假单胞菌噬菌体PSJ-1的生物学特性及在冷却羊肉中的初步应用

以产碱假单胞菌为宿主菌,使用点滴法和双层平板法筛选出一株裂解性噬菌体,命名为PSJ-1,研究其生物学特性及在冷却羊肉中的抑菌效果。结果表明,噬菌体PSJ-1噬菌斑透明,直径为1～2 mm;透射电镜观察显示,其具有直径约86 nm的二十面体头部和长约176 nm的尾部,属于长尾噬菌体科(Siphoviridae)。噬菌体PSJ-1的最佳感染复数是0.1,在最佳感染复数下的潜伏期约为20 min,裂解期约为30 min,裂解量为32 PFU/cell。PSJ-1在30～70 ℃、pH2～11的条件下都可以存活,抑菌实验结果表明,PSJ-1可以显著降低冷却羊肉中产碱假单胞菌的数量。     

一株广域pH耐受性微小噬菌体αα的分离、纯化及生理学特性分析

本研究采用双层平板法从污水中分离纯化出一株烈性沙门氏菌噬菌体αα。利用电镜观察其形态特征,通过琼脂糖凝胶电泳分析其核酸组成,并对其生理学特性进行分析,包括一步生长曲线、温度耐受性、pH耐受性、裂解谱、最佳离子浓度和最佳感染复数。结果表明,该烈性噬菌体αα有一个直径为20 nm的头部,无尾部结构,其核酸类型为单链DNA。由此推断,噬菌体αα属于微小噬菌体科。该噬菌体无明显潜伏期,裂解期为60 min,在pH2.10~11.45内和温度40~50 ℃内效价分别保持在106~108和108 pfu/mL左右,最佳感染复数值为10-4,钙镁离子均能促进该噬菌体的液体增殖,其中培养基中含10 mmol/L MgCl₂时促进效果最佳,与未添加离子的对照组相比提高了1.5个log。研究结果为噬菌体的多样性及其应用等方面的研究奠定了基础。     

1株副溶血性弧菌裂解性噬菌体VpJYP2的生物学特性及应用

对1株副溶血性弧菌裂解性噬菌体VpJYP2进行生物学特性分析,探讨VpJYP2对生三文鱼片中副溶血性弧菌的杀菌效果。结果显示,噬菌体VpJYP2的噬菌斑透明,直径为1～2 mm,外有晕圈;透射电镜观察显示,其头部呈二十面体立体结构,直径约64 nm,尾部长约70 nm,尾鞘带宽约20 nm,属于肌尾病毒科(Myoviridae);VpJYP2基因组全长25 363 bp,含有45个开放阅读框,推定为已知功能的有13个;VpJYP2在40～50℃稳定,在pH 4～11稳定,最佳感染复数为0.01,感染宿主菌的潜伏期约为5 min,裂解期约为55 min,裂解量约为45。VpJYP2能显著降低生三文鱼片中副溶血性弧菌的含量。结果表明,VpJYP2具有作为副溶血性弧菌生物杀菌剂的应用潜力。     

食源性大肠杆菌噬菌体的分离及其特性分析

目的从污水样品中分离致病性大肠杆菌的烈性噬菌体,分析其生物学特性,为食品中致病性大肠杆菌的控制提供参考。方法以标准菌株Escherichia coli EPEC(CICC10664)为宿主菌,采用双层平板法,从扬州市各地污水中分离纯化噬菌体,通过透射电镜观察其形态、测定最佳感染复数、一步生长曲线、裂解镨及其对宿主菌生物被膜的影响。结果分离到一株肠致病性大肠杆菌烈性噬菌体,命名为Ec.P01,电镜观察其为肌尾噬菌体,直径约为80 nm,最佳感染复数为0.01,一步生长曲线显示其噬菌体Ec.P 01的平均裂解量为48 PFU/m L,潜伏期约为10 min,裂解期约为90 min,热稳定性较好,对宿主菌生物被膜的形成有明显的抑制作用。结论本研究分离到一株肠致病性大肠杆菌烈性噬菌体,为治疗大肠杆菌感染疾病和治理食品及其环境污染提供新的思路与方法。     

