脂肪酶水解壳聚糖作用研究

通过还原端基含量测定、粘度测定研究了脂肪酶非专一性对壳聚糖的降解作用,探索了酶反应过程中温度、pH、加酶量、底物浓度、反应时间、金属离子等因素对脂肪酶降解壳聚糖的影响,以及不同脱乙酰度和不同分子量的壳聚糖与脂肪酶降解反应的关系。结果表明,以壳聚糖为底物的脂肪酶的一些催化特性为最适温度50～55℃,最适pH5～5.5,反应时间在3～4h范围内;降解作用随着酶用量和底物浓度的增加而增加,水解反应不符合Michaelis-Menten方程;3mmol/L的Cu2 ,10mmol/L的Mg2、Ca2 对脂肪酶有一定的激活作用,10mmol/L的Ba2 、Zn2 、Fe3 对该酶有一定的抑制作用,随着底物壳聚糖脱乙酰度的提高,降解速度降低。     

氧气对涡流空化降解壳聚糖的影响

研究了氧气在不同壳聚糖溶液初始质量浓度、pH值、温度、进口压力、空化时间等条件下,对壳聚糖涡流空化降解的影响。结果表明：壳聚糖溶液的初始质量浓度越低涡流空化降解效果越好,当溶液pH值为4.4、温度为70 ℃、进口压力为0.4 MPa、空化时间为3 h时,壳聚糖的特性黏度下降率最高;在不同涡流空化降解条件下,连续通入氧气均可显著促进壳聚糖降解产物特性黏度下降率的提高,在本实验中最大可提高35.36%;氧气对高质量浓度壳聚糖降解的促进作用更显著;氧气的通入减弱了pH值对壳聚糖降解的影响、在反应的初期大大加快了反应速率;降解后的壳聚糖主链结构及官能团基本没发生变化。     

纤维素酶制备水溶性壳聚糖的研究

通过对溶液还原糖浓度以及黏度的测定研究了纤维素酶对壳聚糖的降解作用,探讨了酶解过程中温度、pH值以及反应时间对纤维素酶降解壳聚糖的影响,对降解前后壳聚糖的结构进行了表征并对其水溶性进行了测试.结果表明,纤维素酶降解壳聚糖的最佳pH值为4.5,温度为50℃,随着反应时间的延长,壳聚糖溶液的黏度逐渐降低:随着壳聚糖分子量的降低,水溶性增强,但是化学结构没有发生改变.     

糖类物质对固定化脂肪酶的保护作用

探讨脂肪酶在固定化过程中,几种糖类物质对酶活的保护作用.采用壳聚糖涂层法固定化脂肪酶,加入不同种类的糖液,干燥后用橄榄油法检测脂肪酶的酶活力.在没有糖类物质作为保护剂的情况下,戊二醛浓度在7.5%、交联温度在25℃、pH值为8.0时获得的固定化酶活最高,加入0.5M浓度的糖溶液,可以有效提高固定化酶活力的回收率.糖类保护剂都可以在酶的固定化过程中有效保护酶活.     

响应曲面法对壳聚糖亚铁离子配合物酶解的优化

以木瓜蛋白酶降解壳聚糖亚铁离子配合物(CTS-Fe2 )是制备低聚壳聚糖,提高产品品质的—新途径.本文以响应曲面法研究了pH,温虎底物浓度和酶底比这四个工艺参数对木瓜蛋白酶降解壳聚糖亚铁离子配合物反应体系中粘度下降率(VDP)的影响,建立了该反应的二次多项式模型,并通过模型计算得到了最优酶解工艺参数:pH4.46,温度为44.95℃,底物浓度为1.97%,酶底比为1.75%.     

壳聚糖微球的制备及其对脂肪酶的固定化研究

采用反相悬浮法制备壳聚糖微球,并以此作为载体固定了脂肪酶。对壳聚糖微球的制备条件、微球的性能及其固定化脂肪酶的条件进行了探讨,结果表明,壳聚糖微球成球效果最好的制备条件是壳聚糖溶液与分散相液体石蜡体积比为1∶2,吐温-80使用量为15mL,壳聚糖浓度为4%,所制得的壳聚糖微球具有良好的热稳定性、耐酸碱性和抗氧化性;壳聚糖微球固定化脂肪酶的最佳条件为戊二醛用量0.6mL,交联时间60min,加酶量1mg/g载体,pH值为7。采用壳聚糖微球固定化脂肪酶具有较高的酶活回收率,为60%     

通过酶促反应制备壳寡糖

用酶降解法对壳聚糖进行降解 ,研究了温度、pH值、金属离子等对酶促反应的影响 ,降解的最佳温度和pH值分别为 5 0℃和 5 0 ,Mg2 + 和Ca2 + 对酶降解具有一定的促进作用 ,而重金属离子Cu2 + ,Ni2 + 和Zn2 + 对酶降解有强烈的抑制作用。通过降解过程中壳聚糖溶液粘度的变化可以得出 ,该壳聚糖酶是以内切方式作用于壳聚糖。采用离子交换色谱柱对降解产物进行分离 ,得到了聚合度为 2～ 9的壳寡聚糖。该酶促反应符合米氏动力学方程 ,米氏常数Km 值为 2 60 1g/L ,Vmax 值为 3 5 79× 10 - 2 g/min·L。     

低聚壳聚糖制备的研究

以壳聚糖为研究对象,利用撞击流技术对其进行降解研究。考察了壳聚糖溶液浓度、pH、反应时间、流速、撞击流反应器结构等因素对壳聚糖降解效果的影响,以壳聚糖的特性粘度下降率作为评价壳聚糖降解效果的标准。结果表明:较低的壳聚糖溶液浓度、较长的射流撞击时间、较高的射流速度有利于促进壳聚糖的降解;当溶液pH为4.4,壳聚糖溶液的浓度为1g/L,撞击角度为90°,作用时间为40min,流速为4.2m/s时,降解效果最为明显,特性粘度下降率达到67.6%,为撞击流降解制备低聚壳聚糖提供了理论依据。     

酶法降解壳聚糖及壳寡糖的初步研究

利用Mitsuaria sp.141-2发酵所得的粗酶液降解壳聚糖,研究了反应时间、底物浓度、pH、温度、加酶量、脱乙酰度对酶促反应的影响。结果表明,该酶降解壳聚糖的最适条件为:底物浓度3%,pH 5.2～5.6,温度65℃,加酶量7 U/g壳聚糖。利用薄层层析法对酶解产物进行分析,酶解产物大部分为三糖和四糖,单糖的含量随酶解时间延长而逐步增多。酶解3 h后可得到平均聚合度小于10的壳寡糖混合物。     

壳聚糖微球固定化脂肪酶的制备工艺及应用性质研究

以壳聚糖微球为载体,采用乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亚胺盐酸盐(EDC)活化羟基固定Candida rugosa脂肪酶,测定了不同EDC浓度、给酶量以及固定化时间对固定化脂肪酶活性的影响,并与戊二醛固定化脂肪酶性质作了对比分析.研究结果表明,用EDC活化固定化脂肪酶,当缓冲液pH为7,加酶量达到30 mg,EDc浓度为0.2%,交联时间6 h,固定化脂肪酶最大比活力为26.1 U/mg蛋白、活力回收最高为65.5%.固定化酶的热稳定性、pH稳定性和重复使用稳定性都有较大提高.壳聚糖微球固定化酶合成油酸乙酯循环使用次数达6次,油酸乙酯转化率从66.4%降至26.5%.