模拟胃肠道消化对玉米低聚肽抗氧化作用的影响

以胃蛋白酶和胰蛋白酶在体外模拟胃肠环境,测定模拟消化前后玉米低聚肽的相对分子质量分布、DPPH自由基清除能力、·OH清除能力、ABTS自由基清除能力、ORAC值和ROS清除能力,旨在探索模拟胃肠道消化对玉米低聚肽抗氧化活性的影响。结果表明：玉米低聚肽中大部分肽段相对分子质量低于1 000。分别模拟胃、肠环境消化后,重均相对分子质量有所下降,下降率分别为1.47%、0.05%,ABTS自由基清除能力有一定程度的升高,分别为25.47%、1.39%。模拟胃环境消化前后,DPPH自由基清除能力IC50值分别约为1.41、1.50 mg/mL,·OH清除能力IC50值分别约为10.3、12.3 mg/mL;模拟肠环境消化前后,DPPH自由基清除能力IC₅₀值分别约为1.39、1.48 mg/mL,·OH清除能力IC₅₀值分别约为8.1、9.5 mg/mL。模拟胃环境消化后,ORAC值有所降低,降幅为10.4%,100、400 μg/mL玉米低聚肽对ROS清除能力分别提高了1.42%、16.78%;模拟肠环境消化后,ORAC值提高了1.4%,100 μg/mL玉米低聚肽对ROS清除能力降低1.71%,而400 μg/mL玉米低聚肽对ROS清除能力提高2.61%。     

转基因牛的重组人α-乳清白蛋白的离体和体外消化稳定性研究

目的 通过测定转人α-乳清白蛋白基因的克隆牛所表达的重组人α-乳清白蛋白在模拟胃肠液及小型猪胃肠液中的消化时间,并与人α-清白蛋白标准品在上述消化液中的消化时间相比较,判定该重组蛋白的消化稳定性,为其致敏性评价提供基础资料.方法 根据<转基因生物及其产品食用安全检测--模拟胃肠液外源蛋白质消化稳定性试验方法>消化人α-...     

模拟胃肠消化对羊皮胶原肽抗氧化活性的影响及其消化保护分析

为明确胶原蛋白肽在体外消化后抗氧化活性的变化情况,探讨活性肽消化保护的必要性,本实验以羊皮为原料,制备了分子质量集中在低于1 kDa的羊皮酶解胶原肽,研究胶原肽的基本组成和结构特性与抗氧化活性的关系,评价体外模拟消化前后酶解胶原肽抗氧化活性的变化,结合液相色谱-质谱分析和计算机模拟消化分析胶原肽在消化过程中肽段的变化,并采用肠溶胶囊对胃消化阶段的胶原肽进行保护。结果表明,胶原肽富含脯氨酸,二级结构主要为无规卷曲和β-片层,有利于胶原肽抗氧化活性的发挥。胶原肽的还原力和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率在消化后下降,而2,2’-联氮-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS）阳离子自由基清除率上升,原因是DPPH自由基和ABTS阳离子自由基对抗氧化氨基酸的敏感度不同。此外,胶原肽在胃消化阶段的抗氧化活性明显降低,肠溶胶囊的使用对胶原肽的活性具有明显的保护作用。本研究结果在一定程度上为抗氧化活性肽的消化保护提供了实验依据。     

基于网络药理学与分子对接研究马氏珍珠贝降糖活性肽

基于网络药理学及分子对接方法筛选马氏珍珠贝软体来源的具有潜在降糖活性的肽类成分。采用纳升液相串联质谱鉴定马氏珍珠贝软体中的主要蛋白质类成分;通过Peptide Cutter在线工具模拟酶切获得马氏珍珠贝软体来源的肽类成分;进一步借助SYBYL-X 2.0软件进行分子对接筛选潜在活性肽段;通过Swiss Target数据库收集活性肽段潜在靶点,采用GeneCards数据库和OMIM-GENE-MAP数据库收集2型糖尿病相关的疾病靶点;借助Cytoscape软件和STRING平台构建“肽段-成分-靶点”网络和蛋白质相互作用网络,进行可视化分析,筛选酶解肽的核心成分和关键靶点;利用Omicshare云平台对共同靶点进行GO(Gene Ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)富集分析;体外二肽基肽酶-IV(dipeptidylpeptidase-IV,DPP-IV)抑制率实验验证马氏珍珠贝软体肽段的活性。结果表明,肌动蛋白、肌球蛋白和微管蛋白为马氏珍珠贝软体主要蛋白质类成分,从模拟酶切肽段中筛选获得潜在降糖活性肽段28条及其...     