沙门氏菌裂解性噬菌体的分离鉴定及其生物学特性

从家禽屠宰场污水中,以肠炎沙门氏菌ATCC13076和禽沙门氏菌CVCC2184为宿主菌,分离到两株裂解性沙门氏菌噬菌体,分别命名为vB_SenM-PA13076（简称PA13076）和vB_SenM-PC2184（简称PC2184）。同时对这两株噬菌体进行了噬菌斑、噬菌谱系（含耐药菌）、形态学（透射电镜）、遗传物质、酸碱及热稳定性、最佳感染复数、一步生长曲线等生物学特性研究。结果表明：两株噬菌体的裂解空斑均透亮清晰;除对本身宿主菌产生强裂解作用,还裂解其他沙门氏菌,为宽噬菌谱,其中PA13076能强裂解一株耐氨苄青霉素ATCC13076转化菌株（A+13076）,PC2184则能裂解另一株耐氨苄青霉素CVCC2184转化菌株（A+2184）;电镜观察这两株噬菌体均为肌尾病毒科;遗传物质为dsDNA;pH值和温度耐受能力较好;PA13076、PC2184最佳感染复数分别为0.01、10,潜伏期分别为20、30 min,爆发期分别为70、60 min,平均爆发量分别为21、23。     

沙门氏菌噬菌体ΦSHDA-1生物学特性及基因组学初步研究

以鼠伤寒沙门氏菌（CMCC50115）为宿主菌,采用双层平板的方法从污水中分离得到一株裂解性噬菌体,命名为ΦSHDA-1,并对其生物学特性及基因组进行了初步研究。结果表明：ΦSHDA-1 噬菌斑透亮且边缘清晰,无晕圈;透射电镜观察ΦSHDA-1 头部直径为（53±8） nm,尾部长（112±12） nm,属于长尾噬菌体科;最佳感染复数为0.000 01;一步生长曲线结果显示潜伏期为 25 min,爆发期为 30 min,平均裂解量为 36.52 PFU/cell;在 30～50 ℃和pH为2～10 条件下稳定;且裂解曲线表明,其对鼠伤寒沙门氏菌有良好的裂解效果。全基因组测序共得到6个重叠群,总长度为40 523 bp,GC含量为51%。通过Prokka注释,共得到59个编码序列,不含tRNA及rRNA,含有一个裂解酶基因,通过对开放阅读框与CARD 以及VFDB 进行分析,未发现携带耐药基因和毒力基因。     

金黄色葡萄球菌噬菌体的分离筛选

以金黄色葡萄球菌为宿主菌,采用富集法从污水、粪便样品中分离筛选噬菌体,纯化后观察噬菌斑特征,电镜形态,并测定其效价、RTD(RoutineTest Dilution,常规实验稀释度)值,初步分析该噬菌体的宿主谱.结果获得一株对金黄色葡萄球菌敏感的噬菌体,该噬菌体在宿主菌平板上能形成直径1～2mm、边界清晰、圆形透明的噬菌斑,效价是3.2×1010PFU/mL,RTD值为10-3,电镜观察显示此噬菌体由直径约为30nm的多面体头部和约50nm的尾部组成,可以裂解宿主菌及其它2株金黄色葡萄球菌,不能裂解大肠杆菌,鼠伤寒沙门氏菌及痢疾志贺氏菌.本文为深入研究金黄色葡萄球菌噬菌体的生物学特性及其功能提供了依据,为进一步利用噬菌体检测食源性金黄色葡萄球菌、防治由金黄色葡萄球菌引起的疾病提供了理论基础.     

