细菌BK2产壳聚糖酶的发酵条件及壳寡糖的制备

优化了菌株BK2发酵产壳聚糖酶的条件:葡萄糖20 g/L,壳聚糖0.3 g/L,硝酸铵15 g/L,接种量1.5%(107cell/mL),发酵起始pH 6.0,发酵温度30℃,培养时间48 h.BK2发酵液中的壳聚糖酶活力可达到1.29 U/mL.用酶液降解壳聚糖,分离提取粗产品,采用薄板层析法进行组分分析.分析结果表明,壳聚糖已被降解成含有不同分子质量的壳寡糖混合物.     

不同酶切方式制备的壳寡糖抑菌活性的研究

壳寡糖可以抑制多种病原微生物的生长，其抑菌活性与其数均相对分子质量有密切关系.由专一性的壳聚糖混合酶、内切酶和外切酶降解制备3种不同数均相对分子质量的壳寡糖C-1、C-2和C-3样品，通过抑制生长速率的方法，研究了3种壳寡糖对几种常见植物病原菌的拮抗作用，并采用抑菌圈法测定了壳寡糖对植物病原菌的最低抑菌质量浓度.结果表明，C-1和C-2都有较好的抑菌活性，C-2的抑菌活性明显优于C-1，C-3基本上没有抑菌活性，反而促进了植物病原菌的生长.抑菌效果因壳聚糖酶的酶切方式、壳寡糖的质量浓度和供试菌种而异.     

产壳聚糖酶菌株的诱变育种及其产酶条件研究

通过在培养基中加入不同种类的抗生素,对壳聚糖酶产生菌株Penicillium sp.ZD-Z1进行筛选,再经紫外诱变得到一株产酶活力较强的菌株,活力为0.58 U/mL.采用三因素(温度、pH、转速)四水平正交分析,所得到菌种最适产酶培养条件为:28℃、培养基初始pH4.5、摇瓶培养转速190 r/min.用发酵粗酶液对4%壳聚糖(相对分子质量290 000)水溶液进行降解实验,水解24 h后测得黏均相对分子质量为1 920,降解效果显著.     

优质壳聚糖/壳寡糖的制备工艺及水溶性壳寡糖Fe(Ⅲ)配合物的合成

以皮皮虾壳作基本原料,分别采用稀盐酸、稀碱溶液浸泡,除去虾壳中的钙质等无机质和蛋白等有机成分,以浓碱脱除甲壳素上的乙酰基,制得壳聚糖.再以其为原料,采用H2O2氧化降解法得到水溶性壳寡糖.将所制水溶性壳寡糖加入到氯化铁溶液中,设定各项条件,使二者进行配位反应.经系列实验证实,得出制备高脱乙酰度壳聚糖最适宜条件为:温度85℃,时间9 h,NaOH质量分数45%,料液比1∶300.所得产品脱乙酰度为89.6%,收率(壳聚糖/甲壳素)为73.1%,其他各项指标也均为优良级.制备水溶性壳寡糖最适宜条件为:温度65℃,时间6 h,醋酸质量分数4.0%,H2O2质量分数4.0%,产品平均粘均分子质量为2.9 ku,外观为淡黄色粉末,溶解性能优良.通过对FT-IR和UV谱图的分析,证实了水溶性壳寡糖Fe(Ⅲ)配合物的生成.     

绿色木霉(Trichoderma viride)867产壳聚糖酶的发酵工艺条件的优化

系统研究了碳源、氮源、初始pH、培养温度、培养基装液量、接种量和培养时间等因素对绿色木霉867产壳聚糖酶的影响.结果表明,最佳碳、氮源分别为可溶性壳聚糖和蛋白胨,在初始pH5.0,培养温度28℃,培养基装量75 mL/250 mL,接种量6%和培养时间(180 r/min)40 h时最利于产酶.在此基础上通过均匀设计法优化了发酵培养基配方.优化后的培养基配方为:可溶性壳聚糖0.9%,氨基葡萄糖0.5%,蛋白胨0.9%,K2HPO40.016%,CaCl2.2H2O 0.055%.在该条件下,壳聚糖酶活为0.291 u/mL,比原基础培养条件下酶活提高29.9%.     

产壳聚糖酶菌株的筛选、鉴定及酶学特性分析

利用筛选的肠杆菌发酵生产壳聚糖酶,对培养温度、pH和接种量进行优化,确立中心位点后进行响应面设计分析,确定最优发酵培养条件。结果表明：最佳培养工艺条件为培养温度31.74℃、pH 6.5和接种量为7.26% (V/V),培养36 h时壳聚糖酶活性达到13.59 U/mL,实际值与预测值之间的误差约为0.43%。壳聚糖酶的生产方式为延续合成型,具有深入优化并规模生产的潜力。     

响应面分析法优化肠杆菌的发酵条件生产壳聚糖酶

利用筛选的肠杆菌发酵生产壳聚糖酶,对培养温度、pH和接种量进行优化,确立中心位点后进行响应面设计分析,确定最优发酵培养条件。结果表明：最佳培养工艺条件为培养温度31．74℃、pH6．5和接种量为7．26％（V/V）,培养36h时壳聚糖酶活性达到13．59U／mL,实际值与预测值之间的误差约为0．43％。壳聚糖酶的生产方式为延续合成型,具有深入优化并规模生产的潜力。     

