应用原生质体融合技术改善双歧杆菌的耐氧性

利用原生质体融合技术将专性厌氧的短双歧杆菌和典型上面发酵的啤酒酵母进行原生质体细胞融合,通过研究两亲本原生质体的形成与再生,并进行跨界融合,成功初筛出兼具两亲本生物学性状、较稳定的融合子BSF1和BSF2,改善了双歧杆菌的耐氧性。     

立用原生质体融合技术改善双歧杆菌的耐氧性

利用原生质体融合技术将专性厌氧的短双歧杆菌和典型上面发酵的啤酒酵母进行原生质体细胞融合，通过研究两亲本原生质体的形成与再生，并进行跨界融合，成功初筛出兼具两亲本生物学性状、较稳定的融合了BSF1和BSF2，改善了双歧杆菌的耐氧性。     

原生质体融合构建高效降解苹果酸酿酒酵母

为构建降解苹果酸能力强的酿酒酵母,采用原生质体融合技术对优良酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)与解苹果酸裂殖酵母(Schizosaccharomyces malidevorans)进行属间融合.以双灭活原生质体为遗传标记筛选融合子,并对得到的融合子进行细胞体积、DNA含量方面的鉴定;对融合子进行降苹果酸性能、遗传稳定性、发酵性能和絮凝性测定,最终得到一株能稳定降解苹果酸高达31.7%的融合子Z29,该融合子连续15次传代,降酸性能稳定.Z29菌株发酵速度快,发酵度高,用其发酵的葡萄酒风味好,凝絮性强(本斯值为2.1).     

电融合原生质体构建麦角甾醇酵母菌株的研究

实验采用细胞电融合技术进行麦角甾醇酵母菌株构建研究,在不同种属的酵母菌种进行筛选研究,确定麦角甾醇含量较高酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和细胞生物量较高产朊假丝酵母(Candi-dautilis)为亲本菌株,进行原生质体制备、原生质体再生、原生质体灭活和原生质体融合研究,确定电融合过程中电压、脉冲强度、脉冲间隙及脉冲次数等技术参数,并筛选出融合子PF-4。经发酵性能实验表明,PF-4的细胞生物量为33.17g/L,麦角甾醇含量为2.01%,均高于亲本菌株,为玉米发酵法制备麦角甾醇酵母提供生产菌株。     

保健食品—BB乳的研究

本文就双歧杆菌耐氧型菌株的生物学特性及采用该菌株经牛奶发酵而制成的双歧杆菌活菌制剂——BB乳的工艺条件进行了探讨和研究。通过筛选和驯化所得到的耐氧型菌株与出发菌株相比,耐氧特性明显提高,能更好适合生产的需要。所研制的活菌制剂BB乳对主要常见的肠道致病菌有较好的杀灭作用,是一种很好的保健食品。     

聚合酶链反应在融合子鉴定中的应用

以粟酒裂殖酵母和酿酒酵母为出发菌株,进行了原生质体融合试验,并对检出的融合子采用聚合酶链反应(PCR)扩增亲本的特定基因序列,以此达到鉴定融合子的目的.在检出的3株融合子中,均扩增出亲本特定基因,证明了该法在融合子鉴定中的可行性.     

双歧杆菌原生质体的制备及其转化系统的建立

考察了长双歧杆菌WBL001菌体生长状态、酶解浓度、时长、温度以及不同渗透压稳定剂等因素,获得长双歧杆菌WBL001原生质体制备及再生的优化条件:长双歧杆菌以3%接种量活化至MRS培养基,培养至对数中期(OD600∶1),5μg/mL变溶菌素,37℃孵育30 min,以原生质体稳定液SMM为反应缓冲液,原生质体生成率达到81%,其再生率达到48%;在此基础上,通过聚乙二醇PEG融合,将穿梭表达载体pBAX转入双歧杆菌原生质体,成功建立双歧杆菌转化体系。     

一株高产3-羟基丁酮枯草芽孢杆菌的构建

以产3-羟基丁酮枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)TH-49(Val-)和产α-乙酰乳酸脱羧酶地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)AD-30为亲本菌株,以聚乙二醇为融合促进剂,进行原生质体融合获得融合子,融合子经再生、筛选等过程,最终获得高产3-羟基丁酮菌株HB-32,该菌株3-羟基丁酮产量高达49.64 g/L,比菌株TH-49(Val-)提高了61.8%,且遗传稳定性良好。进一步采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,从分子水平上分析了高产3-羟基丁酮菌株HB-32与亲本菌株基因组的变化。结果表明,枯草芽孢杆菌(B. subtilis)TH-49(Val-)和地衣芽孢杆菌(B. licheniformis)AD-30原生质体融合成功,提高了融合子HB-32 3-羟基丁酮产量。     