烈性青枯雷尔氏菌噬菌体的分离与生物学特性分析

为采用噬菌体疗法防治烟草青枯病,以烟草青枯菌TB15-15为宿主菌,从土壤中筛选分离得到噬菌体,并采用双层平板法检测了噬菌体的效价、最佳感染复数(MOI)、一步生长曲线以及噬菌体对温度和酸碱度的敏感性。结果表明:从长期植烟田块土壤中分离得到1株青枯雷尔氏菌烈性噬菌体,命名为RS-PⅡ-1。经检测该噬菌体最佳感染复数为1;一步生长曲线显示噬菌体潜伏期为10 min,爆发期持续100 min,裂解量为1 411;该噬菌体40℃活性最高,裂解量也最大,当温度超过40℃时活性逐渐下降,直至在60℃时活性丧失;噬菌体对酸碱均具有一定的耐受能力,pH在4~8范围内噬菌体均有很好裂解活性,当p H小于4或大于8,裂解活性均减小,特别是在p H大于11时,噬菌体裂解活性完全丧失,因此噬菌体RS-PⅡ-1不适合与碱性溶液混合应用。     

1株T1样噬菌体vB_EcoS_IME18的分离鉴定及其受体分析

以大肠杆菌BL21为指示菌分离得到1 株噬菌体vB_EcoS_IME18（IME18）,通过电镜观察噬菌体形态,并测定其最佳感染复数、一步生长曲线、裂解谱和体外杀菌效果;使用Illumina MiSeq测序仪完成噬菌体全基因组测序,利用比较基因组学分析噬菌体基因组特征;通过筛选噬菌体抗性株分析其耐受原因,利用受体基因沉默突变实验、噬菌体斑点实验和噬菌体吸附实验验证噬菌体受体。结果表明,噬菌体IME18具有二十面体头部和非收缩性尾部,属于长尾噬菌体科,Tunavirinae亚科,T1类噬菌体;噬菌体IME18的最佳感染复数为0.01,潜伏期为5 min,裂解期50 min,爆发量高达223 PFU/cell;在体外,噬菌体IME18能在90 min内有效杀死处于对数期的BL21;噬菌体IME18基因组全长50 354 bp,G＋C含量为45.6%;蛋白FhuA、TonB在噬菌体IME18的吸附和侵染过程中发挥重要作用。     

一株沙门氏菌噬菌体SalmpYZU27的生理学特性及其在牛奶和鸡肉中的抑菌作用研究

目的 分离鉴定沙门氏菌裂解性噬菌体,并研究其生理学特性及抑菌能力。方法 以沙门氏菌SalmonellaagonaCICC21586为宿主菌,采用点斑法从农贸市场污水中分离沙门氏菌噬菌体,研究其生理学特性,并测定其在牛奶和鸡肉中的抑菌效果。结果 分离到一株沙门氏菌裂解性噬菌体Salmp YZU27,其具有宽裂解谱,可裂解鼠伤寒沙门氏菌CICC 21483、丙型副伤寒沙门氏菌CICC 21512和肠沙门氏菌2011K-1440染色体血清型N16等12株不同血清型沙门氏菌;最佳感染复数为0.001; pH在4～11时保持高活性;潜伏期为20 min,爆发期为100 min,爆发量为89 PFU/cell;在40～70℃可保持较高活性;噬菌体全基因组测序未检出致病因子和抗性基因;不同感染复数下在LB肉汤中均可抑制宿主菌至少8h,且在牛奶和鸡肉片中对宿主菌均有一定的抑制效果。结论 本研究分离鉴定的沙门氏菌噬菌体SalmpYZU27裂解谱广,酸碱耐受性较好,耐热能力强,爆发量适中,为后续噬菌体抑菌剂的研制提供理论基础。     

