酶联免疫法检测克伦特罗残留量的质量控制

对酶联免疫法检测克伦特罗残留量的质量控制方法进行了探讨.应用酶联免疫法检测克伦特罗残留量可从克伦特罗试剂盒的检测下限、校正曲线的线性检验、精密度验证、以及添加克伦特罗标准品做回收率试验等方面来进行质量控制.结果表明,本方法的样品检测下限(定性检出)为0.03ng/mL,定量检测下限为0.1ng/mL;克伦特罗标准校正曲线Y=-0.1884X 0.4159在0.1～8.1ng/mL范围内具有良好的线性相关关系,相关系数为-0.9913;克伦特罗标准液的浓度分别为0.1、0.3、0.9、2.7、8.1ng/mL时,变异系数分别为3.7%、5.3%、9.7%、9.2%、8.7%,在3.7%～9.7%的范围内;当克伦特罗标准品添加水平分别为0.5、1.0ng/mL时,平均回收率分别为84%、90%,在80%～100%的范围内.上述指标均符合残留分析质量控制的要求.     

进口葡萄酒中赭曲霉毒素A的含量分析

为了解进口葡萄酒中赭曲霉毒素A的含量和污染状况,本研究建立了无需净化、浓缩,直接进样,采用液相色谱-串联质谱联用法(LC-MS/MS)测定葡萄酒中赭曲霉毒素A的方法。赭曲霉毒素A空白基质标准溶液在1.0～20.0 ng/mL浓度范围内线性良好,方法检测限达到0.05 ng/mL,添加浓度为2.0 ng/mL质控样品的回收率为98.7%～113.2%,精密度<5.7%。应用该方法测定了84个进口葡萄酒样品中赭曲霉毒素A的含量,结果表明,赭曲霉毒素的检出率为100%,含量为0.14～1.10 ng/mL,平均含量为0.32 ng/mL。     

乳化/破乳法-气相色谱串联质谱法测定牛奶中12种亚硝胺残留

基于乳化/破乳法,本研究建立了一种气相色谱-串联质谱法定量检测牛奶中12种亚硝胺化合物含量的方法。对滤膜种类、提取剂种类以及提取次数等前处理条件的优化结果如下：滤膜种类为尼龙,提取剂为乙腈,提取次数为2次。样品经乙腈提取,蛋白沉淀,乳化/破乳法除脂后,采用HP-INNOWAX色谱柱分离,采用多反应离子监测（MRM）模式,内标法定量测定亚硝胺含量。结果表明,N-亚硝基吡咯烷（NPYR）的线性范围为2～100 ng/mL,其余亚硝胺化合物在1～100 ng/mL的浓度范围内呈现良好的线性关系,决定系数均大于0.995。在高、中、低3个水平加标试验中,回收率在90.90%～114.30%之间,日内精密度在1.76%～7.62%之间,日间精密度在2.75%～7.71%之间。NPYR的定量限为4μg/kg,其余化合物的定量限均为2μg/kg。方法的精密度与准确度良好,可满足牛奶中12种亚硝胺的准确定量需求。实际样品检测结果显示,6组牛奶样品中均检出了N-亚硝基二苯基胺（NDPhA）,含量在4.29～6.67μg/kg之间。     

高效液相色谱-串联质谱法测定3种水产品中的T-2毒素与HT-2毒素

建立高效液相色谱-串联质谱定量快速检测罗非鱼、南美白对虾和黄金贝中的T-2毒素与HT-2毒素方法。以10 mL乙酸乙酯作为提取溶剂,振荡提取,无水硫酸钠除水,定量移取5 mL提取液氮气吹干后用1 mL含有0.1%甲酸的甲醇-5 mmol/L乙酸铵溶液（3∶7,V/V）复溶,正己烷脱脂净化,基质匹配法外标定量。3 种水产品中T-2毒素和HT-2毒素的检出限分别为2 μg/kg和4 μg/kg。T-2毒素质量浓度为2～100 ng/mL,HT-2毒素质量浓度为4～200 ng/mL,范围内线性良好。在3 种样本中进行3 个水平添加实验（n=6）,T-2毒素回收率为84.3%～109.9%,HT-2毒素的回收率为90.9%～103.2%。T-2毒素的相对标准偏差为2.0%～8.7%,HT-2毒素的相对标准偏差为2.6%～10.6%。本方法简便快速、准确度好、精密度高,适用于3 种代表性水产品中T-2与HT-2毒素的同时检测。     

