两种方法制备氟苯尼考人工抗原及其鉴定

目的：通过两种不同方法制备氟苯尼考人工抗原并将制备的人工免疫原用于动物免疫。方法：分别采用琥珀酸酐法和强碱水解法制备两种人工半抗原(HP1 和HP2)。将两种半抗原与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)通过活泼酯法和戊二醛法进行偶联,制备人工免疫原和人工包被原,分别命名为HP1-BSA、HP1-OVA、HP2-BSA 和HP2-OVA。分别将两种方法合成的人工免疫原用于动物免疫,用两种人工包被原对获得的两种抗血清进行评价。结果：经质谱、紫外光谱表征,氟苯尼考两种半抗原均合成成功,并且与载体蛋白的偶联比分别为12.4:1(HP1-BSA)、8.5:1(HP1-OVA)、21.8:1(HP2-BSA)、15.4:1(HP2-OVA)。动物实验结果表明,获得的针对HP1-BSA的抗血清与HP2-OVA 包被原结合最为灵敏。结论：活泼酯法和戊二醛法均成功制备了氟苯尼考人工抗原。     

盐酸西布曲明人工抗原的合成与鉴定

目的：建立盐酸西布曲明的免疫分析方法。方法：4-氯苯乙腈和1, 3-二溴丙烷为原料合成与盐酸西布曲明具有相同母核结构的小分子双去甲基西布曲明(M2),以双去甲基西布曲明为半抗原,并分别通过活泼酯法、戊二醛法和混合酸酐法将半抗原与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫原(M2-BSA)和包被抗原(M2-OVA)。结果：紫外光谱扫描证明半抗原M2与载体蛋白偶联比为24.6:1(M2-BSA)和16.2:1(M2-OVA),抗血清ELISA效价均达到1:8000以上,IC50=0.42μg/mL。结论：半抗原M2与载体蛋白均已成功偶联,其中活泼酯法对半抗原活性基团的影响最小,合成人工抗原的特异性最强。     

泰拉霉素完全抗原的合成和鉴定

利用丁二酸酐法对泰拉霉素的羟基衍生化,引入游离羧基,合成泰拉霉素半抗原。采用活泼酯法将泰拉霉素半抗原分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)偶联,合成人工完全抗原泰拉霉素-BSA和泰拉霉素-OVA。利用LC-MS鉴定衍生化后半抗原的合成,利用荧光光谱、考马斯亮法鉴定完全抗原的合成。用泰拉霉素-BSA免疫小鼠,采用间接ELISA法测定小鼠抗血清效价。泰拉霉素半抗原和BSA的偶联比为17∶1。三免后小鼠抗血清效价可达1∶8 000。     

百菌清人工抗原的制备与鉴定

以杀菌剂百菌清为起始反应物,通过两步化学反应合成百菌清的衍生物(半抗原);采用活化酯法与混合酸酐法分别将半抗原与载体蛋白(牛血清蛋白、卵清蛋白)进行偶联,制备百菌清的人工抗原,同时通过免疫新西兰大白兔获得抗血清,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定其效价。利用红外光谱(IR)、质谱(MS)、核磁共振波谱(NMR)对百菌清半抗原进行表征,并用紫外扫描的方法对人工抗原进行鉴定。结果表明,成功制备出百菌清半抗原及人工抗原,并且半抗原与载体蛋白的偶联比分别为27.86:1 和12.32:1,抗血清效价约为1:1.28 × 104。     

黄曲霉毒素B1人工抗原的合成及鉴定

采用衍生化在黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1）上引入羧基合成AFB1羧甲基活化物,通过N-羟琥珀酰亚胺酯(N-hydroxy-succinimide NHS）法将AFB1O与牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备黄曲霉毒素B1完全抗原AFB1-BSA。ECI-MS和紫外光谱法的鉴定结果表明目标半抗原合成成功。结合紫外分光光度法和回归方程,分别测得不同浓度的半抗原和蛋白质线性曲线为：Y=0.1440X+0.0103,R2=0.9986;Y=0.0059X+0.0808,R2=0.9889。偶联物中半抗原和蛋白质的浓度分别为186.32 μg/mL、6127.46 μg/mL,即求得抗原分子结合比为5.13:1,从而为制备抗AFB1抗体奠定基础。     