马鹿茸水溶性蛋白的提取与体外模拟消化研究

以鲜马鹿茸为原料,对比六种蛋白提取方法,依据提取蛋白量及SDS-PAGE电泳图谱确定鹿茸水溶性蛋白有效提取方法;模拟胃肠环境对提取的蛋白进行体外模拟消化研究,测定其体外胃肠消化稳定性及消化过程中游离氨基含量变化。结果表明:组成为100mmol/L Tris、6mol/L盐酸胍、0.02mol/L EDTA-2Na和1%胃蛋白酶抑制剂的提取液提取蛋白量最高,电泳条带多且清晰;蛋白在体外模拟胃、肠环境下消化5min后即迅速被分解,消化60min后即被分解为20ku以下的小分子量蛋白或多肽,消化2.5h后分子量主要分布在7823u及以下范围,在肠和胃肠连续消化过程中游离氨基含量随时间的延长而显著增加,这表明鹿茸水溶性蛋白较易被分解;模拟肠消化2.5h后游离氨基含量增加了一倍,显著大于胃消化中的增加量（p<0.01）,这暗示着鹿茸水溶性蛋白更有利于肠消化。      

苦荞蛋白模拟消化产物抗氧化活性及组成研究

目的:通过体外模拟部分胃、肠道消化过程,考察苦荞蛋白经胃、肠道消化后生成肽的组成和抗氧化活性;揭示苦荞蛋白质体内消化与抗氧化活性的关系.方法:采用胃蛋白酶、胰蛋白酶,模拟人体胃、肠道消化过程酶解苦荞蛋白质,确定产生最强的抗氧化肽的时间;经凝胶分离,确定抗氧化肽分子质量范围.结果:苦荞蛋白质经模拟消化过程10 h产生最高抗氧化活性多肽,凝胶分离出5个组分,其中分子质量为900 Da的肽具有最强的抗氧化活性.     

鳕鱼源金属螯合肽体外模拟胃肠消化稳定性研究

为了评价鳕鱼皮胶原蛋白源金属螯合肽,Ala-Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Arg(多肽M),的胃肠消化耐受性,建立体外模拟胃肠消化模型(SGID),该模型包括模拟人体中胃消化环境和肠消化环境两个阶段。多肽M的钙螯合率为0.88±0.02μg/mg,铁螯合率为33.67%。胃消化产物S,钙螯合率为0.87±0.03μg/mg,与纯肽相比钙螯合率下降1.14%;铁螯合率为33.72%,与纯肽相比反而上升0.05%。肠消化产物D,钙螯合率为0.85±0.01μg/mg,与纯肽相比下降3.40%;铁螯合率为34.13%,与纯肽相比上升0.46%。利用反相高效液相色谱、质谱和圆二色谱技术,发现经过两个阶段多肽M分子量未发生变化,肽键未发生断裂,构象发生变化,其中无规卷曲减少,β折叠和β转角构象增加。因此,多肽M在体外模拟胃肠消化过程中其多肽链氨基酸组成不变,空间构象发生改变,钙铁离子螯合能力变化不大,体外模拟胃肠消化耐受性高。     

酪蛋白胃肠模拟水解液活性检测及细胞吸收机制初步研究

目的:研究牛乳酪蛋白在胃肠模拟水解条件下水解物的生物活性,以及这些肽类在细胞水平的吸收机制,为蛋白质生理作用机制研究奠定基础。方法:以牛乳酪蛋白为原料,对其进行体外模拟胃肠消化实验,通过检测消化液的DPPH自由基清除率和抑菌圈大小,分析其抗氧化和抗菌活性;建立Caco-2单层细胞模型对水解液进行过膜吸收,RP-HPLC分析过膜前后消化液组成,研究吸收情况。结果:模拟胃和肠消化时间均在2 h时,牛乳酪蛋白消化液的DPPH自由基清除率达到最大,分别为46.40%和56.7%,并且此时对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌性能最强;细胞吸收实验表明2 h胃模拟水解液肽氮生物利用度达到7.79%,2 h肠模拟水解液达到15.11%,之后基本持平;亲水性的多肽能被成功吸收进入单细胞层下侧,但疏水性多肽大部分不易通过,易被降解或阻止。结论:牛乳酪蛋白在模拟消化条件下能产生生物活性肽类,并能被肠细胞吸收。      

