椰酵假单胞菌与唐菖蒲伯克霍尔德菌16S～23S rRNA基因间区序列的比较研究

目的研究比较我国分离的椰酵假单胞菌与唐菖蒲伯克霍尔德菌不同致病型菌株的16S～23SrRNA基因间区序列,分析不同菌株基因水平的差别,并阐述其系统发育关系。方法设计2对伯克霍尔德菌属特异引物,扩增16S～23SrRNA基因间区序列。应用分子生物学软件,对3株分别代表唐菖蒲伯克霍尔德菌3种不同致病型的国际参考菌株（ATCC10248、NCPPB947、NCPPB3580）、1株伯克霍尔德菌属B．phenazinium种代表株（LMG2247）及8株从我国不同地域、不同食物样品中分离的椰酵假单胞菌（HN2y、Co14、Co8、Co36、Sx8801、90—3、56（2）、56（2））的16S～23SrRNA基因序列进行测定,并与核酸数据库（GenBank）中相关菌株序列进行比较分析。结果通过不同菌株16S～23SrRNA间区序列的分析比较,发现分离的椰酵假单胞菌米酵菌酸产毒株存在2个序列高可变区及特异基因序列,阐述了我国椰酵假单胞菌与唐菖蒲伯克霍尔德菌的系统发育关系,将DNA测序结果在核酸数据库中注册,并绘制了系统发育进化树。结论该研究结果为进一步鉴定椰酵假单胞菌米酵菌酸产毒株,从分子水平探讨其产毒机制及系统发育关系提供了新的、可靠的理论依据和技术支撑。     

61株水源性铜绿假单胞菌耐药分析及其16S rRNA系统发育学研究

目的 采用16S rRNA基因序列分析法对2018~2020年间分离自广东地区桶装水中的61株铜绿假单胞菌进行同源性分析,并探讨其对11种不同抗生素的耐药性。方法 采用27F/1492R通用引物对目标菌的16S rRNA基因序列扩增,测序后,采用Clustal X软件进行序列比对,利用MEGA 7.0软件构建系统发生树;药敏实验应用微生物全自动鉴定及药敏系统检测。结果 系统发育分析结果表明：61株共可分为3个分支,分别包含15株一支、1株一支、45株和铜绿假单胞菌标准菌株ATCC 27853一支;药敏结果显示61株铜绿假单胞菌处于较低耐药水平,对所有测试抗生素的耐药率均低于2%,但仍发现一株6重耐药菌株。结论 本研究初步建立了广东地区水源性铜绿假单胞菌的菌株资源库及药敏数据库,为之后的污染溯源工作提供了数据支持,从而保障广大消费群众的饮水安全。     

一株好氧反硝化细菌的分离与鉴定

为研究活性污泥中的反硝化细菌，从实验室驯化培养的活性污泥反应器中，分离获得1株反硝化细菌P7，进行了菌株形态观察及生理生化测定，并在此基础上，经PCR扩增后测定该菌株的16SrRNA基因序列，由16SrRNA基因序列比较可知，菌株P7与睾丸酮假单胞菌（Comamonas testosteroni）和稻草假单胞菌（Pseudomonas straminea）亲缘关系最为接近，16SrRNA基因相似性达到99．65％。可初步判定其为丛毛单胞菌属（Comamonas sp．）。结合生理生化实验结果，综合分析后，将其鉴定为丛毛单胞菌属（Comamonas sp．）的睾丸酮假单胞菌（Comamonastes tosteroni）。     

一株产胞外多糖植物内生菌EJS-3菌株的分离和鉴定

从中药植物-百部的组织中分离到一株高产胞外多糖的植物内生菌EJS-3菌株,该菌株在产糖培养基中可以得到23.6g/L的胞外多糖,转化率为47.2%(gEPS/g蔗糖)。通过16SrRNA基因序列分析对该菌株进行了鉴定。通过PCR扩增,得到1450bp的16SrRNA序列。PCR产物序列通过BLAST软件在NCBI网站中进行同源性比较。通过Bioedit7.0和Treedrawing软件绘制系统发育树。结果显示,EJS-3的16SrRNA序列和数据库中的类多粘芽孢杆菌KCTC1663菌株的序列的同源性为99.31%。在细菌系统发育分类学上,EJS-3菌株归属多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)。     

