产漆酶真菌筛选及其固态发酵条件的初步研究

目的筛选产漆酶真菌,优化固态发酵培养基组成,研究粗酶的酶学性质.方法平板筛选获得菌株,通过测定漆酶活性优化培养基的组成.结果获得了固态发酵条件下产漆酶活性较高的菌株.优化后培养基的组成:豆粕和木屑比例1:1,木糖0.5%,酒石酸铵2.0%,培养基含水量65%.漆酶最适温度60℃,低于50℃时漆酶较稳定,最适pH 3.5,pH 6.5～9.0之间漆酶稳定性较好.结论得到了产漆酶活性较高的菌株,培养基优化后漆酶活性提高7倍.     

毛云芝菌固体发酵产漆酶的分离纯化及酶学性质

作者对毛云芝菌利用桑叶和麸皮固体发酵所产漆酶进行了分离纯化,并研究了纯化后漆酶的酶学性质。将毛云芝菌固体发酵漆酶粗提液通过离心、过滤、大孔树脂脱色、硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose fast flow层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析,结果得到电泳纯的漆酶,纯化倍数15.53,酶活回收率51.21%。用SDS-PAGE测得该酶相对分子质量62 600;该酶反应的最适温度为50℃,在柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中最适pH值为4.0,在醋酸缓冲液中最适pH值3.0;氧化ABTS的Km为0.093 mmol/L,对邻苯二酚的Km为3.71 mmol/L。     

产纤维素酶真菌的筛选及其酶学性质的研究

采用DNS法从土壤中分离出1株高产纤维素酶的真菌,将其命名为S5,经形态学初步鉴定为绿色木霉菌.研究结果表明,当碳源为羧甲基纤维素钠、氮源为硝酸铵时,产酶效果最佳,测得其滤纸酶活为200 U/mL.该酶最适反应温度为45℃,在温度为400℃～55%热稳定性较高,其最适反应pH值为5.5,在pH值为5.0～6.5时较稳定.     

耐热普鲁兰酶真菌的筛选、鉴定及酶学性质研究

本研究从西藏羊八井热泉下游淤泥中筛选得到了一株高产耐热普鲁兰酶菌株YBJ10-2,经诱导后其最高产酶量可达55.732U/mL,是目前国内外发现的产酶量较高的真菌。根据形态特征及18S rDNA序列同源性分析,初步判定菌株YBJ10-2属于球孢枝孢菌。该菌株发酵所产耐热普鲁兰酶在65-75℃和pH 5.0-8.0条件下较稳定,最适pH值为6.5,最适温度为72℃,对普鲁兰糖和支链淀粉催化能力最强,具有广阔的开发应用前景。     

真菌木聚糖酶产生菌的筛选及酶学性质研究

本实验通过土壤稀释涂布法,经过初筛、复筛,筛选出了两株酶活力较高真菌菌株C4 和G1,在此基础上对它们生长的最佳碳源选择、酶学性质进行了研究。结果表明：菌株C4 产酶的最佳碳源为玉米芯－麸皮,培养24h 就可以达到产酶高峰,其酶活力达6582.29U/ml。此酶反应最适温度为40℃,在50℃以下比较稳定,最适反应pH 值为5.0,并且pH 稳定性比较好;菌株G1 产酶的最佳碳源为玉米芯,培养96h 就可以达到产酶高峰,其酶活力到达6301.04U/ml。此酶反应的最适温度是40℃,在40℃以下比较稳定,最适反应pH 值为5.0,但pH 值稳定性不如菌株C4。     

漆酶高产菌株的筛选及产酶条件优化

以愈创木酚和α-萘酚为底物,采用平板筛选法从河南省各地采集到的土壤样品中分离获得8株产漆酶能力较强的真菌.根据变色圈的大小和颜色深浅挑选出产漆酶能力最强的WJ6菌株,鉴定表明为绿色木霉(Trichoderma viride).确定该菌株发酵产酶的最优条件为:以葡萄糖为碳源,以NH4Cl为氮源,反应温度30 ℃,pH=4.0,Cu2+添加浓度60 μmol/L,在此条件下培养7 d,漆酶活力最大,可达256.6 U/L.     

灵芝漆酶高产菌株的筛选及产酶诱导

通过对灵芝1个野生菌株和9个栽培菌株进行平板初筛和液体发酵复筛,得到一株漆酶高产菌株。以该菌株为研究对象,分别考察了不同浓度Cu2+和真菌诱导子对其产漆酶的影响。结果表明:在一定浓度范围内,Cu2+能够促进该灵芝菌株漆酶的生产,当Cu2+浓度为1.0 mmol/L时,灵芝漆酶的活性达到最高;真菌诱导子同样能够显著促进灵芝漆酶的生产,随着真菌诱导子浓度的升高,灵芝漆酶的活性也逐渐升高,当真菌诱导子浓度达到120μg/mL时,灵芝漆酶活性达到最高。     

高产漆酶菌株的筛选及其对工业废水脱色的效果

漆酶是一类含铜的氧化还原酶,本研究以漆酶产量为指标对十株菌进行了初筛,从中筛选出生长速度快、漆酶产量高的菌株.然后在含有关拉德反应色素、碱降解色素及焦糖色素的模拟废水中对其降解色素的能力进行检验.并使菌株在低营养、高色素的环境下驯化,获得了三株脱色率高、菌丝体生长量大及漆酶酶活高的优良菌株.结果表明:三株所筛选的优良菌...     

