荔枝离体培养物DNA提取方法的研究

采用十二烷基硫酸钠(SDS)并补加非水溶性聚乙烯吡咯烷酮法,提取荔枝胚性培养物基因组DNA,有效地去除了植物组织中所含的多酚、单宁、色素及多糖类物质,得到高质量的荔枝胚性培养物基因组DNA.此DNA适合作为PCR模板应用,能较好地用于RAPD分析,这是一种简便、快捷、经济的荔枝胚性培养物基因组DNA提取的方法.     

花生制品中金黄色葡萄球菌SYBR Green qPCR快检方法的评价研究

金黄色葡萄球菌是花生及其制品中常见的一种食源性致病菌,针对金黄色葡萄球菌的快速检测方法对实现花生及其制品中的食品安全防控有重要意义.根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc)设计了3对特异性引物,同时优化了退火温度,成功建立了一种特异性引物的SYBR Green实时荧光定量PCR(qPCR)快速检测方法,进一步对该方法的特异性、重现性及灵敏度进行了验证.以8种模拟污染花生加工产品为实验对象,对该方法与荧光定量PCR试剂盒-探针法及商品化Baird-Parker干粉培养基法进行了评价研究.结果表明,建立的SYBR Green qPCR快速检测方法特异性和重现性良好,最低检测限为8.99 copies/μL,其灵敏度比荧光定量PCR试剂盒-探针法高2个数量级. SYBR Green qPCR快速检测方法具有成本低、检测快速、特异性好、灵敏度高的优点,可用于花生及其制品中金黄色葡萄球菌的快速检测,也可为防控其他食品中的金黄色葡萄球菌污染提供参考.     

牦牛乳中DNA提取方法的建立与优化

为加速牦牛重要基因的挖掘和功能鉴定,以牦牛乳作为试验材料,建立简便的牦牛基因组DNA提取方法.采用常规离心法,从牦牛乳中获得体细胞,进而提取基因组DNA.研究不同去除蛋白方法、不同DNA沉淀剂、不同贮藏条件对牦牛乳中DNA提取质量的影响.DNA质量通过PCR评价.结果表明:高盐法与酚/氯仿法去除蛋白效果相当.高盐法简便...     

一种植物基因组DNA快速提取方法的建立与评估

植物基因组脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)的提取是植物分子实验的基础,但随着样本数量的增加,基因组DNA的提取成为植株基因型鉴定以及单核苷酸多态性检测等分子实验的限速环节.为解决现有技术中提取植物基因组DNA过程繁琐、耗时耗力的问题,从提取液配方和提取条件等方面改良常规快速植物基因组DNA提取法,缩短了样本制备时间并简化了提取步骤,改良后每个样本DNA制备需时不到90 s,同时采用96孔板和配套设施显著提高了实验通量.该方法对植物样本的状态要求低、扩增效率高、成本低,适用于拟南芥、水稻和玉米等多种植物基因组DNA的提取与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增实验,尤其适用于大样本量的规模化基因型鉴定.     

奶粉基因组DNA不同提取方法的比较

为选择适合奶粉材料进行分子标记检测的DNA提取方法,以市售奶粉为材料,采用6种不同的方法提取基因组DNA,并比较这6种方法的提取效果．结果表明,除异丙醇沉淀法和十二烷基硫酸钠法(SDS法)外,其他4种方法提取的基因组DNA均适用于聚合酶链式反应(PCR)检测．同时,结合基因组DNA的纯度和质量浓度,明确奶粉基因组DNA提取方法的优劣依次为:热解法、异硫氰酸胍法、高盐低pH法和十六烷基三甲基溴化铵法(CTAB法)．     

三种提取卤虫基因组DNA方法的比较

以盐生动物卤虫为材料,分别用氯化钠高盐沉淀法和两种酚/氯仿抽提法对卤虫基因组DNA进行了提取;并用紫外光分光光度计法、琼脂糖电泳法和PCR对所提取的DNA进行检测,将它们在DNA的产量、质量等方面的优缺点进行比较,通过三种方法的比较,认为改进的酚-氯仿法是卤虫基因组DNA的最佳提取方法.     