苹果酒酵母融合子W1的抗逆性及发酵性能的研究

采用原生质体融合技术构建了增香型苹果酒酵母融合子W1,全面研究了其抗逆性、凝聚性和发酵性能等综合性能指标,表明W1是一株优良的苹果酒酵母融合子,为优良酿酒酵母的筛选和高品质苹果酒的研究、开发提供了理论依据。     

乳酸菌原生质体融合筛选

对从市售酸乳中分离的嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌进行原生质体融合,用再生的菌落和原始菌进行发酵,筛选出凝乳好且产酸量高的融合子;再用高温法筛选耐热性好的融合子。实验结果显示用溶菌酶处理后得N2种菌的原生质体,在融合了3min后所涂的平板上长出了12株再生菌落,观察凝乳结果表明4、6、8号菌为凝乳快且好的融合子;从酸度测量结果分析得出4、5、6、8号菌为产酸量高的融合子;利用高温法依据菌的耐热性优点筛选出4号和8号菌的最高耐受温度为56℃。     

Improvement of the growth defect in salt- and ethanol-tolerant yeast mutagenized with error-prone DNA polymerization by using backcross cell fusion

Salt- and ethanol-tolerant mutants of Saccharomyces cerevisiae, isolated from the uracil-requiring mutant derived from Taiken No. 396 by proofreading-deficient DNA polymerization, showed less growth than their parent strain. The fusants, between these tolerant mutants and the lysine-requiring mutant from Taiken No. 396 obtained by the protoplast fusion, indicated improved growth.     

酿酒酵母与粟酒裂殖酵母融合子检出方法的研究

为了快速检出酿酒酵母与粟酒裂殖酵母的融合子,在双亲原生质体融合处理后,利用两亲本再生营养条件的差异及氧化邻苯二胺能力的不同,通过设计选择性底层培养基和鉴定性上层培养基,进行了融合子检出方法的研究,并确定了3株融合子。该方法简单易行,可用于酿酒酵母与粟酒裂殖酵母原生质体融合育种的研究。     

L.paracasei HD1-7与S.albulus1-25原生质体融合选育产天然防腐剂的优良菌株

为获得更具优良应用特性的微生物源天然防腐剂,采用原生质体融合技术,以Lactobacillus paracasei HD1-7和Streptomyces albulus1-25为亲株选育优良菌株,研究了L.paracasei HD1-7和S.albulus1-25原生质体制备与再生条件,通过表型、抑菌谱、抗药性和总DNA含量比较等手段筛选鉴定融合子,最终选育出3株以L.paracasei HD1-7为受体、获得来自S.albulus1-25的抑酵母菌基因的融合子。     

酵母融合子抗原性质表达的研究

通过动物免疫方法制备了啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和毕赤氏酵母(Pichia pastoris)的免疫血清，再通过原生质体融合技术得到酵母融合子，经血清学检测发现，单倍体融合子可稳定表达亲代两种抗原，而二倍体融合子亲代两种抗原表达不稳定。     

利用DOT-ELISA筛选酵母融合子

利用动物免疫方法制备了啤酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)和毕赤氏酵母 (Pichiapas toris)的免疫血清。将啤酒酵母和毕赤氏酵母单倍体化 ,通过原生质体融合技术促使其融合。融合后将再生菌落影印到硝酸纤维膜上分别和双亲免疫血清做Dot ELISA反应 ,呈现双阳性的即为双亲融合子。     

利用抗原标记选育酵母融合子

利用动物免疫方法制备了啤酒酵母(Saccharomyees cerevisiae)和毕赤氏酵母(Pichia pastois)的免疫血清.将啤酒酵母和毕赤氏酵母单倍体化、通过原生质体融合技术促使其融合.融合后再生菌落分别和双亲免疫血清做玻片凝集反应,呈现双阳性的即为双亲融合子.     

融合子生料发酵产酒精的研究

构建的融合子AK-2(K氏酵母与黑曲霉原生质体融合)在高细胞密度发酵的前提下,对免蒸煮生料发酵的一些特性指标及抑菌进行了探讨。结果表明:采用融合子AK-2进行高细胞密度生料发酵生产酒精的方法是可行的。     

A recombinant Saccharomyces cerevisiae strain for efficient conversion of lactose in salted and unsalted cheese whey into ethanol

For utilization of lactose in salted and unsalted cheese whey, intergeneric protoplast fusion between lactose nonfermenting, salt-tolerant Saccharomyces cerevisiae ATCC4126 and lactose fermenting Kluyveromyces lactis CBS683 was carried out. The fusion process gave rise to new hybrid yeast strains that revealed higher significant DNA contents than parental strains. The recombinants showed growth on either lactose or sucrose. The ethanol yields by some recombinants were 5.55% from sweet whey and 4.66% from salted whey containing up to 6% sodium chloride compared to 4.15 and 2.86% for parental K. lactis CBS683, respectively.