草苁蓉提取物对HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用

目的：研究草苁蓉乙醇提取物（Boschniakia rossica ethanol extract,BREE）对H2O2诱导的HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：用H2O2诱导HepG2细胞氧化应激损伤,采用噻唑蓝（methylthiazolyldiphenyltetrazoliumbromide,MTT）比色法检测BREE对HepG2细胞氧化损伤的保护作用;比色法测定培养液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（aspartateaminotransferase,AST）的释放率,以及细胞中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）及丙二醛（malondialdelyde,MDA）水平;蛋白印迹法测定细胞外信号调节蛋白激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）、c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）总蛋白及其磷酸化形式的表达水平以及核转录因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）的核内转移。结果：BREE单独处理时,在所测质量浓度范围内对HepG2细胞增殖无显著影响。与模型组相比,BREE能显著提高氧化损伤细胞的存活率;降低氧化损伤细胞培养液中LDH、ALT和AST的释放;降低细胞MDA水平,增高细胞SOD活性和GSH含量。氧化损伤发生的不同时期,ERK、JNK、p38 MAPK和NF-κB蛋白均有激活,而BREE在氧化损伤发生1 h时减少ERK激活和NF-κB核转移,氧化损伤发生12 h时减少JNK蛋白激活。结论：BREE对H2O2所致HepG2细胞氧化应激损伤具有保护作用,此作用可能与其抑制ERK、JNK的活化和NF-κB的核内转移有关。     

草苁蓉多糖对氧化应激所致血管内皮细胞凋亡的抑制作用

目的：研究草苁蓉多糖（Boschniakia rossica polysaccharides,BRPS）对氧化应激所致血管内皮细胞凋亡 的抑制作用。方法：利用叔丁基过氧化氢（tert-butyl hydroperoxide,tBHP）损伤人脐静脉血管内皮细胞制备细胞 氧化应激损伤模型,采用四甲基偶氮唑盐（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT）比色法检测细胞存 活率,分光光度法检测细胞内丙二醛（malondialdelyde,MDA）水平、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）活力和还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）水平。采用二氯荧光乙酰乙酸盐（dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA）法检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平,采用JC-1荧光染色法观察 细胞线粒体跨膜电位（mitochondrial membrane potentials,ΔΨm）水平,采用Hoechst染色和原位末端标记（TdTmediated dUTP nick end labeling,TUNEL）法观察细胞凋亡情况。Western blot法检测细胞Bax、Bcl-2、细胞色素c （cytochrome c,Cyt c）、Bid片段（truncated Bid,tBid）、Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白的表达情况。 结果：BRPS提高tBHP损伤的内皮细胞存活率,降低细胞ROS水平,减少MDA生成,提高SOD活性与GSH水 平,升高ΔΨm水平,抑制细胞凋亡。Western blot结果显示,BRPS降低胞浆Cyt c、线粒体tBid水平,减小细胞 Bax/Bcl-2比值,抑制Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的活化。结论：BRPS对氧化应激所致血管内皮细胞凋亡具有 抑制作用,机制可能与线粒体凋亡途径和死亡受体途径均有关。     

草苁蓉多糖研究进展

草苁蓉为传统中药,含多种活性成分.草苁蓉多糖有增强免疫力、抗衰老、抗癌、消炎等多种活性,而且无毒、无副作用,本文对草苁蓉多糖的来源、结构、药理作用及含量测定作一综述.     

黄酮对AAPH诱导的HepG2细胞氧化应激的作用

研究部分黄酮对AAPH诱导的HepG2细胞氧化应激的作用。建立AAPH诱导HepG2细胞氧化应激的模型,比较对照组和实验组细胞内的氧化自由基ROS的含量。结果表明,用不同浓度的黄酮处理HepG2细胞1h后,经过相同浓度的氧化剂作用后,细胞内自由基ROS的含量相对空白对照组均发生变化。这些选择性的黄酮对于AAPH诱导的HepG2细胞氧化应激具有促进或者抑制作用,其作用机制可能清除HepG2细胞内ROS以及与细胞内氧化酶和抗氧化酶系统的作用有关。     

草苁蓉多糖研究进展

草苁蓉为传统中药,含多种活性成分。草苁蓉多糖有增强免疫力、抗衰老、抗癌、消炎等多种活性,而且无毒、无副作用,本文对草苁蓉多糖的来源、结构、药理作用及含量测定作一综述。     

