麒麟菜多糖对H22肝癌移植瘤的抑制作用研究

以常温稀碱法提取的麒麟菜多糖(Eucheuma gelatinae polysaccharides,EGP)饲喂H22荷瘤小鼠,探讨其对小鼠移植性实体瘤的抑制作用。实验考察了肿瘤抑制率和免疫器官指数,分析荷瘤小鼠的脾淋巴细胞(T淋巴细胞与B淋巴细胞)增殖能力、脾NK细胞杀伤活性和腹腔巨噬细胞吞噬能力等免疫指标,并对外周血淋巴细胞亚群进行流式(FCM)检测。研究结果表明,以麒麟菜多糖灌胃荷瘤小鼠能够显著抑制小鼠体内肿瘤的生长,至实验期结束时,麒麟菜多糖低剂量组[300 mg/(kg·d)]及高剂量组[600mg/(kg·d)]的抑瘤率分别达到31.17%及59.67%。与模型组相比,麒麟菜多糖还能够显著增强荷瘤小鼠脾淋巴细胞的增殖能力和NK细胞的杀伤活性,并显著提高腹腔巨噬细胞的吞噬活性。此外,麒麟菜多糖高剂量组能显著提高荷瘤小鼠CD3+和CD8+细胞比例(p0.05)。麒麟菜多糖能够改善荷瘤小鼠机体的免疫水平,具有显著的抗肿瘤作用。     

硒酸软骨多糖抑制荷瘤小鼠肝癌细胞Hca-F生长的初步研究

本文以615近交系小鼠右脚垫皮下注射肝癌细胞Hca-F建立实体瘤动物模型,设空白组、模型组、治疗组和预防组,检测小鼠抑瘤率、脾指数及胸腺指数,进行瘤组织的石蜡切片HE染色及免疫组化SP法检测肿瘤组织Fas和PCNA蛋白表达,研究了硒酸软骨多糖抑制荷瘤小鼠肝癌细胞Hca-F生长的作用。结果表明:硒酸软骨多糖能够明显的抑制肝癌细胞Hca-F的生长,且预防组的抑瘤率显著高于治疗组;通过比较模型组、治疗组和预防组的瘤组织的石蜡切片HE染色,治疗组和预防组的瘤组织大量坏死,且预防组的情况更好于治疗组;治疗组和预防组肿瘤组织的Fas蛋白阳性表达率较模型组Fas阳性表达率明显增高,而治疗组和预防组的PCNA蛋白阳性表达率较模型组明显降低。因此,硒酸软骨多糖一定程度上能够抑制肝癌细胞Hca-F的生长,且在一定程度上预防肝癌的发生,为开发治疗恶性肿瘤的药物提供了选择。     

丹参酮对肝癌细胞在体内外生长的抑制作用

目的:探讨丹参酮在细胞水平和动物体内对肝癌细胞的抑制作用。方法:采用体外抑瘤实验培养人肝癌细胞Bel-7402,通过MTT法检测其体外抑瘤率;体内实验采用肝癌H22移植瘤法,以抑瘤率、胸腺指数和脾指数为指标,探讨丹参酮的抑瘤作用。结果:细胞实验表明,丹参酮在100μg/m L时抑瘤效果最佳,抑瘤率为(81.95±1.33)%。丹参酮在40、80、120 mg/kg时,对H22实体瘤的抑制率分别为29.70%、45.09%和49.13%。丹参酮在120 mg/kg时小鼠的脾指数和胸腺指数明显高于模型组(P<0.05)。结论:丹参酮对肝癌细胞在体内外均有一定的抑制作用。     