隐孔雀石绿半抗原与全抗原设计、合成及鉴定

从偶联位点、偶联活性基团的性质及半抗原的合成与偶联方法分析,设计了系列不同结构的半抗原和人工抗原及其合成方法.以N,N-二甲基苯胺、苯甲醛衍生物为原料,Amberlyst 15树脂为催化剂,在温和条件下合成出3种隐孔雀石绿半抗原;进一步采用活泼酯和重氮化法分别将获得的半抗原与牛血清白蛋白(BSA)偶联,形成相应全抗原.半抗原和全抗原分别经减压硅胶柱色谱及透析纯化后,采用质谱、核磁共振及紫外扫描光谱等分析手段进行了鉴定,结果表明半抗原及免疫全抗原均合成成功,满足了进一步免疫、筛选高质量抗体和建立检测方法的需要.同时,采用分子模拟手段对抗原表面半抗原决定簇的前线分子轨道分布情况进行了仿真模拟分析,讨论了前线轨道的分布可能对抗体特性造成的影响,为进一步的半抗原构效关系研究提供理论支持.     

黄曲霉毒素B1人工抗原及鼠源多克隆抗血清的制备

目的:研究合成并鉴定了黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)人工抗原,通过动物免疫生产亲和力高、特异性好的鼠源AFB1多克隆抗血清。方法:采用N-羟琥珀酰亚胺酯(N-hydroxy-succinimide NHS)法将AFB1分别偶联于载体蛋白BSA和OVA上,分别合成免疫抗原AFB1-BSA和包被抗原AFB1-OVA,采用紫外分光光度法和SDS-PAGE进行鉴定,通过动物免疫实验获得鼠源多抗血清,并使用间接ELISA和阻断ELISA的方法对多抗血清进行了鉴定。结果:结果表明半抗原AFB1分别和载体蛋白BSA及OVA偶联成功;免疫的6只小鼠效价均达1×10-4以上,3号小鼠多抗血清敏感性最好,半数抑制浓度IC50(50% inhibitive concentration,IC50)为8.199ng/mL。结论:实验成功合成了AFB1人工抗原,并生产了高效价、高敏感性的鼠源多克隆抗体血清,为AFB1单克隆抗体制备及其快速检测试剂的研制奠定了坚实的基础。     

杀菌剂抑霉唑人工抗原的合成和鉴定

以咪唑乙醇为原料,与6- 溴己酸乙酯发生取代反应后再经水解反应合成抑霉唑半抗原(6-[1-(2,4- 二氯苯基)-2-(1- 咪唑基)乙氧基]己酸)。产物经薄层层析和1H-NMR 鉴定后,采用活化酯法分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联得到免疫原(HIA-BSA)和包被原(HIA-OVA),紫外光谱分析法计算得其偶联比分别为13:1 和7:1,初步说明人工抗原合成成功。通过免疫动物获得效价为1:64000 的抗体,采用间接竞争ELISA 法测定抗体的IC50 值为1.76μg/mL,从而进一步证明人工抗原合成成功,所得的抗体可用于ELISA 检测试剂盒的研制。     

三聚氰胺人工抗原化合物的合成及鉴定

目的：建立三聚氰胺残留的免疫分析方法。方法：以三聚氰胺结构类似物2-氯-4,6-二氨基-1,3,5-三嗪为原料,分别与6-氨基己酸和对氨基苯甲酸,各经两步化学反应合成两种具有不同长度间隔臂的半抗原MEA和MEB,并分别通过碳二亚胺法和混合酸酐法将MEA和MEB与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备三聚氰胺的免疫原(MEA-BSA)和包被原(MEB-OVA)。结果：经质谱和紫外光谱表征,证明所合成的产物为目标半抗原MEA和MEB,并且与载体蛋白偶联比可达到25.28:1(MEA-BSA)和13.11:1(MEA-OVA)。结论：半抗原MEA和MEB及人工抗原合成成功。     

