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《中国生物制品学杂志》2014,(5)
<正>黑曲霉是发酵工业广泛应用的重要菌种,可产生葡萄糖氧化酶、纤维素酶、淀粉酶、果胶酶、葡萄糖酸、柠檬酸等重要物质,且产量较高。通过基因工程方法进行表达已成为提高产物产量主要的方法之一,而从黑曲霉中提取高纯度的DNA是基因克隆的前提条件。黑曲霉属于丝状真菌,因其细胞壁多糖与几丁质含量较高,细胞壁结构坚固,提取DNA的过程中破壁困难,对提取DNA的纯度与质量会造成一定的影响。目前,提取黑曲霉基因组DNA的方法较多,本实验旨在对实验室常用的5种快速提取黑曲霉基因组DNA的方法进行比较,为今后合理选择DNA提取方法及方法的改进提供实验依据。 相似文献
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为了从乙醇固定和福尔马林固定的对虾标本中获得高质量的基因组DNA,对标本的预处理方法以及DNA的提取方法进行了研究。结果表明,75%乙醇作为固定剂更适合用于提取对虾标本的基因组DNA。对乙醇固定的对虾标本采用PBS溶液和TE溶液进行预处理,获得的DNA得率较高,改进法、DTT法和CTAB法是较为理想的DNA提取方法。对于福尔马林固定的对虾标本来说,所选用的3种预处理方法均能为后期的DNA提取创造条件,而4种提取方法中的DTT法和CTAB法,则较为适宜提取福尔马林固定的对虾标本DNA,其中,GTE溶液预处理与DTT法相结合为最优组合方案。 相似文献
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一种从富含多酚多糖的西葫芦组织中快速提取RNA的方法 总被引:1,自引:0,他引:1
对比研究了一步法、尿素/氯化锂法、热酚法、LUG法等4种方法,建立了一种适合西葫芦组织RNA提取的改进的CTAB方法。用该方法从西葫芦叶中提取的RNA在琼脂糖凝胶电泳上清楚显示出28S和18S两条链.A250/280值为2.08、A250/280值为2.0,表明提取的RNA没有多酚、多糖、蛋白质污染;RNA产量为210μg·g^-1鲜质量;对RT—PCR的结果进行测序,通过NCBI—BLAST比对可知,与印度南瓜的同源性达89%。用该方法从西葫芦果肉中也获取了高质量的RNA。改进的CTAB法全程只需2h,不用液氮、亚精胺、二硫苏糖醇、蛋白酶K等试剂。 相似文献
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本文报道了一种源于Kado-Liu法经系列改进后产生的大质粒DNA检测与提取方法。改进之处主要是:裂解液组成中的Tris度为500mM,pH值为12.8~13.0;蛋白质的抽提除了酚—氯仿外同时使用了适量的醋酸钠(3M pH4.8)溶液;以异丙醇室温静置30分钟左右,取代冷乙醇较长时间的低温处理,进行DNA浓缩。该方法在肠道菌方面的应用中,显示了其简易、快速和较好的重复性。另外,用930~950μl新鲜10N NaOH液使裂解液pH值为最佳的经验值,既可避免因不同类型pH计产生不同结果的麻烦,亦为该方法能在普通实验室推广应用提供了方便。 相似文献
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目的建立碘化钾快速提取外周血基因组DNA的方法。方法采用碘化钾法和酚/氯仿提取法,直接从人外周血中提取基因组DNA,并以此为模板,进行人类生长激素(HGH)基因片段的扩增及鉴定。结果此方法提取的DNA量大,DNA体外扩增结果稳定。结论该方法较传统酚/氯仿提取基因组DNA法快速、简便、经济,可用于PCR模板DNA的制备。 相似文献
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落叶松(larix gmelinii R.)阿拉伯半乳聚糖(AG)具有免疫、抗肿瘤等药理活性,对其提取及纯化方法的研究具有重要意义.不同分离方法各具特色,综述了落叶松中AG的不同提取及纯化方法,以期为该糖的提取及纯化提供一定参考.其中温水抽提法效率较低,但由于抽提条件温和至今仍有较多应用;闪式提取、超声及微波辅助提取法... 相似文献
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高压处理法萃取鱼皮明胶 总被引:1,自引:1,他引:0
将250和400MPa高压处理10或20min用于制胶的两个阶段之一:在10℃下作酸预处理以促进酸易变交联的破坏;或在45℃水中进行萃取(提胶)以加速胶原的水解。测定所得明胶的萃取产出率、分子量分布(SDS-PAGE法),和新溶解的与冷成熟过夜的明胶的黏弹性质。压力的大小和处理的时间诱导分子量分布出现易察觉到的变化,结果影响到其黏弹性质。鱼皮明胶的高压萃取是一种有用的替代常规操作的工艺,其效用基本上在于能使工艺中最长的处理阶段得以大大地缩短,以致能在短短的几分钟内制得具有高凝冻性能的明胶。 相似文献
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烟曲霉分泌蛋白质提取方法的比较 总被引:1,自引:0,他引:1
目的比较3种丝状真菌烟曲霉分泌蛋白质的提取方法,并通过双向凝胶电泳对提取的蛋白质进行分离。方法利用TCA沉淀、丙酮沉淀及TCA-丙酮沉淀法分别提取烟曲霉的分泌蛋白质,SDS-PAGE比较其结果,初步确定最佳提取方法,并利用双向凝胶电泳分离提取的蛋白质。结果TCA-丙酮沉淀法提取的蛋白质浓度最高,种类和数量最多,双向凝胶电泳显示蛋白质点聚合较好,无非特异的条带和杂质,背景透明。结论TCA-丙酮沉淀法提取的烟曲霉分泌蛋白质图谱较好,为丝状真菌分泌蛋白质的研究奠定了基础。 相似文献
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《分离科学与技术》2012,47(1):64-70
Solvent extraction, ultrasound assisted extraction (UAE), and microwave assisted extraction (MAE) were examined for the extraction of astaxanthin from Haematococcus pluvialis. In all cases, acetone was found to give the highest astaxanthin recovery compared with other selected solvents, i.e., methanol, ethanol, and acetonitrile. Among the various methods, MAE at 75°C for 5 min resulted in the highest astaxanthin recovery (74 ± 4%). 相似文献