猪软骨多糖对滚瓶培养MCF-7细胞的诱导凋亡作用及其差异表达蛋白的初步研究

本文研究了人乳腺癌细胞MCF-7在滚瓶培养形成大量细胞聚集体时,猪软骨多糖对MCF-7的诱导凋亡作用,并初步研究了其凋亡前后的差异表达蛋白。采用Hoechst 33342/PI染色于共聚焦显微镜下观察细胞的凋亡特征;Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞周期的变化;并提取MCF-7细胞的全蛋白,利用二维凝胶电泳(2-DE)结合MALDI-TOF质谱技术检测差异表达蛋白。结果表明:MCF-7细胞在猪软骨多糖作用后出现典型的凋亡现象,通过流式细胞仪检测发现在猪软骨多糖作用12 h,24 h的MCF-7凋亡率分别为20.23%和44.7%;同时发现MCF-7细胞在猪软骨多糖作用后,细胞周期被阻滞在了S期;初步鉴定出2个差异表达蛋白,其中一个为肌动蛋白actin,另一个为抗氧化类蛋白PRDX6。     

软骨多糖通过线粒体途径诱导L1210细胞凋亡

研究了软骨多糖诱导L1210细胞发生凋亡的具体机制。采用TUNEL检测细胞凋亡,化学发光法及免疫印迹法检测Caspase-8、Caspase-9及Caspase-3/7酶活性变化,细胞免疫荧光检测Bax/Bcl-2蛋白变化。结果表明软骨多糖可促进L1210细胞发生凋亡,提高Bax/Bcl-2的比率,活化了Caspase-9和Caspase-3蛋白酶,而Caspase-8蛋白酶活性无变化。这些结果表明软骨多糖诱导L1210细胞通过线粒体途径发生了凋亡。     

硒酸软骨多糖对K562细胞线粒体膜电位及凋亡的影响

本文研究了硒酸软骨多糖(CA-Se)对K562人慢性髓源白血病细胞线粒体膜电位的影响,及对K562细胞的凋亡诱导作用。采用MTT比色法测定CA-Se对K562细胞的增殖抑制作用;Hoechst 33342/PI染色后于显微镜下观察细胞的形态变化;罗丹明-123染色后用流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位的变化;采用免疫荧光法检测caspase-9蛋白表达水平,并用RT-PCR检测其基因的表达。结果表明:CA-Se可显著抑制K562细胞的增殖,且具有浓度依赖性和时间依赖性;经CA-Se作用后,细胞形态发生明显改变,细胞体积变小,细胞膜变得不规则,染色质固缩;对照组与CA-Se处理组的线粒体膜电位分别为96.10%和78.07%,膜电位下降;CA-Se处理后,K562细胞中caspase-9蛋白表达显著增加,其基因表达水平显著上升。说明硒酸软骨多糖可通过降低细胞线粒体膜电位,上调凋亡起始酶caspase-9的基因表达,激活caspase-9蛋白来诱导K562细胞凋亡。     

猪软骨多糖作为免疫佐剂的肝癌疫苗激发抗肿瘤细胞免疫

探讨以猪软骨多糖作为免疫佐剂的肝癌疫苗对小鼠细胞免疫抗肿瘤的影响.以猪软骨多糖作为免疫佐剂,采用共同培养的方法制备小鼠肝癌H22细胞全细胞肝癌疫苗,免疫小鼠后,分别以脾淋巴细胞、巨噬细胞为对象检测肝癌疫苗对小鼠机体细胞免疫的影响.结果表明,以猪嗽骨多糖为免疲佐剂的全细胞肝癌疫苗能明显刺激脾淋巴细胞活化、增强巨噬细胞的吞噬能力.以猪软骨多糖为免疫佐剂的肝癌疫苗能增强机体的细胞虎疫,为软骨多糖用于肿瘤的免疫治疗和免疫预防提供了试验依据,为进一步的临床免疫治疗肿瘤奠定了基础.     

蛹虫草子实体多糖对腹水型肝癌移植瘤超微结构的影响

目的:研究蛹虫草多糖(CMPS)对小鼠移植型腹水型肝癌(H22)体内诱导肿瘤细胞凋亡作用,探讨其抑瘤作用机制。方法:建立H22移植瘤小鼠模型,采用电镜技术观察H22荷瘤小鼠肿瘤组织的超微结构改变;免疫组织化学法检测蛹虫草多糖作用后H22肿瘤组织细胞内P53蛋白的表达情况。结果:电镜观察到蛹虫草多糖作用后H22肿瘤组织细胞有早期凋亡改变,肿瘤组织内有凋亡细胞存在;免疫组化实验结果显示,蛹虫草多糖作用后H22小鼠肿瘤组织细胞突变型P53蛋白的表达水平降低。结论:蛹虫草多糖具有诱导小鼠H22肝癌细胞凋亡作用,促凋亡作用可能与其降低H22小鼠肿瘤组织细胞内突变型P53蛋白的表达有关。      