基于适配体杂交链式反应检测郫县豆瓣中黄曲霉毒素B1

建立一种基于AFB1适配体杂交链式反应的荧光检测方法。研究cDNA和HP1、HP2浓度、杂交孵育时间、氧化石墨烯质量浓度对该方法性能的影响,确定最优条件为cDNA浓度50 nmol/L,HP1、HP2浓度60 nmol/L,杂交孵育时间60 min,氧化石墨烯质量浓度50μg/mL。在该条件下,本方法的线性范围为2～60 ng/mL,检测限为1.84 ng/mL,在郫县豆瓣中的加标回收率为85.73%～94.25%。该方法用于12种不同品牌的郫县豆瓣的检测,与国标中的酶联免疫吸附试剂盒检测结果无显著差异(P>0.05)。本研究建立的检测方法能简单、快速、灵敏的检测郫县豆瓣中的AFB1含量,具有用于复杂基质样品中AFB1快速检测应用潜力。     

食品中四环素类残留的酶联免疫检测试剂盒的研制

目的：基于定量检测动物源性食品中四环素类抗生素的残留量,开发研制四环素类抗生素竞争酶联免疫(ELISA)检测试剂盒。方法：采用杂交瘤技术,筛选并克隆稳定分泌抗四环素(CEL)的杂交瘤细胞株,利用免疫BALB/c 小白鼠制备抗四环素单克隆抗体。结果：logit/log 拟合标准曲线为y= － 2.3x ＋ 2.79,相关系数r=0.9971,线性检测范围为0.05～4.05ng/mL,半数抑制剂量(IC50)为0.293ng/mL,灵敏度为0.05ng/mL,检测限为3～5ng/mL;组织、牛奶、蜂蜜的添加回收率分别为(90 ± 10)%、(85 ± 10)%、(90 ± 10)%;平均批内和批间变异系数均小于15%;四环素与金霉素等同类抗生素的交叉反应率大于60%,与其他类抗生素无交叉反应;此试剂盒在4℃可保存180d 以上。结论：建立的试剂盒是符合技术指标的要求,可用于动物源性食品中四环素类抗生素残留的定量检测。     

固相萃取-同位素稀释液相色谱-串联质谱法测定橄榄油中4种交链孢霉毒素含量及其分布状况

目的：建立固相萃取-同位素稀释液相色谱-串联质谱法测定橄榄油中4种交链孢霉毒素含量的方法并描述其在橄榄油中的分布状况。方法：将橄榄油混匀后取5 g(精确至0.001 g),经乙腈-磷酸二氢钠溶液混合溶液提取，固相萃取柱净化，收集净化液经水浴氮吹浓缩后，采用超高效液相色谱质谱仪测定，内标法定量。结果：交链孢菌酮酸(tenuazonic acid, TeA)在0～50 ng/mL、交链孢酚(alternariol, AOH)在0～20 ng/mL、腾毒素(tentoxin, TEN)在0～10 ng/mL、交链孢酚单甲醚(alternariol methyl ether, AME)在0～2 ng/mL范围内线性良好(R>0.99)。TeA、AOH、TEN、AME的检出限在0.20～2.00μg/kg范围之间。4种生物毒素加标回收率为92.25%～124.66%,精密度范围3.79%～10.58%,表明本方法样本检测量小、灵敏度高、准确度高、精密度高，重现性好，是检测橄榄油中交链孢霉毒素的理想方法。结论：橄榄油普遍受到交链孢霉毒素污染，检出率93.33%(28/30),AME毒素是橄榄...     

化学发光酶联免疫法检测苏丹红Ⅰ

为检测食品中苏丹红Ⅰ残留,建立间接竞争化学发光酶联免疫分析（chemi luminescent enzymeimmunoassay,CLEIA）法。通过优化包被抗原中本抗原与载体物质的量比、包被抗原质量浓度、抗体稀释比例,建立竞争抑制曲线。线性范围为0.156～5 ng/mL,最低检测限为0.078 9 ng/mL,IC50为0.679 ng/mL。CLEIA回收率为75.08%～112.18%,变异系数为8.89%～15.61%;通过与酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法进行比较,在相同抗原抗体质量浓度条件下,CLEIA法测定的IC50较ELISA方法降低30%,具有较高的灵敏度。     

UPLC-Q/Orbitrap MS法检测水产品中12种抗生素残留

试验旨在采用超高效液相色谱-四极杆/轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q/Orbitrap MS)建立水产品中7种大环内酯类和5种四环素类抗生素类药物的快速检测方法。样品采用80%乙腈Na_2EDTA-Mc Ilvaine溶液提取, Hypersil Gold C_(18)色谱柱(150 mm×2.1 mm, 3μm)分离,使用0.1%甲酸水溶液和乙腈进行梯度洗脱,流速0.2 mL/min,柱温30℃,正离子模式扫描。结果表明, 12种抗生素在2.0～50.0 ng/mL范围内具有良好的线性关系(R~20.996),各组分检出限在0.073～17μg/kg之间,定量限在0.24～55μg/kg之间。回收率在83.1%～95.7%之间,精密度在0.8%～5.6%之间。该方法简单高效、灵敏度高,为水产品中大环内酯类和四环素类抗生素检测提供方法参考。     