过氧化氢诱导HepG2细胞产生氧化应激细胞模型的建立

不同浓度过氧化氢作用人肝癌细胞(HepG2)4h后,用单细胞凝胶电泳技术测定DNA损伤状况,分光光度法测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,研究过氧化氢的最佳作用浓度,构建体外氧化应激细胞模型。结果表明,过氧化氢的最佳作用浓度为100μmol/L,作用细胞的时间选择4h,可以成功构建以过氧化氢为氧化应激诱导剂的HepG2细胞体外氧化应激模型。     

贻贝多糖对胰岛素抵抗HepG2细胞糖代谢的影响

为了探究贻贝多糖对胰岛素抵抗（Insulin resistance,IR）HepG2细胞糖代谢影响的潜在分子机制,以贻贝多糖（Mussel polysaccharides,MP）为研究材料,采用CCK8法检测HepG2细胞的增殖情况,同时筛选不同浓度胰岛素构建细胞胰岛素抵抗模型,检测MP对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响。结果显示：当胰岛素浓度处于10-6 mol/L时,HepG2细胞的葡萄糖含量最高,对葡萄糖的消耗能力最弱,是构建胰岛素抵抗模型的最佳浓度。此外,MP(100～1000μg/mL)对HepG2细胞无毒性,能促进细胞增殖。与IR-HepG2细胞相比,200、400、600μg/mL的MP能明显提升糖原含量,分别为17.20%、22.95%和32.50%。同时,高剂量MP能显著上调PI3K和GLUT2的相对基因表达量,并能降低GSK-3β的表达量。为后续MP降血糖提供实验基础,同时有助于促进MP的开发利用。     

芦荟多糖对D-半乳糖致HepG2细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨芦荟多糖对HepG2细胞氧化损伤的保护作用,分析其体外抗氧化能力。方法:以HepG2细胞为研究对象,建立D-半乳糖诱导细胞氧化损伤模型,以不同浓度芦荟多糖进行预保护处理。采用细胞增殖与毒性检测试剂盒测定HepG2细胞存活率,生物化学法检测细胞超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力,酶联免疫吸附法测定细胞总抗氧化能力及丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量,实时荧光定量PCR检测细胞Keap1、Nrf2、NQO1和HO-1基因表达水平。结果:与D-半乳糖模型组比较,25、50、100 μg/mL的芦荟多糖预保护处理能不同程度地提高HepG2细胞存活率;芦荟多糖能显著增强细胞中抗氧化酶的活性,降低细胞MDA的生成量（P<0.05）,且作用效果与芦荟多糖浓度成正比;细胞中Keap1基因表达显著降低,Nrf2、NQO1、HO-1 mRNA表达显著提高（P<0.05）。结论:芦荟多糖可以减轻HepG2细胞的氧化应激损伤,激活Nrf2表达并抑制其泛素化降解,提高下游NQO1、HO-1的转录水平,增强细胞抗氧化酶系活性并调控细胞氧化还原系统,以达到减轻细胞氧化损伤程度、提高细胞抗氧化应激损伤的效果。     

沙棘多糖对胰岛素抵抗HepG2细胞氧化应激的保护作用与机制

目的：研究沙棘多糖对胰岛素抵抗HepG2细胞氧化应激的保护作用与机制。方法：采用水提醇沉法对沙棘多糖进行提取,并用苯酚硫酸法测定多糖含量。CCK-8法测定不同浓度沙棘多糖对HepG2细胞活力的影响,用含5×10-8mol/L胰岛素的培养基诱导HepG2细胞24 h,建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型。采用试剂盒测定葡萄糖消耗量以及糖原相对含量,并测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,Western Blot法测定氧化应激相关蛋白的表达。结果：沙棘多糖含量为88.46%,在沙棘多糖质量浓度达到800 μg/mL时,细胞活力出现显著下降(P＜0.05),后续安全剂量选择400 μg/mL。经沙棘多糖处理后的葡萄糖消耗量以及糖原相对含量均显著提高(P＜0.05),SOD水平达到(79.31±2.16) U/mg,MDA水平达到(2.15±0.12) nmol/mg。沙棘多糖处理后显著提高Nrf2和HO-1的表达水平(P＜0.05),显著降低Keap1的表达水平(P＜0.05)。结论：沙棘多糖能够改善胰岛素抵抗细胞模型异常糖代谢情况和氧化应激水平,并通过调控Nrf2/Keap1/HO-1通路起到改善胰岛素抵抗的作用。     

