选,在单因素试验基础上,以亚铁离子螯合率和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率为主要指标,水解度为辅助指标,研究酶解时间、酶解温度、p H值、底物质量浓度、加酶量对裙带菜蛋白酶解产物抗氧化活性和水解度的影响,并比较优化条件下的酶解液与常用天然抗氧化剂抗坏血酸、合成抗氧化剂丁基羟基茴香醚(butyl hydroxyanisole,BHA)的抗氧化活性。结果表明:复合蛋白酶是裙带菜蛋白酶解的最适用酶,酶解液螯合亚铁离子能力和清除DPPH自由基的最优条件为酶解时间8.1 h、酶解温度50℃、p H 7.0、底物质量浓度15 g/L、加酶量0.2%(0.3 AU/g裙带菜粉末)。在此条件下,酶解液的亚铁离子螯合率为88.58%,DPPH自由基清除率为59.22%,水解度为29.72%。对比常用抗氧化剂,在亚铁离子螯合能力方面,酶解液显著高于0.01%抗坏血酸和0.01%BHA(P0.05),而在DPPH自由基清除能力和还原能力方面,酶解液低于0.01%抗坏血酸和0.01%BHA(P0.05)。     

响应面法优化龙须菜蛋白酶解工艺及酶解液的抗氧化活性

为获得高抗氧化活性的龙须菜蛋白酶酶解液,运用响应面(RSM)分析方法对龙须菜蛋白酶解工艺条件进行优化。经单酶筛选,在单因素实验基础上,以亚铁离子螯合率和DPPH自由基清除率为主要指标,水解度为辅助指标,研究酶解时间、p H、酶解温度、底物质量浓度、加酶量对龙须菜蛋白酶解液抗氧化活性和水解度的影响。结果表明:在所选的5种蛋白酶中,复合蛋白酶是龙须菜蛋白酶解的最适用酶;酶解液抗氧化活性的最优酶解条件为酶解时间8.1 h、酶解温度50.1℃、p H7.0、底物浓度10 g/L、加酶量0.1%(0.15 AU/g)。在此条件下,酶解液的亚铁离子螯合率为74.61%,DPPH自由基清除率为47.66%,水解度为17.58%。对比常用抗氧化剂,酶解液在亚铁离子螯合能力方面显著高于0.01%维生素C和0.01%BHA(p<0.05),而在DPPH自由基清除能力和还原能力方面,酶解液低于0.01%维生素C和0.01%BHA(p<0.05)。优化后的龙须菜蛋白酶酶解液具有一定的抗氧化活性。      

鱿鱼酮体酶解液抗氧化活性研究

以秘鲁鱿鱼酮体为原料,制备稀释的匀浆液.使用721分光光度计检测吸光度,对4种蛋白酶作用后的酶解液进行清除羟自由基(·OH)能力研究.结果表明:鱿鱼匀浆经酶解后,清除羟自由基能力显著提高;不同蛋白酶的酶解液对羟自由基清除率不同,其中木瓜蛋白酶酶解液清除能力最强.通过单因素试验与正交优化试验确定酶解液具有最 佳抗氧化性的酶解条件,底物浓度为4%,木瓜蛋白酶用量为18000U/g蛋白质,酶解温度65℃,pH=8,作用时间为0.5 h的鱿鱼酮体匀浆酶解液具有最高的清除羟自由基活性.验证实验显示在该条件下羟自由基清除率可达29.92%.方差分析结果表明温度、pH值、酶添加量以及底物浓度4种因素对于羟自由基(·OH)清除率影响差异均极显著.     

响应面法优化鱿鱼内脏酶解工艺的研究

以鱿鱼内脏为研究对象,选用水解度和氮收率作为衡量鱿鱼内脏酶解工艺的指标,首先筛选出胰蛋白酶最有利于鱿鱼内脏的酶解。在单因素基础上,选用pH、酶解温度、酶解时间、酶添加量等作为自变量,以水解度作为响应值,利用Box-Behnken中心组合设计原理,以及响应面分析方法,模拟得到二次多项式回归方程的预测模型。根据该模型并结合实际,确定鱿鱼内脏酶解的最佳工艺条件为pH 8.0,酶解温度43℃,酶解时间4.0h,酶添加量0.27%,预测响应值为72.62%。在此条件下,鱿鱼内脏酶解后的水解度平均值为73.58%,与预测值的相对偏差为1.32%,说明通过响应面优化后得出的回归方程高度显著,具有良好的指导意义。通过模型系数显著性检验,得到因素的主效应关系为:酶解时间酶解温度酶添加量pH。     