热处理对生鲜乳及复原乳蛋白质体外消化特性的影响

通过体外模拟消化的方法对不同热处理的牛乳样品进行检测,研究热处理对鲜牛乳及复原乳营养价值的影响。通过聚丙烯酰氨凝胶电泳、尺寸排阻高效液相色谱、扫描电镜及质谱分析等多种方法进行检测。结果表明:经过胃液消化后,牛乳中的部分蛋白被消化,其中酪蛋白消化最为明显,鲜牛乳中酪蛋白在胃液中的消化水平高于其他热处理样品;而经过肠液消化后,牛乳中蛋白消化完全,生成游离氨基酸及小肽。乳中蛋白质经消化主要生成分子质量低于1 500 Da的肽段,易于人体消化吸收。通过扫描电镜可以看出,热处理程度越大,乳蛋白变性,发生聚集现象,粒径增大,其中加热复原乳的粒径较其他乳制品大;通过质谱检测及高效液相色谱分析,热处理程度越大,蛋白质美拉德反应程度升高。     

发酵麦胚球蛋白体外模拟消化

基于体外模拟胃、肠消化的方式评估发酵麦胚球蛋白（FWG）在不同消化阶段消化率、微观结构、氨基酸组成、二级结构及其抗氧化活性的变化。结果表明,FWG经胃、肠消化后,其可消化率由55.43%分别降至34.33%和9.54%,平均粒径由100 nm分别降至50～70 nm和20～30 nm,未消化蛋白分子质量稳定在15 ku附近。胃消化2 h后,FWG总游离氨基酸释放量达到原始样品的2.05倍,芳香族氨基酸和支链氨基酸含量显著增加;与α-螺旋和β-折叠稳定相关的赖氨酸、缬氨酸在这一阶段被解离出来,无序性增加。FWG经胃消化后羟自由基清除率显著升高32.76%,胃消化过程中ABTS自由基和DPPH自由基清除率呈下降趋势。肠消化后,FWG总游离氨基酸量趋于稳定,二级结构有序性增加。肠消化期间反映亲水性肽抗氧化能力的ABTS自由基清除率呈先下降再上升后下降的趋势,羟自由基清除率则和含羟基氨基酸相对含量的变化趋势呈正相关性,呈先下降再上升而后下降最后上升的变化趋势,DPPH自由基清除率变化趋势和疏水性氨基酸含量的变化密切相关。本研究为进一步了解FWG在肠、胃消化过程中理化性质及功能的变化机制提供理论...     

燕麦β-葡聚糖-表没食子儿茶素没食子酸酯复合物的体外稳定性

为研究燕麦β-葡聚糖-表没食子儿茶素没食子酸酯复合物在模拟胃肠液中的稳定性,采用真空冷冻干燥法制备燕麦β-葡聚糖-表没食子儿茶素没食子酸酯复合物。在模拟胃肠液中通过不同pH值和复合物质量浓度,探讨在胃肠液中pH值和复合物质量浓度对于复合物稳定性的影响。结果表明：在胃液和肠液中,pH值越低,复合物越稳定。由于进食会使得胃肠液的pH值增大,表明在禁食状态下复合物状态更稳定。复合物质量浓度越大,其在胃肠液中的稳定性越高,且达到在0.8 mg/L时,180 min孵育后复合物稳定性均达到80%以上。由此表明可以通过适当增大复合物的质量浓度来提高胃肠液的稳定性。     

牛血清白蛋白与花青素纳米颗粒的特性及稳定性研究

目的：研究牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）与花青素相互作用形成的纳米颗粒的特性,及其对花青素的氧化稳定性的影响。方法：采用扫描透射电子显微镜和纳米粒度仪,研究BSA与笃斯越橘花青素形成纳米颗粒的表观形态及粒径大小,用盐析法测定BSA对花青素的结合量,并用自由基（DPPH自由基、ABTS＋·）清除方法和胃肠模拟体系分别研究BSA对花青素氧化稳定性的影响。结果：BSA-花青素在磷酸盐缓冲液（pH 7.4）中能通过自组装形成纳米颗粒,其纳米颗粒较BSA的粒径变小,由30～35 nm减小到15～20 nm。BSA对花青素的结合量是每摩尔BSA分子上结合的花青素为10 mol。BSA-花青素纳米颗粒较花青素的DPPH自由基、ABTS＋·清除能力明显增强。在胃模拟体系中,BSA与花青素结合对花青素稳定性没有显著性影响;在肠模拟体系中,BSA与花青素结合对花青素稳定性有显著性影响,未结合的花青素在6 h后含量降低70%左右,而有BSA结合的花青素含量几乎保持不变,表明BSA与花青素结合对花青素的氧化稳定性有明显的保护作用。     