枸杞硒多糖的合成及对人体肝癌HepG2细胞增殖的体外抑制作用评价

根据有机硒化合物的合成方法,本文以枸杞多糖和亚硒酸钠为原料,采用响应面法优化枸杞硒多糖的工艺条件。利用原子荧光、体外化学反应等分析技术测定了枸杞硒多糖中的硒含量,并用MTT法对枸杞硒多糖抑制人体肝癌细胞增殖的活性进行了初步评价。结果表明:制备枸杞硒多糖的最优条件是按照LBP为1 g计算,加入0.62 g Na₂SeO₃,用1% HNO₃充分溶解,再加入BaCl₂ 1 g,74 ℃反应9 h。在此条件下,枸杞硒多糖中的硒含量为648.65 μg/g。活性结果显示,枸杞多糖和枸杞硒多糖对HepG2细胞均有一定的抑制作用,所有枸杞硒多糖的抑制作用明显优于枸杞多糖,并且硒含量最高的Se-LBP₄组对肿瘤细胞HepG2的抑制效果最佳,抑制率为38.15%。枸杞硒多糖抑制HepG2增殖能力与其硒的含量呈正相关,有望作为食品、保健食品和医药的原料进一步开发。     

3种黄酮对脂肪肝细胞氧化应激的影响

目的：评价表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表儿茶素、柚皮素3种食源性黄酮对降低脂肪肝细胞模型中氧化应激水平的作用。方法：采用油酸诱导的HepG2细胞建立脂肪肝模型,根据细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)释放量和活性氧产生量反映细胞损伤程度及氧化应激状态,通过黄酮物质处理后的脂肪肝细胞模型活性氧减少量评价其缓解脂肪肝氧化应激状态的功效。结果：EGCG的抗氧化能力优于表儿茶素,两种物质的抗氧化能力随浓度增加而增强,呈量效关系。柚皮素的抗氧化作用最弱,100μmol/L柚皮素具有促氧化作用。     

草苁蓉多糖对氧化损伤致血管内皮细胞凋亡相关蛋白表达的影响

该研究探讨草苁蓉多糖（Boschniakia rossica polysaccharides,BRPS）对氧化损伤致人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）凋亡相关蛋白表达的影响。以叔丁基过氧化氢（tert-butyl hydroperoxide,t-BHP）损伤HUVEC建立体外凋亡模型,分为正常组、t-BHP组（损伤组）、BRPS组,分别应用细胞增殖毒性检测试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）法和流式细胞术检测细胞存活率和细胞凋亡率,用Western blotting技术检测凋亡相关蛋白胱天蛋白酶原（pro-cysteine aspastic acid-specific protease,Procaspase）、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly（ADP-ribose）polymerase,PARP]、Survivin、p53、核转录因子-кB（nuclear factor-кB,NF-кB）信号通路蛋白以及丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase,MAPK）信号通路蛋白活化水平。结果显示,与正常组比较,损伤组HUVEC细胞活力降低50.6%,细胞凋亡率升高41.0%;与损伤组比较,BRPS组HUVEC细胞活力升高16.4%,细胞凋亡率降低了22.2%。此外,t-BHP降低HUVEC细胞的Procaspase-3、Procaspase-8、Procaspase-9、PARP和Survivin蛋白水平,升高Cleaved-PARP、p53、NF-κB、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶（phosphorylated extracellular signalregulated kinase,p-ERK）、磷酸化 c-Jun N 末端激酶（phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK）、磷酸化 p38丝裂原活化蛋白激酶（phosphorylated p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38）蛋白水平。而BRPS升高Procaspase-3、Procaspase-8、Procaspase-9、PARP 和 Survivin 蛋白水平,降低 Cleaved-PARP、p53、NF-кB、p-JNK、p-p38 蛋白水平。研究结果表明,BRPS对t-BHP引起HUVEC凋亡具有抑制作用,其机制可能与JNK、p38及NF-κB调控有关。     

过氧化氢诱导H epG 2细胞氧化应激模型的建立

建立过氧化氢(H_2O_2)介导的HepG2细胞氧化应激模型,为筛选抗氧化活性物质以及揭示抗氧化应激机制提供细胞学模型。采用不同浓度H_2O_2处理Hep G2细胞不同时间,噻唑蓝(3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT)法检测细胞存活率,二氯荧光黄双乙酸盐(2′,7′-Dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)法检测活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平,分光光度法检测丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量,以及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catlase,CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活性。结果表明,随着H_2O_2浓度升高和作用时间延长,Hep G2细胞存活率降低,ROS水平和MDA含量升高,SOD、CAT和GSH-Px活性降低。与对照组相比,200μmol/L H_2O_22处理Hep G2细胞6 h,细胞存活率显著降低(P0.05),仅为63.1%;ROS水平和MDA含量显著升高(P0.05),分别为127.1%和135.1%;SOD、CAT和GSH-Px活性显著降低(P0.05),分别为77.28%、78.56%和77.41%。H_2O_2诱导HepG2细胞建立氧化应激模型的最佳条件为H_2O_2作用浓度200μmol/L,作用时间6 h。     