2015年广东省桶装饮用水中铜绿假单胞菌的污染调查和药敏性分析

目的 对广东省桶装饮用水中铜绿假单胞菌污染情况进行监测分析, 构建广东省水源性铜绿假单胞菌种质资源库及药敏风险评估数据库。方法 根据GB 19298-2014《食品安全国家标准 包装饮用水》, 对广东省20个城市进行桶装水中铜绿假单胞菌的专项污染调查, 并采用Kirby-Bauer纸片扩散法对81株分离株进行药敏实验。结果 758份样品中共81份样品检出铜绿假单胞菌, 铜绿假单胞菌总检出率为10.7%, 81份阳性样品中有51份样品铜绿假单胞菌的污染水平在1~100 CFU/250 mL; 81株分离株对四环素(tetracycline, TE)、米诺环素(minocycline, MH)、磺胺甲基异恶唑/甲氧苄氨嘧啶(sulphamethoxazole with trimethoprim, SXT)的耐药率分别为18.5%、60.5%、91.4%, 对另外13种抗生素的敏感性几乎100%。81株分离株中多重耐药菌株18株。结论 本研究初步构建了广东地域性铜绿假单胞菌种质资源库及水源性铜绿假单胞菌药敏风险评估数据库, 从中发现本次污染调查的水源性铜绿假单胞菌污染率为10.7%, 且对四环素类和磺胺类抗生素具有较强抗性, 建议相关监管部门进一步增强桶装饮用水食品安全监管。     

餐厨废水处理脂肪酶产生菌的鉴定及油脂降解特性研究

对一株产脂肪酶优良菌株SX1-5进行了16SrDNA分子鉴定,初步研究了该菌脂肪酶对不同油脂的降解特性。结果表明:通过16SrDNA测序并构建系统发育树,菌株SX1-5与铜绿假单胞菌序列相似性均达99.9%(1438/1439);脂肪酶对甘油三酯及不饱和脂肪酸酯的水解活性较高;玉米油、橄榄油和大豆油处理24h降解率分别达92.3%、90.6%和90.5%,餐厨废水降解试验中,30℃处理96h,油脂降解率达到65.6%,CODcr去除率达70.2%。     

包装饮用水中铜绿假单胞菌的耐药分析及同源性研究

采用国标方法对湖北省地区15家包装饮用水生产企业的水源水、各个生产环节水样及包装容器等共116份样品进行铜绿假单胞菌的分离和鉴定,将分离得到的48株阳性菌株通过梅里埃药敏鉴定卡进行耐药性分析,同时利用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）进行同源性研究。结果表明,48株水源性铜绿假单胞菌中有6株耐药菌株,耐药水平总体较低,而同一来源的铜绿假单胞菌亲缘关系较近,提示铜绿假单胞菌的污染主要来自于水源。     

沙漠生物结皮高产胞外多糖菌株的筛选与鉴定

采用传统的分离纯化方法从沙漠生物结皮中分离到27株产胞外多糖菌株,并通过苯酚-硫酸法从中复筛,筛选到一株产多糖量为7445.80mg/L的菌株XJ-27。根据菌株的形态学特征、生理生化鉴定方法初步鉴定为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis);通过16S rDNA基因序列分析对该菌株进行了鉴定,PCR扩增得到1452bp的序列,PCR产物序列通过Blast软件在NCBI网站中进行同源性比较,通过MEGA4.0软件绘制系统发育树,结果进一步确认了该菌的地位,XJ-27在细菌系统发育分类学上也归属为苏云金芽孢杆菌。     

肉鸡中铜绿假单胞菌的研究

目的调查屠宰前肉鸡铜绿假单胞菌的携带情况,为铜绿假单胞菌流行病学的调查和相关疾病的预防控制提供依据。方法采集49份屠宰前肉鸡的肛拭子,并分离可疑菌株,对分离到的菌株进行氧化酶实验、绿脓菌素试验和VITEK生化鉴定实验。结果从49份屠宰前肉鸡中分离出8株可疑菌株,阳性检出率为16.3%。通过形态学观察、生化鉴定,8株可疑菌株均被鉴定为铜绿假单胞菌。8株可疑菌株的生化反应结果符合铜绿假单胞菌的生化反应特点。结论健康肉鸡可携带铜绿假单胞菌。铜绿假单胞菌可作为一种食源性致病菌而危害人类健康。     

