猪骨骼肌肌钙蛋白T单克隆抗体的制备及鉴定

为制备猪骨骼肌肌钙蛋白T单克隆抗体,利用生物化学方法提取猪骨骼肌肌钙蛋白并免疫小鼠,通过细胞融合制备稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采取体内诱生腹水法批量制备单克隆抗体,并对其免疫学特征进行鉴定.结果表明:最终筛选获得1株杂交瘤细胞株,将其命名为2E8,其分泌的抗体为免疫球蛋白G 2a亚型,效价为1:4.1×105,...     

分泌猪PD-L1杂交瘤细胞株的稳定性研究概述

杂交瘤细胞分泌单克隆抗体,在制备单克隆抗体的过程中,尤为重要的环节是筛选分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。脾细胞和骨髓瘤细胞2个细胞融合而成的细胞是杂交瘤细胞,基因表达不稳定,培养传代或冻存过程中,轻易会缺失或大幅度使分泌单克隆抗体的能力下降,所以在筛选出特异性杂交瘤细胞株后的一段时间内,要多次检测其分泌抗体的能力。一般实验室研究通过杂交瘤细胞技术,前期筛选出一株能分泌猪PD-L1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株3B5,利用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunodeficient assay,ELISA)来测定杂交瘤细胞3B5分泌单克隆抗体的上清效价,来研究杂交瘤细胞的稳定性,杂交瘤细胞株3B5在冻存后30天、60天和90天复苏,ELISA检测细胞培养上清的抗体效价。     

重金属铜的单抗的制备及免疫学检测方法的建立

目的:制备针对重金属铜离子的单克隆抗体,建立Cu2+的间接和直接竞争ELISA检测法,实现对Cu2+的快速定量测定。方法:利用双功能螯合剂p-SCN-Bn-NOTA将Cu2+分别与载体蛋白BSA和OVA偶联,制备免疫原和检测原;用免疫原免疫Balb/c小鼠;细胞融合后,通过间接及间接竞争ELISA筛选稳定分泌抗重金属铜的单克隆抗体的杂交瘤细胞株;制备腹水型单抗并进行鉴定;建立间接竞争ELISA和直接竞争ELISA。结果:成功筛选出4株稳定分泌抗重金属铜的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中G8制备出腹水型单抗效价为5×105倍,抗体亚型为Ig G1型,轻链类型为κ型,特异性检测结果表明该单抗对NOTA及Mn2+、Pb2+、Cd2+、Zn2+等其金属离子交叉反应率远低于2%,与Mg2+交叉反应率小于8%,表明单克隆抗体G8对重金属Cu2+具有很强的特异性,不会干扰结果的准确性;建立间接竞争ELISA的检测灵敏度为29.8 ng/m L,检测限为2.4 ng/m L,线性范围为4.5~196.7 ng/m L;直接竞争ELISA检测法的检测灵敏度为12.89 ng/m L,检测限为0.88 ng/m L,检测范围为1.72~96.58 ng/m L。结论:成功制备出抗重金属铜离子的单克隆抗体,并建立了间接竞争ELISA和直接竞争ELISA。     

动物源性食品中抗司帕沙星单克隆抗体的研制与鉴定

为了制备高灵敏、高特异性的司帕沙星(SPFX)单克隆抗体,鉴定免疫学特性。采用蛋白质偶联技术DCC法制备免疫抗原SPFX-BSA和包被抗原SPFX-OVA,免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA和阻断ELISA选出产生优质多克隆抗体的的小鼠进行细胞融合,经过多次亚克隆筛选出分泌高敏感的特异性抗SPFX单克隆抗体的杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备抗SPFX的单克隆抗体并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明,间接ELISA检测显示免疫的6只小鼠效价均达1.28:10~4以上,融合后筛选出四株杂交瘤细胞株4H4-C8,4H4-C4,4H4-B1和4H4-E9;其细胞上清效价分别为1:1.4×10~3,1:8.0×10~2,1:5.0×10~2,1:6.7×10~2;4H4-C8株腹水效价为1:2.6×10~6,抗SPFX的单克隆抗体对SPFX的IC_(50)为31μg/L,且具有较好的特异性。本研究成功合成SPFX人工抗原,制备出优质的单克隆抗体,为SPFX免疫学快速检测方法的建立奠定坚实的基础。     