溶藻弧菌噬菌体Va2001的分离鉴定及其应用

为了开发水产品中溶藻弧菌的生物清除剂,以溶藻弧菌为宿主菌,从锦州市水产品市场、农贸市场、笔架山海域、超市及葫芦岛市某水产养殖场、鞍山市某养殖场等地方采集了约60份海产品及其养殖环境污水,应用双层平板法从中分离纯化获得1株烈性噬菌体,命名为Va2001。对Va2001的裂解谱、最佳感染复数（optimal multiplicity of infection）、一步生长曲线、温度和pH的稳定性等生物学特征进行了研究,并在牡蛎感染模型中测定了噬菌体对溶藻弧菌的清除效果。结果表明,该噬菌体Va2001属于有尾噬菌体目(Caudovirales),短尾噬菌体科（Podoviridae）,Va2001的裂解谱较窄,裂解率为32%,最佳感染复数为0.0001,潜伏期约为20 min,裂解期为100 min,平均裂解量为274 PFU/cell;在4~60 ℃、pH4~9范围内活性稳定。以牡蛎为感染模型的净化实验结果显示,噬菌体Va2001能够抑制养殖环境中溶藻弧菌的增长,降低牡蛎体内溶藻弧菌的含量;当养殖时间延长至72 h时,实验组中溶藻弧菌的数量降低约2个数量级。本研究的结果表明噬菌体Va2001具有良好的应用前景,可以作为海产品中溶藻弧菌的新型生物清除剂。     

1 株裂解性短尾沙门氏菌噬菌体T139的生物学特性及其对牛奶和牛肉的抑菌作用

采用双层平板的方法以鼠伤寒沙门氏菌（ATCC 13311）为宿主菌,从污水中分离得到1 株裂解性噬菌体,命名为T139,研究其生物学特性及其在牛奶和牛肉样品中的抑菌作用。结果表明：噬菌体T139的噬菌斑透亮清晰;能裂解宿主菌及其他沙门氏菌,为宽宿主谱;电镜观察噬菌体T139属于短尾噬菌体科,头部直径为（43±1）nm,尾部长（11±0.6）nm;最佳感染复数（multiplicity of infection,MOI）为0.001;最佳吸附速率为66%;一步生长曲线结果显示潜伏期为5?min,爆发期为60?min,平均裂解量为54.54?PFU/cell;在30～50?℃和pH?4～12条件下稳定且对体外培养的鼠伤寒沙门氏菌有良好的裂解效果。噬菌体T139对牛奶中鼠伤寒沙门氏菌的抑菌效果为：在4?℃无显著效果,在25?℃条件下MOI=10和MOI=100时抑菌效果极其显著,宿主菌数量分别下降4.32（lg（CFU/mL））和4.27（lg（CFU/mL））;噬菌体T139对牛肉中鼠伤寒沙门氏菌的抑菌效果为：在4?℃条件下,MOI=10时无显著效果,在MOI=100时宿主菌数量下降0.66（lg（CFU/mL））,在25?℃条件下MOI=10和MOI=100时宿主菌数量分别下降了0.77（lg（CFU/mL））和1.16（lg（CFU/mL））,表明噬菌体T139对牛奶和牛肉中鼠伤寒沙门氏菌有良好抑制作用。     

Pseudomonas helleri噬菌体PrH-181的分离及生物特性分析

Pseudomonas helleri为水产品冷藏过程中的优势腐败菌。为筛选得到能裂解Pseudomonas helleri的烈性噬菌体,采用双层平板法,从采集自不同省份的70个污水和土壤样品中,分离纯化得到了1株裂解活性较强的噬菌体PrH-181。形态学和生化特征实验结果显示,该噬菌体壳体为无尾二十面体结构,对氯仿不敏感,且核酸类型鉴定为RNA。根据ICTV对病毒的分类标准,PrH-181可鉴定为光滑病毒科噬菌体。该噬菌体最佳感染复数(MOI)为0.01,一步生长曲线显示其潜伏期为20 min,爆发期为180 min,裂解量为584。该噬菌体的耐热性良好;最佳生长pH为6.0~7.0,在pH6.0~9.0时其存活率可高达94.1%~98.8%,耐碱力较耐酸力强。     