鲜切苦菊、生菜和紫甘蓝上假单胞菌的分离鉴定及其噬菌体的初步筛选

鲜切蔬菜是人类摄取矿物质和维生素的重要来源,假单胞菌是鲜切蔬菜上的主要腐败菌.为了控制鲜切蔬菜中假单胞菌的污染,该研究采用假单胞菌培养基和16S rRNA基因序列分析,对鲜切苦菊、生菜和紫甘蓝中的假单胞菌进行分离鉴定,筛选得到2株铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginonas)、1株荧光假单胞菌(Pseu...     

基于16S rRNA基因与相关基因序列分析格氏乳球菌亲缘关系

通过PCR扩增7株分离自传统发酵乳制品中的格氏乳球菌的dnaA、rpoB、recA基因,将扩增产物测序,测得的序列构建系统发育树,进行分类鉴定.同时,比较了这三个基因位点与16S rRNA基因揭示的格氏乳球菌种内菌株间以及其与乳酸乳球菌种间的亲缘关系的远近.结果表明,dnaA、rpoB、recA基因能够有效的鉴定出格氏乳球菌,且比16S rRNA基因更清晰地揭示了格氏乳球菌菌株间以及其与乳酸乳球菌种间的亲缘关系,特别是将3个管家基因联合起来,亲缘关系更明确,验证了多个管家基因是研究细菌亲缘关系的有力工具.     

金黄色葡萄球菌生物被膜基因型的分子鉴定

本文选用常见的典型食源性微生物金黄色葡萄球菌,从食品微生物安全角度出发,采用生物被膜菌落结晶紫染色法定量检测58株金黄色葡萄球菌菌株生物被膜的形成能力。并对金黄色葡萄球菌生物被膜相关基因型进行分型研究,包括ica调控子分型(ica A、ica D、ica BC)与粘附特性分型(agr、atl E和aap)研究。结果显示,所有检测菌株均能生成生物被膜,其中3株能生成强粘附性生物被膜,占5.2%;生成中等生物被膜能力菌株有23株,占39.7%;32株金黄色葡萄球菌生成弱粘附生物被膜,占55.2%。实验所用的58株菌株中有48株能扩增出ica A基因,56株扩增出ica D基因,57株扩增出ica BC基因,56株扩增出agr,分别有53株和57株染色体中存在aap和atl E基因。本实验的结论:ica操纵子为金黄色葡萄球菌生物被膜形成所必须,aap基因可能作为促进金黄色葡萄球菌生物被膜形成的一个独立因素。而atl E,agr基因是金黄色葡萄球菌生物被膜粘附过程中形成所必须的调节因子。     

Evolutionary journey and characterisation of a novel pan-gene associated with beer strains of Saccharomyces cerevisiae

The sequencing of over a thousand Saccharomyces cerevisiae genomes revealed a complex pangenome. Over one third of the discovered genes are not present in the S. cerevisiae core genome but instead are often restricted to a subset of yeast isolates and thus may be important for adaptation to specific environmental niches. We refer to these genes as “pan-genes,” being part of the pangenome but not the core genome. Here, we describe the evolutionary journey and characterisation of a novel pan-gene, originally named hypothetical (HYPO) open-reading frame. Phylogenetic analysis reveals that HYPO has been predominantly retained in S. cerevisiae strains associated with brewing but has been repeatedly lost in most other fungal species during evolution. There is also evidence that HYPO was horizontally transferred at least once, from S. cerevisiae to Saccharomyces paradoxus. The phylogenetic analysis of HYPO exemplifies the complexity and intricacy of evolutionary trajectories of genes within the S. cerevisiae pangenome. To examine possible functions for Hypo, we overexpressed a HYPO-GFP fusion protein in both S. cerevisiae and Saccharomyces pastorianus. The protein localised to the plasma membrane where it accumulated initially in distinct foci. Time-lapse fluorescent imaging revealed that when cells are grown in wort, Hypo-gfp fluorescence spreads throughout the membrane during cell growth. The overexpression of Hypo-gfp in S. cerevisiae or S. pastorianus strains did not significantly alter cell growth in medium-containing glucose, maltose, maltotriose, or wort at different concentrations.     