蛋白酶水解鸡枞菌制备酶解液工艺优化及抗氧化活性

以鸡枞菌为原料,以DPPH·、ABTS⁺·、O₂^-·清除率及水解度为指标,采用蛋白酶对鸡枞菌进行水解,制备酶解液。以碱性蛋白酶为水解酶,以DPPH·清除率和水解度为参考值,采用单因素和正交试验分析法研究料液比、加酶量、pH、温度、时间对酶解效果的影响。结果表明:应用碱性蛋白酶制备的鸡枞菌酶解液抗氧化效果最佳,酶解条件为料液比1∶25(g/mL),加酶量3500U/g,pH 7,酶解温度45℃,酶解时间2.5h。此条件下所得酶解液的DPPH·清除率为73.23%,水解度为44.6%,酶解液对DPPH·、ABTS⁺·和O₂^-·3种自由基均有清除作用,其IC₅₀分别为0.25,0.39,1.09mg/mL,但清除能力明显低于同浓度Vc的清除能力。     

响应面法优化受精蛋蛋清制备抗氧化肽酶解工艺

以酶解产物的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-diphenyl-1-（2,4,6-trinitrophenyl）hydrazyl,DPPH）自由基清除率为指标,在单因素试验的基础上,选择酶解温度、pH值、底物质量浓度、加酶量4 个因素,通过Box-Behnken试验设计和响应面分析法优化酶解受精蛋蛋清制备抗氧化肽的最佳工艺条件。结果表明：在酶解温度46 ℃、pH 9.1、底物质量浓度4.28 g/100 mL、加酶量21 000 U/g条件下,所得酶解产物的DPPH自由基清除率活性最强,达到84.97%。碱性蛋白酶酶解得到的产物具有较强的抗氧化活性,优化工艺条件与理论预测拟合度高。     

贻贝的可控酶解及其酶解液的抗氧化活性

用Alcalase对贻贝进行酶解能够得到具有抗氧化活性的酶解物。通过控制酶解时间分别得到水解度(hydrolysis degree,DH)为12%、18%、24%和30%的4种酶解物,研究其抗氧化活性。结果表明,酶解物的还原力和羟基自由基清除率均随DH升高而升高,但在DH 24%~30%范围升高极缓;其DPPH自由基、超氧阴离子自由基清除率和脂质过氧化抑制率均随DH升高而呈现先增后降的趋势,最高清除率均出现在DH 24%处。DH为24%的贻贝Alcalase酶解物具有最佳的抗氧化活性。     

大鲵活性肽酶法制备工艺优化及抗氧化性分析

研究了碱性蛋白酶水解制备大鲵活性肽的工艺条件以及大鲵活性肽的理化性质。以水解度为指标,通过Box-Behnken实验设计方法,确定最佳工艺条件为:酶解温度50℃,酶解时间1.5 h,酶添加量70 U/g,p H8.91,液料比2∶1（m L/g）,蛋白酶解液的水解度值为DH=19.61%±0.12%。所得大鲵活性肽的蛋白质含量为52.40%±1.28%。HPLC分析可知该大鲵活性肽的分子量多分布在1000.00 u以内。在30 mg/m L,大鲵活性肽对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除率分别为81.83%、56.27%。      

响应面法优化菊芋渣酶解制备抗氧化肽工艺

以菊芋渣蛋白为原料,在单因素试验基础上,采用Plackett-Burman设计选出最显著的因素,即底物质量浓度、酶解时间、pH值,再用响应面分析法对其进行考察,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为评价指标,优化菊芋渣抗氧化肽酶解工艺。结果表明,最佳酶解条件为加酶量8 000 U/g、酶解温度50 ℃、pH 5.0、酶解时间3.5 h、底物质量浓度0.16 g/mL,在此条件下DPPH自由基清除率实测平均值达88.10%,与预测值88.08%相近。     

Optimization of Hydrolysis Conditions for the Production of Antioxidant Peptides from Fish Gelatin Using Response Surface Methodology

Abstract: Fish skin gelatin was hydrolyzed with papain to produce antioxidant peptides. Response surface methodology (RSM) was applied to optimize the hydrolysis conditions (including enzyme to substrate ratio [E/S], hydrolysis time, and temperature). The highest degree of hydrolysis (DH) (50.1 ± 1.1%) was obtained at an E/S of 2% at 56.8 °C, 2.11 h, and was not significantly different from the predicted values within a 95% confidence interval. The highest 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) (96.8 ± 0.9%) and 2,2′-azinobis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt (ABTS^•+) (9.80 ± 0.11 mM Trolox [6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethychroman-2-carboxylic acid]) radical-scavenging activities of fish gelatin hydrolyzates were obtained at an E/S of 3% at 52.1 °C, 2.65 h, and both DPPH and ABTS^•+ radical-scavenging activities were not significantly different from the predicted values 97.3% and 9.86 mM Trolox within the 95% confidence interval. Therefore, RSM is an efficient way to optimize fish gelatin hydrolysation and the resultant hydrolyzates show promise as antioxidant peptides. Practical Application: There is a growing interest in the use of fish gelatin as an alternative to mammalian gelatin. One potential use is as a source of widely acceptable functional compounds. In this study, a search for antioxidant peptides from fish gelatin prepared by an enzymatic method has been successfully done. This suggests that this is a practical way to obtain bioactive peptides.     