荔枝离体培养物DNA提取方法的研究

采用十二烷基硫酸钠（SDS）并补加非水溶性聚乙烯吡咯烷酮法，提取荔枝胚性培养物基因组DNA，有效地去除了植物组织中所含的多酚、单宁、色素及多糖类物质，得到高质量的荔枝胚性培养物基因组DNA。此DNA适合作为PCR模板应用，能较好地用于RAPD分析，这是一种简便、快捷、经济的荔枝胚性培养物基因组DNA提取的方法。     

绿色木霉DNA提取方法研究

利用CTAB法、简化CTAB法、氯化苄法和快速提取法等4种方法提取了绿色木霉DNA,并采用琼脂糖凝胶电泳和PCR对DNA进行了评价.凝胶电泳检测结果表明4种方法均可提取到绿色木霉DNA,但PCR检测结果表明只有CTAB法和简化CTAB法提取的DNA可用作CBHII基因的PCR模板.     

质粒DNA经胃肠道吸收整合宿主基因组的可能性评价

给小鼠灌胃裸pcDNA3s质粒DNA，于3周后提取小鼠肺、肾、脾、肠系膜淋巴结、胸腺、生殖器官、肌肉及肝脏组织中的总DNA，琼脂糖凝胶分离游离质粒DNA与基因组DNA，以组织基因组DNA为模板，PCR法检测质粒DNA的整合率．对照模板中加入不同拷贝数的pcDNA3s质粒，确定PCR反应的敏感性．结果表明，各组织基因组DNA经PCR扩增均呈阴性，低于PCR反应的最低检出率．pcDNA3s质粒可能整合入宿主基因组的拷贝数是基因自发突变率的1／3000，尚未发现外源质粒DNA经胃肠道途径整合入宿主基因组的证据．     

转基因食物中常见外源基因PCR检测方法的建立

通过对CTAB法、胍-氯仿法和试剂盒法三种植物基因组提取方法进行比较,筛选出回收率最大的CTAB法用于本实验样品基因组的提取。其次,以转基因作物中9种常见的外源基因序列为模板,设计出9对引物,拟扩增片段皆小于200bp以适用于深加工食品的检测,并进行了引物的特异性、灵敏度、适用性验证试验。最后,将所建立的普通PCR检测方法应用到了转基因样品的实际检测中。结果表明,所建立的针对转基因作物中9种常见外源基因的PCR检测方法特异性强、灵敏度高,相对检测限可达0.1%～0.5%,约18～90拷贝的基因组。因此,该方法可用于转基因食品及加工品中常见基因的筛选检测。     

酸面团中微生物基因组DNA提取方法的优化

为有效提高酸面团中微生物基因组DNA的提取纯度与浓度,采用改良的CTAB法、STES法以及两种不同的基因组DNA提取试剂盒对酸面团中微生物基因组DNA进行了提取,并且重点优化了酸面团样品的前处理方法,经分光光度法和电泳法检测,确定了采用不同方法所获得DNA产物的浓度与纯度.结果表明:离心沉淀法、洗去面筋法和烘干法3种前...     

玉米转基因成分的非同源模板竞争定量PCR检测

建立了玉米转基因成分中35S启动子非同源模板的竞争定量PCR检测系统.竞争定量PCR的关键问题是内标物的制备.实验中非同源模板的构建是采用PCR方法对大肠杆菌基因组进行低严紧型扩增,回收预期DNA片段并将其构建到T-easy载体上.通过调整非同源模板浓度使竞争物PCR产物亮度与1%GMO玉米的亮度相同,从而确定转基因玉米的检出限为1%.然后以确定的内标物浓度与不同含量的GMO玉米样品进行竞争定量PCR反应,以此进一步确定样品中GMO的含量范围.     