超高效液相色谱-串联质谱法检测畜肉及内脏中苯甲酸和马尿酸残留

建立超高效液相色谱-串联质谱技术对畜肉及内脏中苯甲酸和马尿酸进行检测。通过加标回收优化提取溶剂和净化方式,最终选择纯甲醇提取,经PRiME HLB固相萃取小柱净化,采用多反应监测模式检测,外标法定量。结果表明：苯甲酸在20～1 000 ng/mL、马尿酸在4～200 ng/mL质量浓度范围内线性关系良好,线性相关系数均大于0.99,检出限分别为12.5?μg/kg和2.5?μg/kg,定量限分别为50?μg/kg和10?μg/kg;在3个添加水平的回收率在70.5%～99.7%之间,精密度相对标准偏差在0.3%～7.1%之间（n=6）;方法具有良好的重复性和日内、日间稳定性,相对标准偏差不大于7.2%。该方法前处理简单、准确灵敏、回收率好,可为畜肉及内脏中苯甲酸和马尿酸残留量的监管提供技术支持。     

抗呋喃唑酮单克隆抗体的制备及其应用

为实现呋喃唑酮（furazolidone,FZD）的快速定量检测,本研究制备了抗FZD全抗原的单克隆抗体,建立了抗FZD的单克隆抗体酶联免疫检测方法。结果表明,FZD单克隆抗体在质量浓度为10～500 ng/mL范围具有较好的线性,IC50值为0.06 μg/mL,最低检测限为6.92 ng/mL,对于其他硝基呋喃类抗生素及其代谢物均不存在交叉反应。该方法重现性较好,平均误差为6.54%,回收率为76.84%～88.31%。     

高效液相色谱法测定发芽糙米中γ-氨基丁酸含量

建立一种简单快速的邻苯二甲醛柱前衍生,紫外检测反相高效液相色谱测定发芽糙米中γ-氨基丁酸含量的方法。色谱柱为Intertsil ODS-C18柱,梯度洗脱,紫外吸收波长为332 nm,线性方程为Y=9.26×106X+2 093.79,r=0.999 5,方法线性范围为0.005~0.06 mg/mL,检出限为2.927 ng,峰面积的相对标准偏差为0.57%,回收率范围为98.85%~100.94%。该方法易于操作、反应时间短、精密度高。用该方法测定了20种发芽糙米中γ-氨基丁酸含量(22.68~88.36 mg/100 g,以干质量计),结果表明,发芽糙米中γ-氨基丁酸含量随品种不同而不同,其中中嘉早17和浙福802明显高于其他品种(P0.05),故在实际生产中可尝试作为发芽糙米副产品的原料。     

基于不同半抗原的呋喃唑酮代谢物免疫检测方法的建立与比较

为实现呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-恶唑烷酮（3-amino-2-oxazolidinone,AOZ）的快速定量检测,制备AOZ- 牛血清蛋白单克隆抗体,建立2 种分别基于抗3-（4-羧基苯亚甲基）-氨基-2-恶唑烷酮（CPAOZ）、抗AOZ的单克 隆抗体酶联免疫检测试剂盒。CPAOZ检测试剂盒在1.0～100.0 ng/mL范围具有较好的线性,IC50值为14.6 ng/mL, 检测限为6.56 ng/mL,回收率为97.6%～101.3%;AOZ检测试剂盒在0.5～12.5 ng/mL范围具有良好线性,IC50值为 3.9 ng/mL,检测限为0.45 ng/mL,回收率为94.1%～97.4%。这2 种检测试剂盒对于其他硝基呋喃类抗生素及其代谢 物均不存在交叉反应。从经济、方便、快速、灵敏等因素来考虑,后者更具有发展前景。     

牛初乳中免疫球蛋白G双抗夹心ELISA检测方法的建立

将牛免疫球蛋白G（immunoglobulin G,IgG）作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、筛选获得分泌抗牛IgG单克隆抗体的细胞株。制备小鼠腹水抗体,进一步纯化获得抗牛IgG单克隆抗体。建立双抗夹心酶联免疫吸附法检测牛初乳中IgG质量浓度,该方法在7.8～1 000 ng/mL范围内有良好的线性关系,最低检出限为7.06 ng/mL,批内变异系数为4.52%,批间变异系数为4.94%,回收率为91.85%～102.45%。此法操作简便、准确度高、稳定性好,可用于实际牛初乳样品的快速检测。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇模拟表位的2 种融合蛋白的表达及其在无毒酶联免疫吸附方法中的应用

