雪莲果过氧化物酶的特性和抑制研究

以新鲜雪莲果为材料,对雪莲果过氧化物酶(POD)的特性进行了研究,并探讨了不同抑制剂及激活剂对酶活性的影响。结果表明:雪莲果过氧化物酶最适反应pH值为6.0,最适反应温度为35℃,最佳反应底物(愈创木酚)浓度为0.008mmol/L,最大反应速度Vmax=135U/(min.g),米氏常数Km=0.004182mol/L。在0~200mmol/L范围内,抑制剂对POD的抑制作用为NaHSO3>L-cys>柠檬酸>VC>EDTA。在0~10mmol/L范围内,激活剂对POD激活作用为CuSO4>FeCl3。     

山药过氧化物酶的特性及抑制研究

以愈创木酚为底物,470nm处测定山药过氧化物酶(POD)的活性,研究了温度、pH、底物浓度、酶浓度、抑制剂和激活剂对其活性的影响。结果表明,山药过氧化物酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为6.0,Km=0.08231mol/L,Vmax=541.518U/(g·min);五种抑制剂对POD的抑制作用由强到弱依次为:VC>L-Cys>NaHSO3>柠檬酸>EDTA,两种激活剂对POD活性的激活作用由强到弱依次为:CuSO4>FeCl3。     

山药过氧化物酶的特性及抑制研究

以愈创木酚为底物,470nm处测定山药过氧化物酶（POD）的活性,研究了温度、pH、底物浓度、酶浓度、抑制剂和激活剂对其活性的影响。结果表明,山药过氧化物酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为6.0,Km=0.08231mol/L,Vmax=541.518U/（g·min）;五种抑制剂对POD的抑制作用由强到弱依次为:VC>L-Cys>NaHSO3>柠檬酸>EDTA,两种激活剂对POD活性的激活作用由强到弱依次为:CuSO4>FeCl3。      

雪莲果过氧化物酶的特性和抑制研究

以新鲜雪莲果为材料,对雪莲果过氧化物酶（POD）的特性进行了研究,并探讨了不同抑制剂及激活剂对酶活性的影响。结果表明：雪莲果过氧化物酶最适反应pH为6．0,最适反应温度为35℃,最佳反应底物（愈创木酚）浓度为O．008mmol／L,最大反应速度Vmax=135U／min·g,米氏常数Km=0．004182mol／L。在0-200mmol／L范围内,抑制剂对PCID的抑制作用为：NaHSO3〉L-cys〉柠檬酸〉Vc〉EDTA。在0-10mmol／L范围内,激活剂对POD激活作用为：CuSO4〉FeCl3。     

冬枣果实苯丙氨酸解氨酶酶学特性的研究

研究了冬枣果实苯丙氨酸解氨酶(PAL)的酶学特性。L-苯丙氨酸为枣果实PAL的反应底物,结果表明,最适底物浓度为1.0 mmol/L。枣果实PAL属于别构酶,具有2个米氏常数,Km分别为0.115×10-4、8.177×10-4 mol/L。枣果实PAL最适温度为50℃,最适p H为8.8。在浓度为0~4.0 mmol/L范围里,L-半胱氨酸、酪氨酸、色氨酸、组氨酸均对枣果实PAL活性有一定的抑制作用,而抗坏血酸和蔗糖对PAL有激活作用。金属离子对PAL激活作用由强到弱依次为:Cu2+Fe3+Fe2+Na+;金属离子对PAL抑制作用由强到弱依次为:Al3+Mg2+Mn2+Ca2+Zn2+K+。研究结果揭示了冬枣果实PAL酶学特性,为通过调控枣果实PAL酶活性改善果实贮藏特性提供了理论依据。     

