辽西传统发酵食品中抗单增李斯特菌乳酸菌的筛选与鉴定

目的:从传统辽西发酵食品中筛选对单增李斯特菌具有良好拮抗作用的乳酸菌菌株。方法:采用双层琼脂扩散法筛选乳酸菌优良菌株。采用酸性实验、热处理实验、蛋白酶敏感性实验分析拮抗特性,利用生长曲线分析拮抗物质形成过程,扫描电镜分析细胞结构完整性。通过生理生化实验和16S rRNA序列进行菌株鉴定。结果:从13株乳酸菌中筛选出1株抗单增李斯特菌活性较强的菌株DL3,抗菌物质存在于无细胞上清液中。经胃蛋白酶处理后抑菌活性丧失了27.50%,胰蛋白酶和木瓜蛋白酶可使抑菌活性完全丧失,经121℃处理15 min后,抑菌活性仍保留96.88%,在p H2.5~6.5时具有抑菌活性,表明菌株DL3产生的抑菌物质可能为细菌素。添加菌株DL3无细胞上清液可使单增李斯特菌的生长曲线延迟期和稳定期延长4 h,显著地缩短了其生长期。扫描电镜结果表明经菌株DL3无细胞上清液处理的单增李斯特菌菌体变小且边缘模糊不清,其中一端细胞原生质发生泄漏。经鉴定菌株DL3为植物乳杆菌。结论:获得1株对单增李斯特菌有较强拮抗活性的植物乳杆菌DL3,该菌的拮抗活性物质可能为细菌素,可作为食品防腐剂潜在的应用菌株。      

发酵面团中抗单增李斯特氏菌乳酸菌的筛选及鉴定

以单增李斯特氏菌为指示菌,通过牛津杯双层平板法对从发酵面团样品中分离出的54株乳酸菌进行抑菌试验。在排除有机酸,过氧化氢的干扰后,其中1株乳酸菌的发酵上清液对单增李斯特氏菌仍然表现出明显的抑制作用。其抑菌活性在酸性条件下较强,在加入蛋白酶K和胰蛋白酶以及100℃以上热处理时明显下降甚至消失,说明其代谢产物中含有蛋白质类抑菌物质,是一类细菌素。经Trcine-SDS-PAGE试验分析该细菌素分子质量为25 kDa;经过生理生化试验及16S rDNA序列同源性分析,该菌被鉴定为Lactobacillus curvatus。     

产抗李斯特菌细菌素乳酸菌的筛选与鉴定

从51株肠球菌中筛选出2株具有抑制李斯特菌活性的肠球菌菌株:肠球菌KLDS6.0610和肠球菌KLDS6.0611。在排除有机酸和过氧化氢的干扰后,2株菌的无细胞发酵上清液对指示菌还有强烈的抑制作用。经蛋白酶K处理后,抑菌活性丧失,证明无细胞发酵上清液中含有蛋白性质的抑菌物质,即细菌素。经菌体形态和16SrDNA序列同源性分析鉴定2株肠球菌均为粪肠球菌。     

马奶酒中抗单增李斯特氏菌细菌素产生菌的筛选及鉴定

从内蒙古传统乳制品酸马奶酒中分离出144株乳酸菌,通过双层琼脂平板扩散法筛选出具有明显抑菌作用的菌株.在排除有机酸、H2O2等的干扰后,其中1株乳酸菌的发酵上清液对受试的单核细胞增生李斯特氏菌表现出明显抑制作用;进一步硫酸铵沉淀、透析及浓缩处理后,其抑菌活性显著增强,说明其代谢产物中含有蛋白质类抑菌物质,可能是细菌素.经生理、生化试验和形态学观察,将该菌株鉴定为屎肠球菌(Enterococcus faecium).     