转高赖氨酸融合蛋白基因水稻蛋白消化稳定性

以我国自主培育的转高赖氨酸融合蛋白基因水稻(简称转GL基因水稻)为材料,参考中华人民共和国国家标准,通过体外模拟胃/肠液消化实验,研究转GL基因水稻蛋白的消化稳定性。结果表明：质量浓度为5g/L的总蛋白在胃液中2min内完全消化,质量浓度为2g/L的总蛋白在肠液中15s～2min内完全消化;而以5倍于国标规定的质量浓度进行消化时,总蛋白在模拟胃液中60min仍可观察到未降解片段,在模拟肠液中2min内则全部消化;两步法体外模拟消化结果,胃液中极难降解的蛋白片段在经肠液作用5min后,完全被降解。本研究表明,转GL基因水稻蛋白在模拟胃肠液中不具有消化稳定性。     

Comparative study of in vitro digestibility of major allergen,tropomyosin and other proteins between Grass prawn (Penaeus monodon) and Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei)

BACKGROUND: Stability in simulated gastric fluid is supposed to be an important parameter for the estimation of food allergenicity. In the present study, the digestive stability of allergenic protein tropomyosin (TM) and other food proteins from Grass prawn and Pacific white shrimp in simulated gastric fluid (SGF) and simulated intestinal fluid (SIF) digestion assay system was investigated and comparatively studied by sodium dodecyl sulfate–polyacrylamide gel electrophoresis (SDS‐PAGE), western blotting, and inhibition enzyme‐linked immunosorbent assay (ELISA). RESULTS: In the SGF system, proteins such as actin and myosin heavy chain (MHC) were rapidly degraded within a short period of time, while TM was relatively resistant to pepsin digestion. In the SIF system, MHC was also easily decomposed, while TM and actin were resistant to digestion. Western blotting using a specific polyclonal antibody against TM indicated that the degradation pattern of shrimp TM by SGF and SIF was almost unaffected by the presence of other myofibrillar proteins. Further study by IgE immunoblotting and inhibition ELISA using sera from crustacean‐allergic patients indicated that IgE binding of TM was decreased. CONCLUSION: Proteinase digestion is effective in reducing IgE binding of shrimp TM. It is also of interest to notice that Pacific white shrimp TM had higher digestion stability than Grass prawn TM. However, Pacific white shrimp TM revealed enhanced IgE binding over that of TM from Grass prawn and thus it is possibly more allergenic. Copyright © 2010 Society of Chemical Industry     

Comparative study of in vitro digestibility of major allergen tropomyosin and other food proteins of Chinese mitten crab (Eriocheir sinensis)

BACKGROUND: China is the largest producer and consumer of aquatic products in the world; however, many people in China suffer from allergies upon consuming crab. Stability in simulated gastric fluid is regarded as an important parameter for the estimation of food allergenicity. RESULTS: The digestive stability of allergenic protein tropomyosin (TM) and other food proteins from Chinese mitten crab in simulated gastric fluid (SGF) and simulated intestinal fluid (SIF) digestion assay systems was investigated and compared by SDS‐PAGE, western blot and inhibition ELISA. In the SGF system, proteins such as the original band of myosin heavy chain (MHC) and actin were rapidly degraded within a short period of time, while TM was relatively resistant to pepsin digestion. In the SIF system, MHC was easily decomposed, while TM and actin were similarly resistant to digestion. Further study by IgE immunoblotting and inhibition ELISA using sera from crab‐allergic patients indicated that allergenicity of TM was partially decreased. CONCLUSION: Chinese mitten crab major allergen TM was resistant to pepsin while relatively susceptible to trypsin and chymotrypsin digestion. Both SDS‐PAGE using purified TM and western blot using myofibrillar proteins indicated that the degradation pattern of TM by SGF and SIF was not affected by the presence of other myofibrillar proteins. Inhibition ELISA results revealed that proteinase digestion is effective in reducing the allergenicity of crab TM. Copyright © 2010 Society of Chemical Industry     

应用单管半巢式PCR技术筛查转基因食品

建立转基因作物中常见的两种外源调控元件的单管半巢式聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）测方法,为转基因食品的筛选检测提供一种快速、精确的方法。针对6 种转基因作物中CaMV35S启动子和NOS终止子的一致性核苷酸序列,分别设计巢式PCR的内、外引物,在测试不同引物组合的扩增效率基础上,建立CaMV35S启动子和NOS终止子的单管半巢式PCR方法。结果表明,上述方法对两种转基因成分具有良好的特异性,检测灵敏度分别为0.01%和0.05%,显著优于常规PCR方法。该方法具有便捷、准确、灵敏等特点,适合筛查食品中的转基因成分。     