一株短乳杆菌烈性噬菌体的分离鉴定与生化特性研究

短乳杆菌是应用于食品发酵中的重要菌株，噬菌体污染是导致发酵失败的主要因素之一，对食品发酵生产有着巨大的危害。从发酵泡菜水中分离纯化短乳杆菌烈性噬菌体，研究其生物学性质。利用双层平板法分离和纯化噬菌体，通过负染色电镜形态和核酸类型鉴定。采用核酸内切酶处理后电泳鉴定核酸类型、基因组大小和包装机制。通过双层平板法测定噬菌体效价，实验测定最佳感染复数、一步生长曲线、温度和pH等物理化学因素及常见消毒剂对其存活的影响。分离纯化到1株烈性噬菌体，命名为φB23。其由多面体结构的头部和弯曲的长尾构成，φB23基因组为双链DNA,大小约为52.4 kb,包装机制为黏末端连接。最佳感染复数为0.001,潜伏期为30 min,裂解期为90 min,裂解量为(103.2±9.0) pfu/cell。常用的巴氏灭菌温度为63℃和72℃,分别处理10 min和5 min能较好地灭活；在pH 3.0～8.0保持稳定，75%乙醇处理10 min能使其丧失活性，500 mg/L次氯酸钠处理5 min能完全灭活。φB23鉴定为尾噬菌体目(Caudovirales)长尾噬菌体科(Siphoviridae)的噬菌体，表征并...     

1 株金黄色葡萄球菌烈性噬菌体的生物学特性及其裂解效果

以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）为宿主菌从奶牛养殖场污水中分离到1 株烈性噬菌体P65。透射电镜表明，噬菌体P65头部呈多面体结构，属于有尾噬菌体目长尾噬菌体科。噬菌体P65最佳感染复数为0.01，一步生长曲线显示，噬菌体P65潜伏期为10 min，裂解周期为90 min，裂解量为35.46 PFU/cell。在pH 4～10和温度30～45 ℃条件下具有稳定的裂解活性。紫外线照射70 min后，噬菌体P65效价由1.91×108 PFU/mL降至2.65×104 PFU/mL。经噬菌体处理48 h后，菌株MRSA 2和MRSA 24的生物被膜清除率分别为91.3%和92.2%。在25 ℃条件下，噬菌体P65在牛奶和牛肉细菌污染模型中有一定的抑菌效果。本研究表明噬菌体P65具有较宽的宿主谱和稳定的裂解杀菌能力，在清除生物被膜和食品抗菌方面有一定的运用潜能。     

烈性噬菌体vB_VpP_AC2的分离鉴定及生物学特性分析

该研究从水产市场污水中分离纯化副溶血性弧菌噬菌体，并对其中一株噬菌体vB_VpP_AC2（AC2）进行分离鉴定、基因组及部分生物学特性分析，探究该噬菌体作为副溶血性弧菌生防制剂的潜力。噬菌体AC2的噬菌斑透明且边缘清晰，透明部分的直径约为1.12 mm，无可见晕圈。噬菌体AC2的全基因组序列长44 270 bp，鸟嘌呤-胞嘧啶（GC）含量为49.30%，共预测到55个假定的开放阅读框，其中37个与编码已知功能蛋白质的基因相似（占67.27%），包括一个类似holin功能的蛋白（AC2_gp43，UTQ72417.1），该功能蛋白首次在Maculvirus属中被表征。经蛋白网络与末端酶系统发育树分析鉴定，噬菌体AC2属于自转录病毒科（Autograohiviridae），Maculvirus属，与噬菌体vB_VpaP_MGD1的ANIb值最高，为95.62%。在生物学特性方面，噬菌体AC2能够裂解30.77%的受测菌株，其最佳感染复数为0.001~0.1，一步生长曲线显示AC2的潜伏期为20 min，裂解期为35 min，裂解量为143 pfu/cell。总之，噬菌体AC2的分离鉴定不仅可为相关功能蛋白的研究提供参考，还可为水产食品安全提供较高应用价值的噬菌体资源。     