毛柄金钱菌漆酶的纯化与理化性质研究

本文通过盐析、超滤和DEAE-Sephadex A-25离子交换层析得到毛柄金钱菌漆酶,并对其理化性质进行了研究,考察了毛柄金钱菌漆酶最适宜反应温度和pH值、热稳定性和pH值稳定性、反应动力学常数、耐溶剂性质以及金属离子对酶活的影响。实验结果表明:毛柄金钱菌漆酶在60℃时酶活达到最大,最适反应温度为60℃,低于70℃时具有较好的热稳定性;该酶最适pH为4.0,在pH 4.0~4.5表现出较强的稳定性;毛柄金钱菌漆酶氧化ABTS的Km值为1.58×10-4mmol/L;乙醇、丙酮和二氧六环作溶剂时对毛柄金钱菌漆酶活性具有较强的抑制作用;Zn2+和Cu2+对漆酶有激活作用,而Fe2+、Fe3+则有明显的抑制作用。     

漆酶固定化及其性质研究

本文就漆酶的固定化及固定化酶的性质作了初步研究。利用明胶和海藻酸钠的聚合作用与海藻酸钙凝胶球的包埋作用制备固定化漆酶．结果表明：固定化酶米氏常数Km为12.0mg／ml，游离酶米氏常数Km为7．0mg／ml，固定化酶最适温度为40℃，游离酶为30℃．同时固定化酶明显提高了游离酶的耐热性、储藏稳定性和操作稳定性。     

Isolation of five laccase gene sequences from the white-rot fungus Trametes sanguinea by PCR, and cloning, characterization and expression of the laccase cDNA in yeasts

To obtain laccase-gene-specific sequences from the white-rot fungus Trametes sanguinea M85-2, a PCR screening method was used. Degenerate primers were designed based on highly conserved copper-binding regions I and IV of known laccases and used to amplify laccase sequences from T. sanguinea M85-2 genomic DNA. A single 1.6-kbp DNA band was amplified and cloned into a vector. Partial sequences of 21 clones were classified into five groups (lcc1-5) and the deduced amino acid sequences were all homologous to known laccase sequences. Based on the partial sequence of lcc1, the 5'-end of its cDNA was obtained by a PCR termed 5' rapid amplification of cDNA ends (5'-RACE), and RT-PCR was then carried out using the 5'-primer and the poly-dT primer to obtain the full-length lcc1 cDNA. The obtained cDNA encoded a protein consisting of 518 amino acid residues and its first 21 amino acid residues were predicted to be the signal peptide for secretion. The conserved characteristic structures of laccase, such as copper-binding ligands, N-glycosylation sites, and cysteine residues for disulfide bridges, were observed. The genomic DNA sequence of the lcc1 gene was also cloned by PCR method and the sequence revealed 10 introns. The lcc1 cDNA was inserted into yeast vectors for heterologous expression by Saccharomyces cerevisiae and Pichia pastoris. Phenol-oxidizing activity was detected from transformants of the yeasts, indicating that the obtained cDNA encodes a laccase. Previously, two laccase isozymes were biochemically characterized and purified from T. sanguinea M85-2. Using the sequential PCR method presented here, we have obtained partial sequences of at least five laccase genes and one cDNA clone encoding a protein with laccase activity but without any enzymatic information, suggesting that expressed enzymes under restricted conditions may not represent all the isozymes in target microorganisms. PCR cloning and heterologous expression of the cloned genes can be an alternative method of screening enzymes if these enzymes have conserved sequences.     

一株甲醇利用菌的分离、鉴定及特性研究

为了筛选高效利用甲醇的功能性微生物,从气化厂甲醇车间附近的土壤中分离筛选菌株,结合形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列对其进行鉴定,并对菌株生长及甲醇降解条件进行研究。结果表明,分离得到一株细菌,编号为4311,经鉴定为甲基球形菌属（Methylopila sp.）。该菌株最适生长条件为初始甲醇体积分数1.0%,初始pH值5.0,氯化钠添加量0.05%,氮源为蛋白胨,其添加量为2 g/L。在此优化条件下,菌株4311对1.0%（V/V）甲醇的降解率达到85%。     

一株高寒地区产纤维酶细菌的筛选、鉴定及酶学性质研究

从青海茶卡盐湖地区土壤中分离出一株产纤维素酶的细菌菌株,根据菌落形态特征以及16S rDNA序列分析,初步鉴定为琼斯氏菌属（Jonesia quinghaiensis sp.）。在25 ℃、初始pH值为7.0的发酵条件下,该菌株产酶量培养45 h达到最大值,发酵液酶活力为0.3 U/mL。酶学性质研究表明,该纤维素酶最适反应pH值为8.0,最适反应温度为35 ℃,在30～40 ℃的范围内保持60%以上的活性。金属离子Mn2+、Co2+和Cu2+对酶活力有较强的抑制作用,Ca2+具有显著的促进催化作用。     