蛹虫草子实体多糖对腹水型肝癌移植瘤超微结构的影响

目的:研究蛹虫草多糖(CMPS)对小鼠移植型腹水型肝癌(H22)体内诱导肿瘤细胞凋亡作用,探讨其抑瘤作用机制。方法:建立H22移植瘤小鼠模型,采用电镜技术观察H22荷瘤小鼠肿瘤组织的超微结构改变;免疫组织化学法检测蛹虫草多糖作用后H22肿瘤组织细胞内P53蛋白的表达情况。结果:电镜观察到蛹虫草多糖作用后H22肿瘤组织细胞有早期凋亡改变,肿瘤组织内有凋亡细胞存在;免疫组化实验结果显示,蛹虫草多糖作用后H22小鼠肿瘤组织细胞突变型P53蛋白的表达水平降低。结论:蛹虫草多糖具有诱导小鼠H22肝癌细胞凋亡作用,促凋亡作用可能与其降低H22小鼠肿瘤组织细胞内突变型P53蛋白的表达有关。     

大豆皂甙对肝癌H22小鼠的抗肿瘤研究

以肝癌H22荷瘤小鼠为模型,观察大豆皂甙级分SS Ⅱ对H22抑瘤率、细胞免疫以及抗氧化水平的影响.结果表明,大豆皂甙能显著抑制移植性肿瘤H22的生长,同时能显著提高迟发型超敏反应强度,促进T淋巴细胞增殖和NK细胞活性.抑制H22生长的同时能降低荷瘤小鼠肝中MDA含量,升高SOD活性.大豆皂甙增强H22荷瘤小鼠细胞免疫功能和提高机体抗氧化能力是其抑制肿瘤效应的机制.     

海湾扇贝多肽对小鼠H22肝癌移植瘤的抑制机制研究

探讨海湾扇贝多肽(polypeptide from bay scallop,PBS)对小鼠H22肝癌移植瘤的抑瘤作用及机制。将50只KM小鼠随机分为正常对照组、H22肝癌模型组和PBS低、中、高剂量组共5组,按试验设计进行体内灌胃试验。结果显示,低、中、高剂量组的抑瘤率分别为28.16%、41.93%和84.00%,具有量效依赖趋势。与模型组相比,三剂量组小鼠血清中突变型p53、Survivin、8-iso-PGF2α和MDA的水平均有所降低,而IL-2、GSH-Px、SOD和TNF-α的水平均有所升高,且中剂量组较其他两组效果更明显;三剂量组小鼠肝脏组织提取液呈现相同变化趋势。肿瘤组织病理学观察也表明PBS有较好的抗肿瘤生物学效应。PBS对小鼠肝癌H22细胞具有明显的抑制作用。     

硒酸软骨多糖对Hca-F实体瘤组织凋亡相关蛋白表达情况的研究

研究硒酸软骨多糖对Hca-F实体瘤组织凋亡相关抗体表达情况的影响。以615近交系小鼠右脚垫皮下注射肝癌细胞Hca-F建立实体瘤动物模型,设空白组、模型组、治疗组和预防组,检测小鼠肿瘤的生长以及硒酸软骨多糖对Hca-F实体瘤Bcl-2蛋白、细胞因子CyclinD1和p21蛋白、基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9蛋白表达情况的影响。结果表明,硒酸软骨多糖对小鼠的肿瘤生长有抑制作用;治疗组和预防组Bcl-2蛋白的阳性表达率显著低于模型组,治疗组和预防组的CyclinD1、MMP-9和MMP-2蛋白的阳性表达率较模型组相比显著降低,而p21则显著升高。通过对Hca-F实体瘤组织凋亡相关蛋白表达的检测,说明硒酸软骨多糖能够有效地抑制小鼠肿瘤的生长,能够在一定程度上预防癌症的发生,对癌症的治疗有一定的效果。     