水飞蓟素对丙烯酰胺诱导人肝癌细胞氧化损伤的保护作用

研究水飞蓟素对人肝癌细胞系（human hepatocellular liver carcinoma cell line,HepG2）增殖的影响以及 对食品加工过程中产生的丙烯酰胺所致肝细胞毒性的预防效果,同时对其保护机制进行探讨。通过噻唑蓝法检测 水飞蓟素对HepG2细胞增殖的影响和对丙烯酰胺诱发HepG2细胞毒性的保护效果;利用荧光探针法对HepG2细胞 内活性氧的变化进行检测,并运用比色法分别检测细胞内脂质、蛋白质及DNA的氧化损伤标志物（丙二醛、蛋 白羰基和8-羟基脱氧鸟苷）含量;利用酶活力试剂盒检测细胞内过氧化氢酶（catalase,CAT）、超氧化物歧化酶 （superoxide dismutase,SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活力的变化。结果显示, 12～96 μg/mL的水飞蓟素对HepG2细胞无毒性;水飞蓟素可以抑制丙烯酰胺引起的细胞存活率降低和氧自由基水平 升高,减少丙烯酰胺对脂质、蛋白质和DNA的氧化损伤,并提高细胞内抗氧化物酶CAT、SOD和GSH-Px活力。研 究证明,水飞蓟素能够缓解丙烯酰胺对肝细胞造成的氧化损伤。     

甲状腺素对HepG2细胞氧化损伤的保护作用

研究甲状腺激素(T3)对人肝癌细胞(HepG2)氧化损伤的保护作用。体外建立HepG2细胞H2O2氧化损伤模型,添加不同浓度T3进行保护,测定T3对细胞ROS、存活率、抗氧化酶及相关基因的影响。10-9、10-7、10-5mol/L的T3预处理24 h可分别有效降低50、100、200μmol/L H2O2处理细胞的ROS水平,提高细胞存活率(p0.05)。但10-5mol/L的T3反而会增加50μmol/L H2O2处理细胞的ROS水平,降低存活率(p0.05)。适量T3可显著降低H2O2氧化损伤的HepG2细胞MDA含量(p0.05),显著提高T-AOC、GSH-Px以及SOD活性(p0.05)。但过量T3会增加细胞MDA水平,降低酶活。基因表达也有类似趋势,T3预处理使损伤细胞内PI3K、Nrf2的表达显著提高(p0.05),且与T3作用剂量相关。可见T3对H2O2氧化损伤的HepG2细胞的氧化还原状态具有明显的改善作用,其抗氧化保护功能与提高抗氧化酶的活性及细胞内抗氧化相关基因的表达有关,且T3作用效果与其剂量及细胞损伤水平相关。     

赤芝富硒蛋白对肝癌HepG2细胞的抑制作用

探究赤芝富硒蛋白对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、周期分布、侵袭、迁移能力的影响。选取人肝癌HepG2细胞,分为空白组、药物对照组、无硒赤芝蛋白组、低、中、高浓度组,检测六组细胞生物学行为及Bcl-2、Bax、caspase3表达。结果显示,高浓度组细胞增殖率低于其他各组,凋亡率高于其他各组,G1期细胞比例为58.66%,高于其他各组。高浓度组细胞侵袭、迁移数分别为28.21、29.66,低于其他各组(p0.05)。高浓度组细胞Bcl-2、caspase3表达分别为0.98、1.01,均低于其他各组;Bax表达为1.03,高于其他各组(p0.05)。使用赤芝富硒蛋白进行干预,能够影响肝癌细胞增殖、凋亡,阻滞细胞周期,抑制侵袭、迁移能力,调控Bcl-2、Bax、caspase3表达,说明赤芝富硒蛋白能够调控肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力,抑制肝癌HepG2细胞的发展和扩散,为肝癌的临床治疗提供一定的理论依据。     

一种对HepG2细胞生长有抑制作用的玉米六肽

采用DEAE-FF离子交换和Sephdax G-15葡聚糖凝胶层析方法,从玉米肽中分离、纯化,获得具有抑制HepG2细胞增殖活性的短肽,采用高效液相色谱串联质谱电喷雾法(liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry,LC-E...