青蒿多酚氧化酶的酶学特性研究

以新鲜青蒿为材料,考察不同温度、pH值、底物浓度、激活剂、抑制剂对青蒿多酚氧化酶（polyphenoloxidase,PPO）活性的影响。结果表明：温度和pH值对酶活性的影响均存在一个最适值,分别为40 ℃和6.8;在一定底物浓度范围内,酶促反应速率随底物浓度的增加而增大,其米氏常数（Km）为0.015 4 mol/L,最大反应速率（Vmax）为125 U/min;MgC12、SDS对青蒿PPO活性有一定激活作用,当MgC12浓度为0.9 mmol/L、SDS浓度为8 mmol/L时,青蒿PPO活性分别高出对照组30.3%和45.3%;当VC质量浓度为0.03 g/L、柠檬酸质量浓度为1.2 g/L、PVP质量浓度为20 g/L时抑制率分别为70.4%、83.7%、77.6%;NaHSO3在0.01～0.08 mmol/L的浓度范围内对青蒿PPO抑制作用缓慢上升。     

骏枣过氧化物酶酶学特性及其钝化动力学研究

以新疆骏枣为原料,以p H6.0磷酸缓冲溶液、30%双氧水和愈创木酚的混合液为底物,采用分光光度法研究了红枣中过氧化物酶(POD)的酶学特性及其钝化动力学。结果表明:红枣POD最适温度为45℃,最适p H为6.8~7.2,最适底物浓度为0.088 2 mol/L;最大反应速度Vmax=49.2 U/min,Km=0.387 mol/L;当温度大于55℃时,热处理对POD的钝化效果比较显著,80℃处理25 min即可完全钝化红枣POD;热处理对红枣POD的钝化符合一级反应动力学,其ZT=22.83℃,Ea=42.076 k J/mol。     

木枣多酚氧化酶酶学特性研究

从木枣中提取PPO,采用色谱法对其酶促动力学反应机制进行了研究。结果显示:以邻苯二酚为底物,在其浓度0.1mol/L、温度25℃、p H6.4下,292nm处检测到木枣PPO活性最高;不同激活剂对木枣PPO活性的最适激活浓度分别是Mg Cl_2为0.5mol/L、Cu SO_4为0.4mol/L和乙醇为6%,其中Cu SO_4激活效果明显;不同抑制剂对木枣PPO活性的最佳抑制浓度分别是Ca Cl_2为0.6mol/L、芦丁为0.6%、L-Lys为0.2mol/L、L-Glu为0.2mol/L,其中L-Lys对PPO抑制作用最为明显。结论:PPO是酶促褐变的主要原因,在木枣生产和加工过程中可通过添加激活剂或抑制剂来调节PPO活性。     

莴笋多酚氧化酶、过氧化物酶的特性及抑制作用研究

采用分光光度法测定莴笋多酚氧化酶（PPO）和过氧化物酶（POD）的活性,研究酶的稳定性、温度、p H、底物浓度及几种抑制剂对其活性的影响,建立相应酶促动力学方程,利用正交实验探讨最佳抑制条件。结果表明,PPO和POD最适温度分别为50℃和40℃,最适p H分别为6.0和6.5,随温度不断升高,PPO和POD活性逐渐下降。动力学方程分别为V=342.566[S]/（5.9×10-3+[S]）和V=3403.008[S]/（6.88×10-4+[S]）。对PPO抑制强弱为:VC>L-Cys>Na HSO3>柠檬酸>EDTA>苯甲酸>琥珀酸,对POD抑制强弱为:EDTA>VC>L-Cys>柠檬酸>Na HSO3>琥珀酸>苯甲酸。正交实验表明,对PPO最佳抑制条件为:Na HSO39mmol/L、L-Cys 5mmol/L及VC5mmol/L。对POD最佳抑制条件为:VC0.2mmol/L、EDTA 0.2mmol/L及L-Cys 1.4mmol/L。      

曹州木瓜过氧化物酶酶学特性研究

以曹州木瓜果实为试验材料,采用分光光度法对曹州木瓜过氧化物酶(POD)的酶学特性进行研究,为控制木瓜加工贮藏过程中的酶促褐变提供理论依据。试验结果表明:曹州木瓜POD的最适pH 5.8,最适反应温度45℃,90℃处理75 s或者100℃处理30 s后POD活性完全丧失。其过氧化物酶催化的酶促褐变反应动力学符合米氏方程,动力学参数Km=18.17 mmol/L,Vmax=1 666.67 U。抑制剂对POD的抑制作用从大到小依次为VC亚硫酸氢钠柠檬酸EDTA-2Na。Na+,K+,Mg2+,Mn2+和Ca2+对POD具有激活作用,Zn2+,Ba2+和Cu2+在低浓度时对POD有激活作用,高浓度时有抑制作用。     