蓝绿藻基因组DNA提取方法的比较研究

分子生物学技术已广泛渗入微藻研究的各个领域,其中DNA的抽提和保存技术尤为重要．作者介绍了商业试剂盒、CTAB和Wizard3种具有代表性的DNA抽提方法,将其应用于绿色微囊藻和铜绿色微囊藻基因组DNA的抽提中,并对这3种方法的抽提有效性、纯度、数量、DNA完整性和PCR扩增能力进行了比较．结果显示：尽管CTAB和Wizard方法提取DNA质量和纯度较高,适合PCR扩增、克隆和酶切反应,但改进的CTAB法是最有效、最经济和最方便的DNA抽提方法．另一方面,我们发现用乙醇固定微囊藻细胞是比较好的策略,通过优化固定时间、固定剂浓度、固定温度可得到高质量的核苷酸用于进一步的分子生物学研究．     

白木香基因组DNA提取方法研究

在传统CTAB法的基础上加以改良,建立了一种适于白木香基因组DNA提取的方法.通过比较改良的CTAB法和试剂盒法,表明改良的CTAB法提取的白木香基因组DNA质量优于试剂盒法;使用改良的CTAB法提取的白木香基因组DNAOD260/OD280比值在1.8~2.0之间,DNA的得率约为172μg/100 mg干叶.酶切试验表明,改良的CTAB法提取的DNA能被限制性内切酶完全酶切,可以用于下游研究.改良的CTAB法更适于白木香基因组DNA的提取.     

从皂苷糖基水解酶产生菌sp.48g提取基因组DNA

采用试剂盒法、饱和酚抽提法、高盐沉淀法和氯化苄法从皂苷糖基水解酶产生菌sp.48g提取基因组DNA。经比色法和琼脂糖凝胶电泳分析检测。结果用氯化苄法提取的基因组DNA在质量上和得率上优于其他方法。A260/A280为1.7,DNA产量为0.11mg/g湿菌体。达到下部实验要求。     

浓香型白酒窖泥中总DNA提取方法的研究

本研究针对5种白酒窖泥总DNA提取方法（预处理＋DNA提取液＋SDS法,改进的化学裂解法,CTAB＋ SDS＋反复冻融,SDS细胞裂解法,玻璃珠＋CTAB＋溶菌酶法）,探索适合微生物多样性研究的细菌16S rDNA和真菌ITS-5.8S rDNA的PCR扩增的窖泥总DNA提取方法.结果表明,采用玻璃珠＋CTAB＋溶菌酶法和化学裂解法提取DNA无明显降解、重复性好,可用于后续细菌16S rDNA和真菌ITS-5.8S rDNA的PCR扩增.     

玉米中转基因成分的定性PCR检测

利用改良 CTAB 法提取玉米产品的基因组 DNA,应用 PCR 检测方法,并以玉米特异性内源基因 IVR 为内参,花椰菜花叶病毒 35S 启动子(CaMV35S 启动子)、农杆茵胭脂碱合成酶终止子(NOS终止子)为靶基因检测玉米中是否存在转基因成分.实验结果表明,有些玉米样品中存在转基因成分,表明市场上存在未经标识的转基因玉米及其加工品.     

微波提取玉米秸秆木质素的方法研究

探讨了用1,4-丁二醇为萃取剂,利用自制的微波辅助萃取装置提取玉米秸秆中的木质素的方法,并用红外光谱法和紫外光谱法对提取物进行表征.结果表明,微波法可以用于木质素的提取,具有快速高效的特点.提取出的木质素结构中含有羟基、甲基、亚甲基、羰基、酚羟基、苯环等基团,外观呈黄褐色与相关文献研究的木质素结构相似.     

花生PCR模板提取方法的研究

用改良的CTAB法和煮沸法两种方法提取花生基因组DNA.紫外分光光度法和0.8%水平琼脂糖凝胶电泳检测结果表明:改良的CTAB法虽然步骤多,但所提DNA的质量和纯度比煮沸法高,且都符合一般分子生物学反应DNA的最佳质量要求.     

微波干法制备变性淀粉设备的研究

利用微波能和高频辐射技术,研制出微波干法生产变性淀粉的设备,经实际使用证实,设备稳定性好,性能可靠,并制备出性能优良的变性淀粉,为淀粉变性提供了一种先进的工业化干法生产设备.