稻米中蛋白体的分离纯化及表征

以糙米为原料,建立利用低浓度氢氧化钠从稻米胚乳中分离蛋白体的方法。以蛋白体体积分数为指标,得到蛋白体分离条件为：碱液浓度14 mmol/L、液料比12 mL/g、搅拌时间90 min、超声功率90 W、超声温度35℃和超声时间40 min,蛋白体体积分数达20.10%。再经0.1、5.0μm滤膜过滤及4.0 mol/L氯化钙去除残余淀粉,获得纯化的蛋白体。所得蛋白体呈微球形,有荧光;具有16、22、33、57 ku的蛋白亚基;X-衍射19.9°处显示β-折叠峰;红外1 464、1 534 cm^-1属于AmideⅡ带;拉曼1 303、1 651 cm^-1属于AmideⅢ和AmideⅠ带,均为蛋白质的特征吸收。因此,以低浓度氢氧化钠分离并经微孔滤膜和氯化钙纯化从稻米中获取蛋白体是可行的,这为研究稻米胚乳中蛋白体的结构和性质提供了方法学参考。     

茶渣硒蛋白的分离纯化及其性质研究

通过脱色、沉淀对茶渣硒蛋白提取物进行初步的分离纯化,并测定其硒有机化程度、氨基酸组成、功能特性及抗氧化活性。结果表明,最适脱色剂双氧水的脱色率可达(93.78±0.84)%;在最适沉淀点pH 3.5下制备硒蛋白样品,其中硒有机化程度为79.37%;经初步分离纯化后的硒蛋白提取物含有7种必需氨基酸其中6种含量高于WHO/FAO推荐值;溶解度最高达(52.99±1.59)%,乳化性、乳化稳定性、起泡性和泡沫稳定性分别为(60.16±1.61)%,(96.12±2.55)%,(17.56±1.90)%,(57.45±2.57)%;对DPPH、ABTS、羟基自由基均表现出不同程度的清除能力。     

年糕中微生物的分离纯化和鉴定

通过对发生腐败变质的真空包装年糕中微生物进行分离、纯化和反证得到2株细菌、3株酵母菌、1株霉菌。经过形态观察、生理生化、微生物鉴定系统等方法,初步鉴定2株细菌分属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、不动杆菌属(Acinetobacter sp.),3株酵母菌都属于假丝酵母属(Candida spp.),1株霉菌属于构巢曲霉(Aspergillus nidulans)。     

Isolation,purification, and characterization of the globulin from wheat germ

This research optimized the extraction and purification of globulin from wheat germ and assessed the molecular weight distribution and structure properties of the globulin obtained. The results showed that the relative extraction efficiency and purity of wheat germ globulin (WGG) reached 18.0% and 89.1% under the enzymolysis conditions of 0.32‰ α-amylase, pH 6.5, and 55 °C. The maximal precipitation rate of WGG (91.3%) was obtained with pH 4.3 (acid precipitation). Additionally, the molecular weight of WGG was mainly distributed below 70 kDa. FT-IR confirmed that random coils (30.95%), β-sheet (27.02%), α-helix (26.55%), and β-turn (15.48%) were the secondary structures of WGG. Furthermore, LTQ mass spectrometry showed that WGG was rich in variety and high in complexity, which retrieved 1274 proteins belonging to 392 proteomes by inverse peptide analysis. The findings endow a great potential of preparing WGG with superior functionality for food applications.     

牛乳骨桥蛋白的分离纯化及初步鉴定

离心脱脂后的牛乳,采用离子交换层析、疏水层析、透析等生物化学技术进行分离纯化,然后对分离纯化得到的产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹技术初步鉴定,得到相对分子量约为60kDa、具有活性的骨桥蛋白。主要阐述牛乳中骨桥蛋白的分离纯化及初步鉴定的方法,为骨桥蛋白功能性质的研究奠定了基础。      

真菌Simplicillium lanosoniveum抗生素的分离纯化和初步表征

以蓝藻的共生真菌Simplicillium lanosoniveum为研究对象,对其代谢产生的抑制革兰氏阳性菌的抗生素进行发酵条件的筛选、分离纯化和初步表征。通过单因素实验确定真菌Simplicillium lanosoniveum产生抗生素的最佳培养基为改良的沙氏培养基:蔗糖30.0 g/L和蛋白胨12.0 g/L;发酵曲线表明该抗生素的合成与菌体的生长关系为生长非偶联型;通过样品液的分离纯化以及初步表征确定该抗生素在254 nm处有最大吸收峰,以乙腈:0.02 mol/L的碳酸盐缓冲溶液(体积比为5∶95)为流动相时,其保留时间为4.1031 min,分子量为163.0182;双缩脲和茚三酮反应均呈阴性。该抗生素的发现为Simplicillium属的分类提供了理论依据。