碱法提取大枣渣多糖及活性炭脱色的工艺研究

以多糖含量、多糖得率和脱色率为指标 ,采用正交试验法对碱提大枣渣多糖和脱色工艺进行优选。碱提最佳工艺为 :加入 2 0倍枣渣体积的 0 5mol/LNa2 CO3溶液 ,于 80℃温浸 3h。脱色最佳工艺为 :在 40℃下 ,调节 pH =3 5 ,加入 2 %活性炭 ,搅拌 2 0min。     

梅州金柚果肉中过氧化物酶特性的研究

以愈创木酚为底物,对金柚果肉过氧化物酶(POD)的特性进行研究。结果表明,POD的最适提取pH为6.4,最适反应温度范围为30~80℃,在范围为5.0~8.0的pH环境下POD的活性变化不大,选择6.8作为其最适反应pH。在本实验条件(pH6.8,30℃)下,V max=25.64U/min,K m=8.74mmol/L,高于80℃处理,POD开始被钝化。      

金银花过氧化物酶的三相分离纯化及酶学性质

采用三相分离法提取纯化金银花中过氧化物酶,结果表明最优纯化条件为pH?5.60、硫酸铵质量浓度39.49?g/100?mL、提取液与叔丁醇体积比1∶1.38,在该条件下纯化倍数为5.849,回收率为87.64%。金银花过氧化物酶比活力为1 021.6 U/mg,色素清除率为92%;酶学性质研究表明:金银花过氧化物酶最适温度为30℃,热稳定范围为10~40℃;最适pH值为5,pH值稳定范围为4~7。在金银花过氧化物酶催化的双底物酶促反应中,当H_2O_2浓度一定时,酶对愈创木酚的Km值为8.12?mmol/L,vmax值为1.71?mmol/(min·L)。当愈创木酚浓度一定时,H_2O_2的Km值为0.822?mmol/L,vmax值为1.38?mmol/(min·L)。金银花过氧化物酶与底物的亲和力由强到弱依次是邻苯三酚、邻苯二酚、联甲氧基苯胺、愈创木酚。Ca~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)对金银花过氧化物酶有激活作用,Mg~(2+)、Mn~(2+)、柠檬酸、抗坏血酸、L-半胱氨酸、亚硫酸钠、偏重亚硫酸钠、十二烷基磺酸钠对金银花过氧化物酶有不同程度的抑制作用。     

芦笋过氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶特性及抑制条件的研究

采用分光光度法对芦笋组织中与老化相关的过氧化物酶(POD)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的酶学特性进行了研究。结果表明,芦笋POD和PAL的最适pH分别为4.0和8.8,且在pH值6的柠檬酸缓冲液中酶活力均明显下降;最适温度分别为55℃和60℃,且在20℃以下和60℃以上活性显著降低;1mmol/L Ca~(2+)显著(P<0.05)抑制芦笋POD和PAL酶的活力;POD和PAL最适底物浓度分别为70μL/100mL和0.02mol/L,Km分别为2.694×10~(-4)mol/L和0.1381mmol/L。     

淮山药枸杞红枣复合饮料的研制

以淮山药、宁夏枸杞、红枣3种药食两用食品为原料,加入蜂蜜、柠檬酸、复合稳定剂等制备复合饮料.复合饮料的最佳配方为淮山药浆25％,枸杞汁20％,红枣汁10％,蜂蜜10％,柠檬酸0.12％,复合稳定剂为0.03％黄原胶、0.07％羧甲基纤维素钠和0.05％海藻酸钠.     