响应面法优化酶解藜麦糠蛋白制备抗氧化肽工艺

以藜麦糠蛋白为研究对象,酶法制备藜麦糠抗氧化肽,进行酶解蛋白酶的筛选,确定最佳复合酶组合。根据单因素试验结果,利用响应面法分析各因素及交互作用对响应值（还原能力）的影响,得到藜麦糠蛋白最优酶解工艺为加酶量3?600?U/g、pH?7.66、酶解时间2.13?h、酶解温度50.53?℃,在此酶解条件下,抗氧化肽得率为76.25%,制得的藜麦糠抗氧化肽有很强的还原能力。该条件下藜麦糠抗氧化肽还原能力预测值为0.636?5,验证实验所得实测平均值为0.644,实测结果与预测值符合良好。同时藜麦糠抗氧化肽对超氧阴离子自由基和羟自由基均有良好的清除能力,且呈现较好的量效关系,在天然抗氧化剂和保健食品领域有一定的开发利用价值。     

响应面法优化珍珠龙胆石斑鱼肉肽的酶法制备工艺及酶解产物的抗氧化活性

以珍珠龙胆石斑鱼肉为原料,利用蛋白酶酶解制备生物活性肽。以水解度和DPPH自由基清除率为指标,在单因素实验的基础上采用响应面分析法优化制备工艺。并采用超滤法对酶解产物进行分离纯化,同时进行抗氧化活性探究。结果表明:珍珠龙胆石斑鱼肉酶解工艺条件为:采用风味蛋白酶,酶添加量1050 U/g,在pH7.0、53℃、料水比1:3.5条件下酶解5.5 h,水解度为9.99%±0.39%。酶解产物与超滤组分均具有较强DPPH自由基清除能力,其IC₅₀值在0.63~0.88 mg/mL之间;EH-2(5~8 kDa)和EH-3(3~5 kDa)有较强的羟基自由基清除能力,其IC₅₀值分别为16.94和16.38 mg/mL;酶解产物与超滤组分均具有还原能力,且酶解产物还原能力最佳。优化的珍珠龙胆石斑鱼肉肽的酶法制备工艺合理且可行,其酶解产物与超滤组分具有较强的抗氧化性,可作为功能食品的基料应用。     

响应面优化酶解核桃蛋白制备抗氧化肽的工艺

为优化碱性蛋白酶酶解核桃蛋白制备抗氧化活性肽的工艺条件,考察酶解条件对酶解产物的抗氧化活性的影响。以羟基自由基的清除率、超氧阴离子自由基的清除率、还原能力为考察指标,使用响应面分析法,研究温度、pH值、底物浓度和酶添加量对制备抗氧化活性肽工艺的影响。经过优化得出最优酶解条件为:温度51℃、pH值8.13、底物浓度3.16%、酶添加量3.30%,在此最优条件下核桃多肽对羟基自由基的清除率为55.93%、对超氧阴离子自由基的清除率为47.85%、还原能力为55.34%。在10mg/mL的浓度下,核桃多肽的还原能力是VC的55.3%,对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除率分别是VC的93.8%和52.2%。     

响应面法优化猪血红蛋白制备ACE抑制肽的酶解工艺条件

以猪血红蛋白为原料,采用胃蛋白酶水解猪血红蛋白制备ACE抑制肽。以体外ACE抑制率和水解度为指标,通过单因素试验对酶解温度、酶解pH值、底物质量浓度、加酶量、酶解时间等酶解工艺参数进行研究,并用响应面法优化酶解工艺,建立二次多项数学模型。结果表明,胃蛋白酶水解猪血红蛋白制备ACE抑制肽的最佳工艺参数为酶解温度37.60℃、酶解pH 1.98、底物质量浓度4.98g/100mL、加酶量3.04%、酶解时间4h,酶解产物的最大ACE抑制率为70.09%。     

响应面法优化复合酶提取芦荟多糖工艺及其抗氧化活性分析

研究复合酶提取芦荟多糖的工艺,并测定其抗氧化性。在单因素试验的基础上,利用响应面法对复合酶提取芦荟多糖的条件进行了优化,通过测定芦荟多糖的总抗氧化能力、DPPH自由基和羟自由基清除能力研究其抗氧化性。结果显示,当料液比1∶30（g/mL）、果胶酶与纤维素酶配比1∶3、pH 4.5时,优化最佳提取条件为加酶量0.3%、酶解温度48 ℃、酶解时间40 min,此条件下芦荟多糖的提取率为5.65%,和超声波辅助法相比提取率提高了4.2%。芦荟多糖具有较好的抗氧化性,随着质量浓度的增加,其总抗氧化能力、DPPH自由基和羟自由基清除能力逐渐增强,在25 mg/mL时其DPPH自由基和羟自由基清除率分别达到75%和90%。复合酶法是一种新的、有效的芦荟多糖提取方法;芦荟多糖具有较好的抗氧化性。