广州市售豆制品转基因成分的检测与分析

为了解广州市市售豆制品的转基因情况,对广州市售散装豆制品和预包装豆制品分别进行抽样检验.采用改良十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法提取大豆DNA,利用核酸定性PCR、实时荧光PCR及环介导等温扩增技术（LAMP）对外源基因CaMV5S,NOS和EPSPS进行检测.调查共抽检豆制品207份,研究结果表明,在检测的159份散装豆制品中,87份检出转基因成分;在48份预包装豆制品中,18份检出转基因成分.散装豆制品无任何食品标签,而预包装豆制品均无转基因食品标识.     

应用基因芯片技术检测食品中金黄色葡萄球菌

采用基因芯片技术对食品中金黄色葡萄球菌进行检测,在检测靶基因扩增后用制备的基因芯片进行杂交反应。应用基因芯片对从食品中分离的金黄色葡萄球菌进行检测,得到金黄色葡萄球菌特异性的杂交图谱,从而达到对食品中金黄色葡萄球菌进行检测的目的。实验证明,制备的基因芯片能够准确、快速检测食品中金黄色葡萄球菌。     

杆菌属蛋白酶基因的结构及其应用

本文介绍了杆菌属中蛋白酶基因的结构及其在工业、科学研究中的广泛应用。杆菌属中的蛋白酶基因具有典型的“ｐｒｅ┐ｐｒｏ┐成熟酶前体”编码特征。其中ｐｒｅ┐序列编码信号肽，ｐｒｏ┐序列编码一段为蛋白酶形成具有生物活性的合适构象所需的肽链。ｐｒｅ┐与ｐｒｏ┐序列都在蛋白酶前体从细胞中分泌出来后被切去。具有相同性质的蛋白酶即使来源于不同菌种，在基因结构上仍具有很高的同源性；而性质不同的蛋白酶，即使来自同一菌种，它们在氨基酸组成，在ｐｒｅ┐、ｐｒｏ┐序列上都存在着很大差异。克隆的蛋白酶基因可用以构建具有蛋白酶高表达活性的基因工程菌，也可被用来研究蛋白酶的结构与性能的相互关系，还可被用于构建具有特殊功能的克隆载体。     

赖氨酸工业生产菌的研究进展

简要地介绍了人工诱变赖氨酸生产菌的研究成果 ,通过 3个实例介绍了基因克隆技术在赖氨酸生产菌研究上的应用 ,介绍阐述了扩增基因对赖氨酸生产的正负面影响     

枯草芽孢杆菌B.subtilisML中性蛋白酶基因的克隆及鉴定

以蛋白酶高产菌株Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＭＬ为供体菌，提取其染色体ＤＮＡ，经限制性内切酶ＢａｍＨＩ完全酶切后，插入枯草杆菌载体ｐＮＱ１２２的相同酶切位点，连接后转化中性碱性蛋白酶基因双缺陷型菌株Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓＤＢ１０４。从含有氯霉素的酪蛋白平板上获得了２０个具有蛋白酶活性的克隆。     

潮州市市售豆制品的转基因成分检测

为了解潮州市区市售豆制品的转基因成分状况,随机购买潮州市区主要市场市售豆制品进行检测与分析。用CTAB法即改良十六烷基三甲基溴化铵,对豆制品的DNA成分进行提取并对提取到的豆制品DNA用核酸蛋白分析仪测量OD值,利用核酸定性聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)、实时定量PCR等技术对外源基因CP4-EPSPS、NOS和Ca MV35S进行检测。对潮州市区主要市场市售豆制品29份样品进行检测,研究结果表明,提取到的豆制品DNA溶液浓度和纯度都较高,OD260 nm/OD280 nm介于1.9～2.1之间,抽取到的DNA质量浓度达到200 ng/μL以上,能够满足检测要求。在检测的豆制品中,有超过一半含有转基因成分。除了大润发超市外,豆制品没有任何食品标签,所有豆制品也没有是否含有转基因成分的标签。转基因食品标识制度的实施仍处于一个初始阶段,国家应该建立起强有力的市场监管机制。因此,我们必须高度重视转基因食品标签制度落实及其相应的市场监管工作。