红枣多糖羧甲基化修饰及其抗氧化活性研究

本研究对红枣多糖进行羧甲基化修饰,探究羧甲基化修饰红枣多糖的结构特征及抗氧化活性变化。以红枣粗多糖为原料,采用Sevage法脱蛋白,大孔树脂AB-8脱色处理,对除杂后的多糖进行羧甲基化修饰。以羧甲基取代度为指标,通过单因素和响应面试验对NaOH浓度、一氯乙酸添加量及温度进行优化,以修饰前后多糖对DPPH、羟基自由基的清除能力及其还原力和对Fe2+的螯合能力为指标,探究羧甲基化修饰对红枣多糖抗氧化特性的影响。结果显示,羧甲基化修饰最佳工艺参数为:反应温度70 ℃,一氯乙酸添加量3.5%,NaOH浓度3 mol/L,此条件下羧甲基化红枣多糖分子修饰取代度高达1.157。浓度5 mg/mL时,羧甲基化修饰的红枣多糖DPPH和羟基自由基清除率达93.83%和44.7%,还原力和对Fe2+的螯合能力分别为0.462和44.05%。红枣多糖抗氧化性的显著提升表明羧甲基化修饰可改善多糖的抗氧化性,可为红枣多糖的深入研究提供一定的理论依据。     

大孔树脂富集酸枣仁总黄酮工艺及其体外抗氧化性研究

研究大孔吸附树脂富集纯化酸枣仁总黄酮的最佳条件,并进行了总黄酮体外抗氧化能力的测定。利用静态吸附和动态吸附实验对5种不同极性的大孔吸附树脂进行筛选,并对上样液质量浓度、上样量、洗脱剂体积分数、洗脱剂体积以及洗脱剂流速等条件分别进行考察。采用DPPH自由基和ABTS+自由基的清除率以及铁氰化钾的还原能力作为指标考察纯化后总黄酮的体外抗氧化能力。结果表明AB-8大孔吸附树脂为纯化酸枣仁总黄酮的最佳树脂,纯化工艺为上样液质量浓度1.99 mg/m L,上样量50 m L,洗脱剂体积分数50%乙醇,洗脱剂体积50 m L,洗脱剂流速1 m L/min。抗氧化结果显示总黄酮对DPPH和ABTS+自由基具有明显的清除能力（IC50值为0.70 mg/m L和0.15 mg/m L）,并对铁氰化钾表现出了较强的还原能力。      

Purification and characterization of cell wall-bound peroxidase from vanilla bean

A cold-active ionically bound cell wall peroxidase was purified from a polyvinylpolypyrrolidone extract of mature vanilla beans by ultra filtration of 10 kDa and gel filtration chromatography on Sephacryl S-200. The M_r was 46.5 kDa determined by electrophoresis on SDS-PAGE, while native gel filtration confirmed tetramer enzyme form of approximately 186 kDa. The optimum pH and temperature were 3.8 and 16 °C, respectively, as determined with guaiacol as the substrate (K_m 3.8 mmol/L). The pI was approximately 7.7. The POD was inhibited by 1,4-dithiothreitol, β-mercaptoethanol and sodium azide. The POD showed decreasing activity in the presence of ascorbic acid, NaEDTA and sodium dodecyl sulfate at 1 mmol/L. The enzyme lost 80% of its activity in the presence of 20% ethanol. These results will permit better understanding of POD role in vanilla curing process.     

草鱼胰蛋白酶的亲和纯化及酶学性质

从草鱼肝胰腺中提取胰蛋白酶,经匀浆、硫酸铵分级沉淀、透析得到胰蛋白酶粗酶液,通过BTI-Sepharose亲和层析一步纯化得到电泳纯的草鱼胰蛋白酶,并进一步研究该胰蛋白酶的酶学性质。结果表明：草鱼胰蛋白酶的分子质量约为27 kDa,米氏常数Km为3.4×10－5 mol/L;最适反应温度为60 ℃,在低于60 ℃条件下稳定;最适pH值为9.5,酸碱耐受范围为pH 6.0～12.0;Ba2＋、Mg2＋、Fe2＋在0～10 mmol/L范围内对该酶具有一定激活作用,而乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA）、K＋在0～10 mmol/L范围内对该酶有一定抑制作用,EDTA较K＋对酶的抑制作用更明显。