单增李斯特菌单克隆抗体的研制及特性分析

运用辐照法和热灭菌法自制单增李斯特菌的免疫原、检测原,运用尾静脉免疫方法免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术进行细胞融合,制备得到抗单增李斯特菌的单克隆抗体,并对其进行免疫学特性分析。结果表明,成功筛选4株能稳定分泌抗单增李斯特菌的单克隆杂交瘤细胞株,腹水抗体效价为1∶102 400~1∶409 600,免疫球蛋白亚型为Ig G1、Ig2a、Ig2b,亲和力常数在1×107~1×1010L/mol;经测定分析出最佳配对抗体;并与绵羊李斯特菌、英诺克李斯特菌及大肠杆菌、沙门氏菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌等菌属无明显交叉反应;进行双抗体夹心ELISA方法对模拟单增李斯特菌污染肉样检测其灵敏度达1×103 CFU/m L。获得高效价、特异性强、灵敏度高的单克隆抗体,为食品中致病菌单增李斯特菌残留的免疫学检测方法奠定了基础。     

抗牛免疫球蛋白G单克隆抗体的制备及鉴定

采用杂交瘤技术从90株融合株中筛选得到分泌抗牛免疫球蛋白G（immunoglobulin G,IgG）单克隆抗体的2F6、5E3、9C6、9H8四个细胞株。其抗体亚型均为IgG1型,腹水单克隆抗体的效价可达5.12×106;5E3、9H8识别牛IgG重链Fc片段,2F6识别牛IgG轻链Fab片段,9C6识别牛IgG重链Fab片段;9C6与牛IgG1和牛IgG2反应,与山羊IgG、绵羊IgG、兔IgG、牛IgM、牛乳酪蛋白、牛乳β-乳球蛋白、牛乳铁蛋白、牛血清白蛋白、鸡卵清白蛋白、鱼明胶的交叉反应率均小于1%;9C6亲合力常数达牛乳8.92×108?L/mol。     

抗β-葡萄糖苷酸酶(β-GUS)兔单克隆抗体的制备和鉴定

通过免疫兔子、细胞融合、筛选杂交瘤细胞、构建重组载体、抗体纯化等步骤,成功制备出抗β-葡萄糖苷酸酶(β-GUS)兔单克隆抗体。运用间接ELISA法测定该兔单克隆抗体的相关特性,结果表明该兔单克隆抗体的效价为64000左右,亲和常数为2.13×109L/mol。间接ELISA检测β-GUS蛋白时,其最低检测限为50ng/mL。本次试验为研制定性或定量检测β-GUS蛋白的ELISA试剂盒奠定了基础。     

抗赭曲霉素A单克隆杂交瘤细胞系的建立及特性

为快速检测食物中的赭曲霉素A ,建立了抗OchratoxinA的单克隆杂交瘤细胞株。用OA -匙孔嘁血蓝素 (OA KLH)偶联物免疫 8～ 10周龄雌性Balb c小鼠后 ,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2 0融合 ,经过 3～ 4次亚克隆建立了 3个稳定分泌抗赭曲霉素A抗体的杂交瘤细胞株 ,分别命名为 10G7、10G10和 5G11。将上述 3株杂交瘤细胞分别注入Balb c小鼠腹腔 ,获得含抗赭曲霉素A单克隆抗体的腹水。将腹水用饱和硫酸铵法纯化 ,得到 10G7、10G10和 5G11单克隆抗体。其中10G10、5G11单克隆抗体的Ig亚类为IgG1,10G7单克隆抗体的Ig亚类为IgG2a。抗体腹水的稀释度为 1∶6 4× 10 6～ 1∶1 3× 10 8,参考工作浓度为 1∶1 0× 10 6～ 1∶3 2× 10 7。纯化后 10G7抗体的IgG含量为 16 4g L ,亲和常数为 9× 10 -8mol L。 10G7抗体与其它结构类似物无交叉反应 ,具有较高的特异性。     