新疆传统香肠中抗李斯特菌乳酸菌的分离

香肠在贮藏末期,乳酸菌检出量很高,其中还有一些具有抑制其他微生物的乳酸菌。在北疆市场上抽到8批样品,真空包装后,将其贮藏在4℃条件下,分别在贮藏前后检测其理化指标。各样品的pH值、水分活度和盐分基本一致;香肠中微生物的生长也比较一致,初期乳酸菌水平比较低(102CFU/g),贮藏末期,乳杆菌占多数(107CFU/g),肠杆菌相对较低(105CFU/g)。这表明,乳酸菌具有相对的竞争优势。其中,贮藏前后,样品中均没有检出李斯特菌。抑菌圈试验发现,分离出的乳酸菌中有41%对李斯特菌有抑菌特性,经过进一步试验,发现大部分的乳酸菌不具有产细菌素能力,但这些乳酸菌仍然具有竞争优势,对于香肠的贮藏仍有积极的作用。     

对单增李斯特菌有抑制作用的乳酸菌的筛选鉴定及其细菌素的研究

本文采用双层平板法从中国东北地区发酵酸黄瓜中进行产抑单核增生李斯特氏菌细菌素的乳酸菌的筛选和鉴定,对其产生的细菌素进行了分离纯化、分子量测定及稳定性研究。在排除有机酸和过氧化氢的影响后,从东北发酵酸黄瓜中筛选到一株对单核增生李斯特氏菌仍有抑制作用的乳酸菌ZLG85,酶解实验发现该抑菌物质可完全被胃蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋白酶降解,确定该抑菌物质为细菌素。经形态和生理生化实验初步鉴定该菌株为明串株菌属;16S rDNA序列同源性分析将乳酸菌ZLG85鉴定为肠膜明串珠菌肠膜亚种。理化分析表明该细菌素的热稳定性很强,121℃处理30 min后相对抗菌活性仍为93.77%,pH值在2.0~10.0范围内处理4 h后相对抗菌活性在80%以上。N-羟甲基甲基甘氨酸-SDS-PAGE电泳确定肠膜明串珠菌素ZLG85的分子质量约为2.5 kDa。因此,肠膜明串珠菌素ZLG85是一种稳定性强的新型抗李斯特氏菌的乳酸菌细菌素。     

哈萨克族传统发酵食品中产GABA乳酸菌筛选及鉴定

γ-氨基丁酸是一种抑制性神经递质,具有调节血压、保护肝脏、改善脑机能、抗焦虑等重要生理功能。采用薄层层析定性分析和高效液相定量分析方法,对从哈萨克族传统发酵食品中分离出的22株乳酸菌进行产GABA能力的研究。通过筛选共获得3株产γ-氨基丁酸的乳酸菌,其中菌株KCH1产量最高,达329.81 mg/L。利用基于形态学观察、生理生化特征分析及16S r DNA序列系统发育分析的微生物分类鉴定技术,将其鉴定为乳酸乳球菌Lactococcus lactis,并保藏于中国工业菌种保藏管理中心(CICC),保藏号为CICC 6291。     

乳粉中单增李斯特氏菌的检测分离鉴定

目的:对临夏回族自治州市售不同品牌的乳粉进行随机抽样检测,以确保该地区乳粉的食品安全。方法:通过一系列增菌措施、分离纯化后,根据菌株在平板以及斜面培养基上的菌落特征,与对照菌株进行对照,结合在显微镜下的菌体细胞显微形态及生理生化试验结果进行判定。结果:采集的12份样品中标号为L的样品中筛选出一株疑似菌L,最终判定为单增李斯特菌。结论:确定其中一份样品L已被单增李斯特菌污染。     

单增李斯特氏菌MALDI-TOF-MS鉴定与分型研究

为建立单增李斯特氏菌的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)快速鉴定与分型方法,实验收集37株单增李斯特氏菌分离株,应用MALDI-TOF-MS采集图谱,获取独特的蛋白质指纹图谱,汇总成标准图谱,建立单增李斯特氏菌鉴定数据库。采用单增李斯特氏菌标准菌株进行验证,表明鉴定结果的可信度很高。在数据库信息的基础上,对37株单增李斯特氏菌分离株进行聚类分型。分型结果表明,在蛋白质水平上,MALDI-TOF-MS可把37株单增李斯特氏菌分成9个型别。     

印度尼西亚进口冻鱼中单增李斯特氏菌的分离与鉴定

本文分别采用常规法和mini VIDAS法结合VITEK诊断，使判读更加客观，缩短了检验流程。     

一种快速鉴定单增李斯特菌的方法

通过单增李斯特菌的生化特性对李斯特菌进行鉴定,并根据单增李斯特菌的actA基因序列,以及其他李斯特菌的特异性靶序列设计引物,用PCR技术快速鉴定单增李斯特菌.结果表明,生化实验时间较长且误差较大,而通过PCR能成功扩增出827bp的特征性条带,同时用CTAB/NaCI法和热裂解法分别提取基因组后进行PCR和电泳,结果两种方法都可以很好的扩增出特征性条带,而热裂解法由于更简便快速,实验确定了热裂解法是一种快速有效的鉴定单增李斯特菌的方法.     