假单胞菌Y8产壳聚糖酶的培养条件

对假单胞菌Y8产壳聚糖酶培养条件进行研究，得到一个比较优化的培养条件为：pH值6．5，温度32℃，壳聚糖3g／L，酵母膏质量分数0．3％，培养时间3d．不同金属离子及不同诱导物对酶合成的影响表明：Fe^2 激活作用显著，而Mg^2 ，Zn^2 ，Mn^2 则具有一定的抑制作用，壳聚糖和氨基葡萄糖对壳聚糖酶的产生都有较好的诱导作用。     

大豆蛋白-壳寡糖聚合物的酶促合成及凝胶性质

采用转谷氨酰胺酶促反应合成大豆蛋白-壳寡糖聚合物,并对大豆蛋白-壳寡糖聚合物进行凝胶性质与微观结构分析。结果表明,酶促反应最适条件为:反应温度37℃,酶添加量10U/g,糖与蛋白质量比0.8,蛋白质量浓度6mg/mL,反应时间3h。在此条件下,酶促合成聚合物的接枝率为57.49%;制备聚合物的热致凝胶硬度、弹性与蛋白凝胶基本相同,但其酸化凝胶的硬度、弹性、保水性明显高于大豆蛋白酸凝胶。     

酶法制备壳低聚糖的工艺研究

用酶降解法对壳聚糖进行降解，制备壳低聚寡糖，研究了温度、pH值、底物浓度等对酶促反应的影响。结果表明：降解的最佳温度和pH值分别为45℃和5．0，最佳底物浓度为4mg／mL。采用溶剂分离法对降解产物进行分离，分别得到了聚合度为1～8、8～16的壳聚寡糖和聚合度16以上的壳聚糖。     

假单胞菌H3壳聚糖酶的固定化研究

分别采用纳米CaCO3吸附法、聚丙烯酰胺(PAG)包埋交联法和DEAE-22纤维素交联法固定化假单胞菌H3壳聚糖酶,结果表明:以DEAE-22纤维素为载体、戊二醛为交联剂的固定化方法较优,酶活保留率达91.4%;此外,还确定了DEAE-22纤维素交联法的固定化条件为:DEAE-22纤维素载体0.5 g,3.5%戊二醛交联剂20 mL,给酶量为15 mg,固定化温度为4℃,固定化时间为12h;壳聚糖酶在经固定化后,最适温度为50℃,最适pH为4.5,并表现出比游离酶更高的热稳定性,固定化酶的米氏常数Km值为14.29 g/L;将该固定化酶重复使用12次,固定化酶的活力降低到75%,具有较好的操作稳定性.     

酶法制备壳低聚糖的工艺研究

用酶降解法对壳聚糖进行降解,制备壳低聚寡糖,研究了温度、pH值、底物浓度等对酶促反应的影响。结果表明:降解的最佳温度和pH值分别为45℃和5.0,最佳底物浓度为4mg/mL。采用溶剂分离法对降解产物进行分离,分别得到了聚合度为1～8、8～16的壳聚寡糖和聚合度16以上的壳聚糖。     

壳聚糖与己内酯接枝材料膜的制备及性能研究

将己内酯低聚物成功地接枝到壳聚糖分子上，制备出一种新型的壳聚糖材料膜，用化学分析及红外光谱表征结构，并测试了相关性能，结果表明，在一定温度及催化剂下，已内酯低聚物与壳聚糖分子接枝混杂，形成的材料膜改善了壳聚糖膜的脆性，并显示出良好的降解性。     

餐饮废水高效降解蛋白菌株的分离筛选及诱变选育研究

从龙潭山宾馆厨房排污口分离得到11株产蛋白酶菌株,培养相同时间测定蛋白质降解率,从中筛选出一株蛋白质降解率高的菌株P4.通过基本的生理生化性质的测定,初步鉴定为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium).通过紫外诱变提高菌株的产蛋白酶能力,在发酵时间为120 h的前提下,蛋白质降解能力约提高10.96%.利用正交试验确定蛋白质最佳降解条件:酵母膏最优浓度为2.5 g/L,葡萄糖最优浓度为5.0 g/L,Cu2+最优浓度为1.0 g/L,最优装样量为40%.     

壳聚糖酶的分离纯化及其特性研究

通过硫酸铵分级盐析、Sephadex G-25凝胶过滤层析、DEAE Cellulose 52离子交换层析,将曲霉TCCC45017产的壳聚糖酶进行纯化,纯化倍数为57.21,回收率为26.55%,比活力提高至587.55 U/mg.经过SDS-PAGE电泳测得其分子质量为3.75×104 u.该酶作用的最适温度为55℃,最适pH为5.5,50℃以下保温1 h内酶的热稳定性较好,pH稳定范围为5.5～7.0,添加金属离子Mg2＋、Ca2＋、Ba2＋、Mn2＋对该酶有激活作用,Cu2＋、Fe2＋、Zn2＋、Al3＋则对酶有抑制作用.     

高效表达AIM工程菌的发酵培养基及发酵条件优化

为了进一步提高工程菌的载脂蛋白AI米兰突变体（AIM）的表达量,降低发酵成本,通过碳氮源优化实验并结合正交实验筛选出该工程菌产A1M的最适培养基为（g／L）：蔗糖10,酵母粉10,硫酸铵6和NaCl10;最适发酵条件为：装液量30mL,接种量8％,诱导时机A600 1．0,诱导剂浓度0．8mmol／L,诱导时间6h．在此优化的条件下,A1M的表达量为2．26g/L,是未优化条件下的1．58倍．