杀草丹半抗原及其人工抗原的制备与鉴定

以乙基羟乙胺、升华硫、一氧化碳气体和对氯氯苄为原材料,合成羟基化杀草丹;经纯化后与琥珀酸酐反应,合成杀草丹半抗原,采用薄层层析色谱法、质谱法和红外光谱法分析鉴定为预期产物;利用碳二亚胺法将半抗原与牛血清蛋白BSA偶联制备杀草丹人工抗原,应用紫外光谱和荧光光谱法分析鉴定。结果表明,羟基化杀草丹经薄层层析展开效果良好,杀草丹半抗原经红外光谱分析具有明显的羧酸基团,有利于后续偶联操作;在26 ℃室温条件下制备的杀草丹人工抗原,其半抗原与载体蛋白偶联比为6.59:1。杀草丹半抗原与杀草丹人工抗原的成功制备,可为进一步研制杀草丹抗体奠定基础。     

Phage-borne peptidomimetics accelerate the development of polyclonal antibody-based heterologous immunoassays for the detection of pesticide metabolites

Competitive immunoassays for the detection of small analytes, such as pesticides and their metabolites, use haptens that compete with the target compounds for binding to the antibody. This competing hapten can be either the same as the immunizing hapten (homologous assay) or structurally modified mimics of the immunizing hapten (heterologous assay). Polyclonal antibody-based heterologous immunoassays have shown superior sensitivities to homologous ones, butthe synthesis of heterologous haptens may be time-consuming, requiring expertise in synthetic chemistry. In this work we demonstrate that phage display peptide libraries can be used as a source of phage-borne peptidomimetics to facilitate the development of sensitive heterologous assays. Different strategies for the isolation of these peptides were explored using two metabolites of pyrethroid insecticides. The sensitivities of the best competitive phage heterologous enzyme-linked immunosorbent assays were 13 fold and 100 fold better than the homologous assay, for the glycine conjugate of trans-3-(2,2-dichlorovinyl)-2,2-dimethylcyclopropane-1-carboxylic acid and 3-phenoxybenzoic acid, respectively. The phage particles were highly versatile as tracer reagents, allowing the use of enzymatic, chemiluminescent, or immuno-polymerase chain reaction detection. The data presented here shows a new systematic procedure that enables the fast generation of several competing haptens for the rapid development of sensitive heterologous immunoassays.     

孔雀石绿多克隆抗体的制备与筛选

设计并成功合成了三种孔雀石绿半抗原,所有半抗原均采用活化酯法分别与血匙兰蛋白(KLH)偶联制备成免疫抗原,与卵清蛋白(OVA)偶联制备成包被抗原。利用所制备的三种免疫原免疫新西兰大耳白兔都获得了高效价的抗孔雀石绿抗体,并将每一种抗体都与三种包被抗原进行组合配对,通过间接竞争酶联免疫吸附检测(ELISA)方法筛选出最佳的抗体-包被抗原组合,筛选出的抗体采用Sepharose FF-Protein A亲和层析柱纯化,采用间接ELISA法测定效价及鉴定特异性。经测定筛选出的抗体效价达到1:12000,IC50值为0.65 ng/mL,交叉反应表明该抗体有较好的特异性,与结构类似物结晶紫的交叉反应率为18.73%,与隐性孔雀石绿及隐性结晶紫的交叉反应率低于10%。本研究为建立快速检测食品中孔雀石绿残留的免疫分析方法奠定了基础。     

Characterization of Fen‐Daqu Through Multivariate Statistical Analysis of 1H NMR Spectroscopic Data

Fen liquor is typical of Chinese light‐flavour liquor (alcoholic spirit), which is fermented from sorghum with Fen‐Daqu powder. Fen‐Daqu is a saccharifying agent and fermentation starter in this fermentation process and in Fen traditional vinegar. To investigate the changes of biochemical components in Fen‐Daqu during the incubation, samples at seven incubation stages were analyzed by ¹H nuclear magnetic resonance (NMR) spectrometry and principal component analysis (PCA). This revealed clear separation of the samples obtained from different incubation stages in the principal component plots by combining PC1 and PC2, which cumulatively accounted for 93.27% of the variance. The major compounds that contributed to discrimination were acetate/alanine, arginine, ascorbate, betaine, choline, ethanol, fructose, galactose, glucose, glucitol, glycerate, lactate, maltose, mannitol, phenylalanine, proline, propylene glycol, threonine and tryptophan. These compounds were regarded as the representative metabolites or biomarkers characteristic for each incubation stage and were related with microbiological changes of importance for quality control in Fen‐Daqu production.     