传统发酵食品中乳酸菌的分离鉴定、基因分型及优良菌株筛选

对分离自传统发酵食品的40株乳酸菌进行16S r DNA鉴定、随机扩增多态性DNA(RAPD)菌株基因分型及产酸、产乙偶姻、降胆固醇、分解亚硝酸盐及1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除能力进行研究。结果表明,40株乳酸菌中,20株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4种型,Ⅲ型又分2个亚型;8株短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、6株戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)均呈现Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3种型,而6株耐久肠球菌(Enterococcus durans)呈现Ⅰ、Ⅱ2种型,显示了传统发酵食品中乳酸菌菌株的基因多样性。同种同型乳酸菌产酸、乙偶姻及DPPH自由基清除能力具有相似性;但同种不同型具有差异性。最终筛选出1株产酸(24.3 g/L)、乙偶姻(0.54 mg/m L)、分解亚硝酸盐(74.15%)、DPPH自由基清除能力(92.29%)均较强的植物乳杆菌SAV-JL7,以期为发酵食品风味及品质的改善提供参考。     

埃塞俄比亚发酵食品中乳酸菌的分离鉴定

采用传统纯培养方法对采集自非洲埃塞俄比亚地区的蜂蜜酒,咖啡,面引子等4份发酵食品中的乳酸菌进行分离纯化,运用16S rDNA序列分析和系统发育进化关系研究方法进行种属鉴定。结果表明,经16S rRNA基因序列分析,共分离到55株乳酸菌,分属于3个属,11个种或亚种,包括乳杆菌属(Lactobacillus)51株,肠球菌属(Enterococcus)3株,链球菌属(Streptococcus)1株,其中Lactobacillus paracasei为埃塞俄比亚地区蜂蜜酒中的优势菌株,占该样品总分离株的75%,Lactobacillus pontis为该地区面引子中的优势菌种,占该样品总分离株的41%。     

传统腌腊肉制品中乳酸菌的筛选与鉴定

从12个传统腌腊肉制品中分离得到52株乳酸菌,通过形态学初步鉴定,选出具有代表性的12株乳酸菌进行生化鉴定,初步确定L31、L94、LS76、LS81、LS101为戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus),LS51为食品乳杆菌(L.alimentari-us),LS14为干酪乳杆菌(L.casei),LS21、LS33为弯曲乳杆菌(L.curvatus),LS41为清酒乳杆菌(L.sake),L22、LS92为乳酸球菌,未能鉴定其种类。     

新疆传统酸奶中乳酸菌的筛选鉴定及菌相分析

酸奶是新疆各少数民族经常食用的一种乳制品。从新疆采集的22个酸奶样品中共分离出56株乳酸菌,通过形态特征观察、生理生化实验、糖发酵实验等传统鉴定方法,结合16S r DNA序列分析对其进行鉴定。结果表明,新疆传统酸奶中菌相构成为德氏乳杆菌(Lactobacillus.delbrueckii subsp.)46株(占总分离株的82%);发酵乳杆菌(Lactobacillus.fermentum)2株(4%);瑞士乳杆菌(Lactobacillus.helveticus)2株(4%);嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)1株(2%);鸡乳杆菌(Lactobacillus.gallinarum)2株(4%);屎肠球菌(Enterococcus faecalis)1株(2%);耐久肠球菌(Enterococcus canis)2株(4%)。说明新疆传统酸奶中德氏乳杆菌为优势菌。      