鸭骨骼肌肌钙蛋白I单克隆抗体的制备及其特性

提取鸭骨骼肌肌钙蛋白I（skeletal muscle troponin I,sTnI）用于制备单克隆抗体,并对抗体性能进行 评价。将鸭骨骼肌提取后经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE）测定,取凝胶条带免疫小鼠,融合后经筛选获得分泌抗鸭sTnI的杂交瘤细胞株,用 酶联免疫吸附测定法检测抗体效价、亚型及特异性等特性。结果表明：鸭骨骼肌提取物经SDS-PAGE后出现2 条 颜色较深的条带,取分子质量24 kDa条带用于免疫;筛选后获得2 株单克隆抗体,其中3E7特异性较好,效价在 1∶1.0×105以上,为IgG1亚型,亲和常数（Ka）为5.9×105 L/mol;免疫印迹结果显示,抗体3E7能与鸭骨骼肌提取 物反应,与牛、羊、鸡、鱼骨骼肌提取物无明显反应。     

单增李斯特菌胶体金免疫层析试纸条的研制

以单增李斯特菌(LM)内化素A蛋白(InlA)单克隆抗体为基础,研制其胶体金免疫层析检测试纸条。方法 采用DNAStar软件对LM inlA全长基因编码蛋白进行抗原表位分析,截取部分inlA基因片段构建原核表达质粒,诱导表达和纯化获得重组蛋白。以该蛋白免疫BALB/c小鼠,筛选高效分泌抗InlA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体;以双抗体夹心的原理研制胶体金免疫层析检测试纸条,并对其特异性、敏感性、稳定性进行评价。结果 筛选到2株高效分泌抗InlA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,抗体属于IgG1亚类,小鼠腹水抗体效价为1∶64000;研制的试纸条可与LM发生阳性反应,而与非LM李斯特菌、链球菌、鼠伤寒沙门菌、大肠杆菌O157∶H7等食源性致病菌均不发生阳性反应;LM纯培养物敏感性为2.4×10^5cfu/ml,模拟猪肉样品敏感性为4.0×10⁶ cfu/ml;4℃保存期可达16周以上。结论 研制的胶体金免疫层析试纸条具有快速、特异、敏感等优点,可以用于样品中LM的快速检测。     

曲虫治理效果分析

通过对曲虫治理应用研究效果的分析 ,结果表明 :质量效果提高 7% ,糖化力效果提高 80 % ,综合效果提高 92 7%。     

制革清洁化技术的进展

就皮化材料与清洁化制革的关系、目前传统制革工艺中存在的严重污染问题及针对这些问题近年来采取的新的方法进行了探讨,指出清洁化是我国制革行业的必由之路,清洁化制革工艺与皮化材料的关系非常密切,只有研发出相应新型的、高吸收的、功能型的、易降解型的各类化工材料,才合乎清洁化生产的要求。在制革工艺中采用生物酶制剂辅助浸水脱脂、无硫脱毛与无灰浸碱工艺、无铵脱灰/碱等改造传统工艺,减少污染;采取高吸收铬鞣、无铬或少铬鞣制,提高铬的吸收率或克服铬鞣的弊端;在染整中,合成并采用助剂辅助染料、复鞣剂和加脂剂等的吸收与结合。这几方面通过集成应用,方可减轻制革的污染,实现清洁化生产。同时,就皮革固废物的利用及水的循环使用问题提出些看法。     

女套装上衣尺寸自动生成系统的建立与实现

针对服装打版系统智能化程度低的现状,设计了服装尺寸自动生成系统.量取女套装上衣经典款式样板的细部尺寸参数,采用非线性主成分分析法对女套装上衣样板各特征指标的权重进行提取,利用多元回归分析建立服装结构设计数学模型.建立样板尺寸自动生成的理论模型,并通过编程加以实现.建立3层模糊综合评判模型对系统进行测试,实验结果表明,该...     