一株空肠弯曲菌噬菌体vB＿Cj＿QDYZ的生物学特性和全基因组分析

空肠弯曲菌是一种重要的人畜共患病原菌，能引起人类细菌性腹痛腹泻。随着空肠弯曲菌耐药性日益严重，亟需筛选能高效裂解空肠弯曲菌的噬菌体，为应用噬菌体防治空肠弯曲菌污染提供理论基础。该研究分离一株能高效裂解空肠弯曲菌的噬菌体，将其命名为vB＿Cj＿QDYZ。电镜结果显示该噬菌体有一个正二十面体的头部(直径约100.81 nm)和一条可伸缩的尾部(长度约65.90 nm)。噬菌体vB＿Cj＿QDYZ的温度耐受范围为30～60℃,在pH值为3～12时效价较稳定。噬菌体的最佳感染复数为0.01,一步生长曲线表明，噬菌体的潜伏期是60 min,裂解期是150 min,爆发量是45 PFU/cell。噬菌体的基因组全长为130 627 bp, G+C含量为26%,共有165个开放阅读框，3个tRNA。基因组中不含毒力基因、抗生素耐药基因及过敏原基因。比较基因组学表明噬菌体vB＿Cj＿QDYZ可能是来自Eucampyvirinae亚科，Fletchervirus属的新成员。噬菌体vB＿Cj＿QDYZ是一株裂解能力较强、热稳定性和pH稳定性良好的空肠弯曲菌噬菌体，具有开发为新型空肠弯曲菌抗菌剂的潜力。     

荧光假单胞菌噬菌体KS461-2的分离及其生物学特性研究

从2-酮基-D-葡萄糖酸产生菌荧光假单胞菌A46异常发酵液中分离得到1种噬菌体,将其命名为KS461-2。电镜观察表明,噬菌体KS461-2呈蝌蚪状。根据ICTV对病毒的分类标准,噬菌体KS461-2属长尾噬菌体科,为烈性噬菌体。噬菌体KS461-2对宿主菌的最佳感染复数为0．01,温度和pH对其稳定性具有显著的影响。一步生长曲线显示,噬菌体KS461-2的潜伏期约30min,裂解期约135min,裂解量为24。SDS-PAGE显示,噬菌体KS461-2有5种主要的结构蛋白,其分子量分别为66．0、61．0、42．5、34．7和14．4kDa。     

一株地衣芽孢杆菌噬菌体的分离及其性质分析

从生产碱性蛋白酶的车间附近的下水道淤泥和后处理车间空气中分离得到了一株噬菌体。电镜观察表明该噬菌体有多面体的头部和细长的尾部组成,有着长尾病毒科噬菌体的形态特征。在供试菌种中,该噬菌体以地衣芽孢杆菌为宿主,对其生理特性研究发现,该噬菌体在pH 5-10之间有着很好的稳定性,在高温下有一定的稳定性,且金属离子可以促进其对宿主菌的侵染。根据实验结果绘制出噬菌体的一步生长曲线,可知感染宿主菌的潜伏期约为40 min,爆发期约为110 min。对噬菌体核酸性质的分析发现,其遗传物质为双链线状DNA,其分子量大约为36 kb。     

副溶血性弧菌噬菌体的分离及其在即食虾中的应用

为了研究噬菌体作为天然生物防控剂应用于食品中的前景,本实验从水产品市场的污水中采用双层平板法分离纯化出一株烈性副溶血性弧菌噬菌体SHOU24,测定其生理特性,并探讨其在即食虾中的抑菌效果。结果表明:该噬菌体只对含有毒力基因tdh的副溶血性弧菌有裂解能力。电镜观察其形态表明该噬菌体属于长尾噬菌体科。SHOU24的最适p H为7~8。在50℃温度以下,存活率很高。抑菌实验结果表明该噬菌体在常温条件下对即食虾中副溶血性弧菌的生长具有良好的抑制作用,能使副溶血性弧菌的菌浓度下降1log CFU/g。本研究为副溶血性弧菌噬菌体SHOU24作为抑菌剂应用于食品中提供了一定的理论基础。