苦荞凝集素的稳定性及体外消化性

目的:从苦荞种子中分离得到一种凝集素(tartary buckwheat lectin,TBL),研究其酸碱、热稳定性及体外消化性。方法:采用酸性缓冲液浸提脱脂荞麦粉及阴离子交换层析纯化凝集素,TBL分别经沸水浴加热不同时间、不同pH处理、模仿胃液、模仿胰液消化后,采用SDS-PAGE及灰度扫描分析,研究其稳定性及体外消化性。结果表明:选用pH4.7浸提缓冲液可简化提取工艺,采用一步层析可得到电泳纯TBL。沸水浴加热60 min时,TBL仍可保留50%以上。在pH4~12条件处理30 min后,BTL的保留率均在80%以上。体外消化实验表明,TBL对人工模拟胃液有一定抗性,降解一半TBL所需时间为10 min,而TBL在人工模拟肠液中很难消化,即使作用时间为50 min时,TBL也未发生明显降解。将TBL沸水浴加热30 min后再进行体外消化实验,发现在模拟肠液及模拟胃液中,仅处理10 min时,SDS-PAGE结果中TBL蛋白条带完全消失,表明被TBL被消化酶完全降解。结论:天然TBL具有良好的稳定性,耐热、耐酸碱、耐胰蛋白酶消化,在胃蛋白酶液中降解也较为缓慢。预加热处理可明显提高TBL在模拟胃液及模拟肠液中的消化率。     

苦荞10 kD过敏原的重组表达及部分性质分析

以苦荞种子灌浆期cDNA文库中获得的苦荞10 kD过敏原基因序列TBAP10（tartary buckwheat 10 kD allergenprotein,TBAP10;GenBank登录号JK729379.1）为基础,构建重组表达载体pET47b-TBAP10,重组蛋白在大肠杆菌BL21 Star（DE3）中以包涵体形式表达。经包涵体复性和钴离子螯合层析纯化目的蛋白,并对其过敏活性、热稳定性及在模拟胃肠环境中的稳定性进行了分析。Western blotting显示该蛋白与苦荞16 kD过敏蛋白Fag t2存在免疫交叉反应。竞争性ELISA证明重组蛋白TBAP10具有与荞麦过敏患者血清IgE特异的结合活性;TBAP10具有强的热稳定性,能耐受15 min的沸水浴;模拟胃肠环境的消化结果显示TBAP10对胃蛋白酶具有强的耐受性,但对胰蛋白酶无耐受性。     

Changes in the phenolic contents and antioxidant activities of citrus peels from different cultivars after in vitro digestion

The aim of this study was to investigate the effects of in vitro digestion on the phenolic contents and antioxidant activities of citrus peels. Three different varieties of citrus peels (mandarin, ponkan and red tangerine) were treated with simulated gastric fluid (SGF) and simulated intestinal fluid (SIF). The results showed that the SGF or SIF treatments of the citrus peels did not significantly increase the total phenolic content (TPC) or total flavonoid content (TFC), except for that of the TFC of ponkan peel treated with SGF. However, simulated in vitro digestion did improve the antioxidant activities measured with FRAP and ABTS methods. The effect of SGF was more positive than those of SIF for the FRAP assay, but the opposite was true for ABTS. Notably, both simulated digestion techniques decreased the DPPH free radical scavenging abilities. Simulated digestion in vitro changed the antioxidant activities of the citrus peels.     

In vitro digestion and characterisation of 2S albumin and digestion‐resistant peptides in pecan

The 2S albumins are one of the major protein families involved in severe food allergic reactions to nuts, seeds and legumes, thus potentially making these proteins clinically relevant for allergic sensitisation and potential diagnostic markers. In this study, we sought to purify native 2S albumin protein from pecan to further characterise this putative allergen. The purified 2S albumin, Car i 1, from pecan was found to be resistant to digestion by pepsin in simulated gastric fluid (SGF) and comparatively stable to proteolysis by trypsin and pancreatin in simulated intestinal fluid (SIF). Digestion of purified Car i 1 in SGF and SIF resulted in formation of different digestion‐resistant peptides that were capable of binding IgE antibodies from allergic individuals. Digestion stability of Car i 1 and formation of digestion‐resistant antigenic peptides may explain why it is a potent sensitising protein in pecan for susceptible individuals. The observation that digestion‐resistant peptides are able to bind IgE implies that pecan can trigger systemic allergic reactions even after digestion in the stomach and small intestine.