金华火腿中单增李斯特菌的风险评估

本文拟研究月桂酰精氨酸乙酯（lauroyl arginate ethyl,LAE）对单增李斯特菌（Listeria monocytogenes）的失活机制。采用二倍稀释法测定LAE对L. monocytogenes的最小抑菌浓度（minimum antibacterial concentration,MIC）。通过测定细胞形态、细胞膜完整性、胞内ATP水平、细胞膜电位、细胞表面疏水性及胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平等指标,揭示LAE失活L. monocytogenes的作用机制。结果表明,LAE对L. monocytogenes的MIC值为10 μg/mL。与未处理组相比,经终浓度为40 μg/mL的LAE处理10 min后,L. monocytogenes细胞形态发生明显皱缩,胞外核酸和蛋白质水平分别升高了1.64和15.39倍（P<0.05）,表明细胞膜通透性显著增强（P<0.05）,且细胞膜发生去极化,细胞表面疏水性显著增强（P<0.05）;胞内ATP水平降低了92.40%（P<0.05）;胞内活性氧水平升高了77.27%（P<0.05）。此外,添加抗氧化剂谷胱甘肽和N-乙酰-L-半胱氨酸均能显著降低LAE的抑菌活性（P<0.05）。综上表明,LAE能够有效失活L. monocytogenes,这可能与其损伤细胞膜和诱导氧化应激等有关。该研究为LAE在食品保鲜中的实际应用提供了理论依据。

     

新疆传统酸奶中乳酸菌的筛选鉴定及菌相分析

酸奶是新疆各少数民族经常食用的一种乳制品。从新疆采集的22个酸奶样品中共分离出56株乳酸菌,通过形态特征观察、生理生化实验、糖发酵实验等传统鉴定方法,结合16S r DNA序列分析对其进行鉴定。结果表明,新疆传统酸奶中菌相构成为德氏乳杆菌(Lactobacillus.delbrueckii subsp.)46株(占总分离株的82%);发酵乳杆菌(Lactobacillus.fermentum)2株(4%);瑞士乳杆菌(Lactobacillus.helveticus)2株(4%);嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)1株(2%);鸡乳杆菌(Lactobacillus.gallinarum)2株(4%);屎肠球菌(Enterococcus faecalis)1株(2%);耐久肠球菌(Enterococcus canis)2株(4%)。说明新疆传统酸奶中德氏乳杆菌为优势菌。     

分离自传统自然发酵食品中降胆固醇乳酸菌的筛选与评价

为了筛选优良的降胆固醇乳酸菌,本分析了从传统自然发酵食品中分离的30株乳酸菌,从中筛选出WS1、LP2、LP3、LP4、LP5和LP6 6株具有较强降胆固醇能力的乳酸菌,并通过对其胆盐耐受性及在含胆盐MRS培养基中的降胆固醇效率的分析,复筛出其中的WS1、LP2、LP3和LP6 4株乳酸菌。对4株乳酸菌的生长特征、产酸特征、不同生长阶段的种子液对胆固醇的降低效率的影响、耐酸特征及人工胃酸的耐受性进行分析和评价。结果显示,4株优选的乳酸菌降胆固醇能力较好,在胆盐中具有一定的存活力。胆盐的存在对降胆固醇能力具有一定的促进作用,4株菌在常规MRS培养基中生长和产酸特征稳定。不同生长时期的种子液对乳酸菌的降胆固醇能力有一定影响,对数期优于稳定期。耐酸性分析表明, pH越高,乳酸菌耐受性越好。pH 2.5,处理2h,乳酸菌依然具有一定的存活力;pH 3.5,乳酸菌存活力和存活时间都有所提高,pH 4.5时的存活力基本和自然pH的保持一致。在人工胃酸条件下,4株复筛乳酸菌在pH 2的条件下,存活时间超过4 h,随着pH的升高,存活率和存活时间都有所提高。本试验结果表明,4株乳酸菌均具有降胆固醇的特征,为后续优良菌株的降胆固醇机理研究打下了基础。     

传统发酵食品中乳酸菌的安全性评估

本文以传统发酵食品中分离的38株乳酸菌(lactic acid bacteria,LAB)为研究对象,利用溶血试验、明胶液化试验和吲哚试验测试受试菌株相关产毒代谢产物,采用K-B纸片法检测菌株对25种抗生素的耐药表型,运用聚合酶链式反应检测菌株携带的耐药基因.结果表明:38株乳酸菌的溶血试验、明胶液化试验和吲哚试验均为...     

基于抗单增李斯特菌单链抗体的胶体金探针制备及其活性鉴定

以大肠杆菌表达系统制备抗单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)的单链抗体,以胶体金作为示踪物,优化胶体金探针的制备,并经免疫渗滤法鉴定胶体金探针的活性。结果表明该胶体金探针应用于免疫渗滤法时,具有高度特异性,通过胶体金探针的直接显色,可判断阳性样品;对Lm的最低检测限约为107 CFU/m L;完成检测过程仅需10 min左右。该方法简单、快速、准确,可用于食品中Lm的检测。