高温大曲与汾型酿酒工艺的匹配度研究

应用自制强化高温大曲与汾酒大曲进行不同比例的配比,匹配汾酒工艺后进行酿酒对比实验,通过数据分析,对曲与酿酒关系研究及清香型调味酒研制等方面做出了有益的尝试。     

氨基甲酸酯类农药半抗原的设计与改造

本研究设计了一种针对氨基甲酸酯类农药半抗原的通用改造,制备了涕灭威和异丙威两种人工半抗原。通过分子模拟手段和制备鼠源多克隆抗体对半抗原改造效果进行评价。结果表明,最终涕灭威抗体效价为5.84×105,对涕灭威的IC₅₀为0.225 μg/mL,对涕灭威半抗原的交叉反应率为107.14%;异丙威抗体效价为4.1×105,对异丙威的IC₅₀为0.4 μg/mL,对异丙威半抗原的交叉反应率为105.26%。经该通用改造后的半抗原可以代替目标药物用于免疫分析方法的建立。     

汾酒大曲与普通清香型大曲酿酒性能对比

按生产情况统计分析了使用汾酒3合1专用大曲与普通清香型大曲酿酒性能的异同,通过对两个车间两种大曲各自生产情况进行对比,并对总产量和一级酒产量进行了统计,结论表明为汾酒大曲是生产65%vol汾酒必不可少的,使用汾酒专用大曲后产酒总产量和一级酒产量均高于使用普通清香型大曲产酒总量,且一级酒可超产10%以上。     

中国清香型汾酒风味物质剖析技术体系及关键风味物质研究

运用最新的研究技术在提高汾酒微量组分分析体系水平的基础上,首次建立以风味化学理论为基础的中国清香型代表—汾酒的特征风味剖析技术体系,确定汾酒中关键风味化合物、重要风味化合物与特征风味化合物,为发展清香型白酒的酿造理论,推动技术创新奠定基础。     

中国三大香型白酒的研究(三)清香·杏花村篇

从制曲、酿酒及成品等各方面对汾酒的传统生产工艺进行了较系统的总结。摸清了汾酒的生产规律，制订了汾酒传统操作法，建立了汾酒的尝评方法及化学分析法。从汾酒大曲和酒醅中分离出的菌株，经初步鉴定已确定的有20个属31个种。分析了汾酒的香味成分，确定了主体香为乙酸乙酯的复合香。     

不同贮酒器盛酒瓶及贮存年代的汾酒中金属元素含量变化

对3种贮酒器(黑陶缸、红陶缸和不锈钢缸)所贮1年原度汾酒,2种不同盛酒瓶(瓷瓶和玻璃瓶)所盛1年商品汾酒和红陶缸所贮1、2、3、5、10、20和30年汾酒中24种金属元素的含量、变化趋势及作用进行了分析。结果显示,3种贮酒器中,对酒质有利的元素在红陶缸中含量最多,黑陶缸次之,不锈钢缸最少;红陶缸短期贮酒老熟效果最好,黑陶缸长期贮酒最有利于酒质,不锈钢缸则适合作周转勾调容器用。2种酒瓶对1年商品汾酒中金属元素的含量有一定的影响,玻璃瓶贮酒更有利于促进酒体老熟,贮存新酒效果更好;瓷瓶贮存老酒效果更好。老酒中金属元素的含量变化与贮存期的长短密切相关,随着贮存期的延长,酒中大部分金属元素的含量整体呈动态增加。长期贮酒5～10年为较适贮存期,短期贮酒3年效果较好,并且贮存过程中可采用间隙贮存加分质分存策略加速老熟,可在短期内达到较好的陈酿效果。