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol,DON）的模拟表位（CDON）,是从噬菌体展示随机肽库中淘 选出来的七肽,可模拟DON与抗DON抗体结合。为了在酶联免疫吸附方法（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）中用重组蛋白替代DON偶联物,以期开发出能代替偶联DON人工抗原的无毒检测DON的ELISA方法,通 过构建重组表达载体pGEX-CDON和pC89S4-CDON,并在大肠杆菌表达系统中分别表达和纯化GST-CDON和pⅧ- CDON融合蛋白,比较测定2 种融合蛋白与抗DON抗体的结合效果。ELISA方阵滴定结果显示：纯化的融合蛋白 具有良好的反应原性。在间接竞争性ELISA中,当以融合蛋白GST-CDON为包被抗原时,检测限为31 ng/mL,线 性范围为31～500 ng/mL,IC50为194 ng/mL,加标回收率为54.1%～65.4%,变异系数为6.28%～13.37%;当以融合 蛋白pⅧ-CDON为包被抗原时,检测限为15 ng/mL,线性范围为15～500 ng/mL,IC50为94 ng/mL,加标回收率为 81.7%～89.0%,变异系数为3.15%～7.55%。     

双酚A单克隆抗体的制备及酶联免疫分析方法的建立

采用活泼酯法将双酚A的结构类似物双酚酸与载体蛋白偶联制备人工抗原,用制备的人工抗原免疫BALB/c小鼠,采用聚乙二醇法进行细胞融合制备双酚A单克隆抗体,成功获得一株分泌抗双酚A单克隆抗体的细胞株3H1,经鉴定抗体属于IgG1亚型,轻链为κ,并建立了间接竞争酶联免疫分析法。线性范围为1～50 ng/mL,最低检测限为0.43 ng/mL,半数抑制浓度为6.56 ng/mL。回收率为82.83%～101.94%,变异系数为2.94%～12.95%。该方法具有较高的灵敏度和特异性,具有良好的应用前景。     

顶空固相微萃取联合气相色谱-质谱检测葡萄酒中2,4,6-三氯苯甲醚

利用响应面法优化采用顶空固相微萃取联合气相色谱-质谱技术检测葡萄酒中2,4,6-三氯苯甲醚（2,4,6-trichloroanisole,TCA）。对萃取头进行了选择,并优化固相微萃取参数：样品体积、萃取温度、平衡时间和萃取时间等对TCA萃取效果的影响。结果表明,用聚二甲基硅氧烷/二乙烯基苯（65 μm）萃取头进行TCA萃取的最佳条件：样品9.8 mL、2 g NaCl、33 ℃平衡10 min、萃取90 min进行气相色谱-质谱分析,以TCA-d5为内标物进行定量。该方法的相关系数R2为0.999 9,重复性的相对标准偏差为1.03%,加标回收率范围在95.7%～106.1%之间,检出限和定量限分别为0.3 ng/L和1 ng/L。检测7 种市售葡萄酒产品的TCA含量在0～7.6 ng/L之间,干白葡萄酒中TCA含量低于干红葡萄酒。该方法操作简单、可靠,适用于葡萄酒中TCA的测定。     

液相色谱-质谱法测定火锅汤料中的罂粟碱

采用高效液相色谱-三重四极杆串联质谱,多反应检测模式定量,建立火锅汤料中5 种罂粟碱残留的分析方法,优化了样品的前处理过程、色谱条件、质谱参数等条件。吗啡、可待因、蒂巴因、罂粟碱、那可丁的检出限分别为2.4、2.4、1.2、0.048、0.024 ng/mL,定量限分别为8.0、8.0、4.0、0.16、0.08 ng/mL,加标回收率介于81.3%～103.5%,相对标准偏差介于3.02%～4.55%。本方法具有操作简单、准确、灵敏度高等优点,可对火锅汤料中是否添加了罂粟壳进行快速检测分析。     

高效液相色谱-串联质谱检测保健酒中非法添加物艾地那非

目的：采用高效液相色谱-串联质谱（high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS）法,建立保健酒中非法添加物艾地那非的检测方法。方法：使用Agilent RRDH Eclipse-plus C18色谱柱（2.1 mm×100 mm,1.8 μm）,以0.1%甲酸-乙腈溶液为流动相A、0.1%乙酸-20 mmol/L乙酸铵溶液为流动相B进行梯度洗脱。通过HPLC-MS/MS系统中全扫描模式对艾地那非进行定性分析,多反应监测模式对艾地那非进行定量分析。结果：该方法线性r2大于0.99,精密度相对标准偏差小于3%,不同质量浓度样品平均回收率为97.31%～100.66%,检出限为0.6 ng/mL,定量限为1.6 ng/mL。结论：此方法测定准确、灵敏度高、分离度高,可用于保健酒中非法添加物艾地那非的筛选和检测。