Immunizing effects of cocultures of H22 hepatocarcinoma cells and cartilage polysaccharide on murine H22 hepatocarcinoma

Hepatocarcinoma is a malignant cancer, which is threatening human lives. In order to disclose the immunizing effects of the cells and cartilage polysaccharide (CHCP) on liver cancer, murine H22 hepatocarcinoma model was set up. The survival time, life span, and survival rate of the CHCP group were better than model group or other groups which was immunized with cartilage short-chain polysaccharide (CPS) only or H22 cell lysate only. A series of experiments were proceeded and the results confirmed that the humoral immunity and cellular immunity were strengthened. HE staining, TUNEL assay, and Alcian staining were used to research the mechanism of the tumor specific antigen production which may be related to the apoptosis of H22 hepatocarcinoma cells induced by CPS or some new polysaccharide compound emerged. The animal experiment testified the relationship between H22 hepatocarcinoma cell apoptosis induced by CPS and the effect of murine H22 hepatocarcinoma immunoprophylaxis. Our data demonstrated that the coculture of cartilage polysaccharide and cancer cells may serve as a novel source of antihepatocarcinoma agent that may play an important role in future liver cancer immunoprophylaxis.     

软骨多糖对小鼠Ca761乳腺癌血管生成的影响

目的是研究软骨多糖对小鼠Ca761乳腺癌肺转移的抑制作用及其对血管生成的影响.方法是建立615近交系小鼠乳腺癌肺转移模型,设模型组和治疗组.检测软骨多糖肺转移抑制率、肺部石蜡切片HE染色观察肿瘤侵袭情况、免疫组化CD34观察瘤组织微血管密度(MVD)以及VEGF蛋白表达.结果表明,软骨多糖肺转移抑制率达44.4%;通过肺部HE染色发现治疗组转移情况明显低于模型组;免疫组化检测结果显示治疗组CD34蛋白标记的MVD、VEGF蛋白表达水平均低于模型组.可见软骨多糖能明显抑制小鼠Ca761乳腺癌的血管生成,从而抑制肿瘤转移,与软骨多糖能够下调瘤组织VEGF蛋白表达有关.     

软骨多糖在制备肿瘤疫苗中的初探

通过建立动物模型优化疫苗制备条件,检测小鼠的免疫器官和脾淋巴细胞增殖情况,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测L1210细胞蛋白变化,研究了软骨多糖(PS)在制备肿瘤疫苗中的应用。研究表明,培养48h的软骨多糖和细胞共混合物(PScell48h)对健康小鼠的免疫效果最好,使小鼠的免疫器官得到保护,并且显著提高了小鼠的体液免疫,对细胞免疫也有较好的刺激作用,通过细胞免疫荧光检测到特异性的抗体,推测可能是软骨多糖诱导48h后抗原蛋白的变化使小鼠机体产生较强的抗肿瘤免疫。     

软骨多糖治愈的S180荷瘤小鼠免疫功能的初步研究

目的:研究软骨多糖治愈的S180荷瘤小鼠的免疫功能及灭活S180细胞对小鼠免疫功能的影响,分析其免疫机制.方法:用MTT法测定软骨多糖治愈的S180腹水瘤小鼠的血清、脾细胞及胸腺细胞对S180细胞和MCF-7乳腺癌细胞的生长影响,并以灭活的S180细胞对健康小鼠免疫,观察其对小鼠免疫功能的影响.结果:软骨多糖治愈的S180荷瘤小鼠的血清、脾细胞及胸腺细胞对肿瘤生长均有一定抑制效果.其中在不含胎牛血清的RPMI 1640培养基培养下,治愈小鼠10 %的血清对S180细胞和MCF-7乳腺癌细胞的抑制率分别为64.09 %、73.48 %,而其20 %血清对两种肿瘤细胞的抑制率则分别为88.70 %、96.80 %.结论:软骨多糖治愈的S180荷瘤小鼠对肿瘤有一定的免疫能力.