有梭织机稀密路织疵成因分析

从有梭织机打纬过程中织机构件的位置和状况对纬纱之间距离的影响出发,推导出纬向密度计算公式,直观分析了影响纬向密度的各种因素,提出了为减少稀密路织疵在国产老织机上采取的几项改进措施：采用弹簧回综、机外送经、电子驱动、导布辊加压等装置。     

两种脂肪酸聚甘油酯(PGE)的性质比较

脂肪酸聚甘油酯(Polyglycerol esters of fatty acids,简写为PGE)在常温下有半固态和固态两种存在状态,本文通过对分别添加这两种PGE的软冰淇淋基料进行粘度、pH、粒径分析和垂直扫描分散稳定性分析(Turbiscan),发现半固态PGE的添加量为0.2%时,乳状液的粘度最低,粒径最小,稳定性最好;固态PGE的添加量为0.4%时.乳状液的粘度最低,粒径最小.通过比较发现,两种PGE对基料的影响有很大差别:半固态PGE能使乳状液的粒子更小,并能有效延长乳状液的稳定性;而固态PGE由于其熔点较高,可以促进脂肪结晶.     

关于对EV—301蒸发罐腐蚀的初步探讨

本文简述了江西盐矿ＥＶ－３０１蒸发罐腐蚀现状,分析了造成腐蚀的因素,介绍了江西盐矿为解决腐蚀采取的措施。     

葵花籽油中酸价测量结果的不确定度评价

目的 分析食用油中酸价测定的不确定度来源并建立不确定度评定方法, 为检验数据的可靠性和准确性提供参考。方法 依据GB 5009.229-2016《食品安全国家标准 食品中酸价的测定》和JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》建立数学模型, 计算各变量的不确定度, 最终计算扩展不确定度。结果 结果显示, 样品中酸价的扩展不确定度为U=1.764×10?3 mg/g, 样品中酸价含量为(0.16±0.002) mg/g(置信水平95%, 包含因子k=2)。结论 在测定过程中, 测量重复性对总的不确定度影响最大, 其次是滴定管的体积。     

Mechanism of Prevention of Aggregation of Proteins: A Case Study of Aggregation of α-Globulin in Glycerol

The precipitation of proteins due to the changes in pH has been a major limiting factor in their utility especially when the precipitation is concurrent with irreversible aggregation. In the present study, an attempt is made to see the effect of glycerol on the pH-induced aggregation of α- globulin which is the major protein fraction (11S) from Sesame (Sesamum indicum L.) seeds. A second order polynomial relation existed between the cosolvent concentration and precipitation which was prevented in presence of the cosolvent. Similarly, there was a second order polynomial relation between 8-anilino 1-naphthalene sulfonic acid (ANS) binding of the protein (as indicated by fluorescence emission at 466 nm) and the cosolvent concentration. The relative precipitation in presence of glycerol is however linearly proportional to the changes in surface hydrophobicity as seen by behavior of ANS with the protein in presence of the cosolvent. A possible role of the cosolvents in prevention of aggregation due to hydrophobicity of the protein is envisaged and the relation between the different parameters is discussed.     

纺织品甲醛含量测定的影响因素

分析和讨论了甲醛标准溶液的配置时间、配置方法等因素对其吸光度的影响规律;另外还对织物中甲醛的萃取织物质量、试样浸泡的时间、取浸泡液的量等因素做了细致的研究与分析,总结了影响纺织品中甲醛检测的各种因素,对改进甲醛检测方法的研究有一定的参考价值和实用意义.     

微胶囊化功能性番茄红素产品的高效液相色谱测定法改进

采用高效液相色谱法测定微胶囊化功能性番茄红素产品中的番茄红素(片剂、胶囊或软胶囊)。样品用二甲基亚砜溶解破膜,以1%BHT-二氯甲烷提取释放出的番茄红素,用HPLC检测番茄红素的含量。方法线性范围为0 70μg/mL,r=0.9996,最低检出浓度为0.30μg/mL,加标回收率为90%107%,相对标准偏差为小于10%。本方法简便,耗时短,试剂消耗少,且结果准确可靠,对功能性食品中微胶囊化番茄红素的测定提供了一种较好的解决方法。