易错PCR技术改造扩展青霉脂肪酶

利用易错PCR技术,建立脂肪酶基因随机突变文库,将随机突变脂肪酶基因转化毕赤酵母GS115,初步筛选了4000株突变菌株,对300株较优突变株进行酶的活力、耐热性、耐酸性的摇管复筛,进一步摇瓶复筛后获得优良突变株ep3,所产突变脂肪酶(ep3-GS)的适宜pH为9.4,适宜作用温度为35℃,与野生重组脂肪酶(PEL-GS)一致,该温度下酶的比活为3440 U/mg,比野生型脂肪酶提高17%。     

海藻酸钠包埋法固定青霉产菊粉酶的研究

利用海藻酸钠包埋法固定青霉(penicillium)产菊粉酶,研究了最佳固定化条件及固定化酶性质,为固定化菊粉酶应用于果糖工业生产提供理论依据。结果表明:海藻酸钠浓度为4%,氯化钙浓度为1%时,固定化酶活力最高且机械强度好;加酶量越少,固定化效率越高;固定化酶与游离酶的最适pH为4.5,但固定化酶在pH4到6.5范围内相对酶活要比游离酶酶活高;固定化酶与游离酶的最适温度均为55℃,在35℃到55℃范围内两者酶活变化不大,在55℃到75℃范围内固定化酶的温度适应性比游离酶的好;在重复利用方面,将固定化酶反复利用7次,酶活仍为原酶活的50.6%。由此说明,固定化酶成本低,利用率高,在工业生产方面具有利用价值。      

海藻酸钠包埋法固定青霉产菊粉酶的研究

利用海藻酸钠包埋法固定青霉(penicillium)产菊粉酶,研究了最佳固定化条件及固定化酶性质,为固定化菊粉酶应用于果糖工业生产提供理论依据。结果表明:海藻酸钠浓度为4%,氯化钙浓度为1%时,固定化酶活力最高且机械强度好;加酶量越少,固定化效率越高;固定化酶与游离酶的最适pH为4.5,但固定化酶在pH4到6.5范围内相对酶活要比游离酶酶活高;固定化酶与游离酶的最适温度均为55℃,在35℃到55℃范围内两者酶活变化不大,在55℃到75℃范围内固定化酶的温度适应性比游离酶的好;在重复利用方面,将固定化酶反复利用7次,酶活仍为原酶活的50.6%。由此说明,固定化酶成本低,利用率高,在工业生产方面具有利用价值。     

海藻酸钠包埋法制备固定化脂肪酶研究

研究了以海藻酸钠为载体,用包埋法制备固定化脂肪酶的条件,将一定量的海藻酸钠用蒸馏水加热溶解,将500mg脂肪酶溶解在pH=6的缓冲溶液中,然后两者混合均匀,用注射器将海藻酸钠酶液逐滴到1%的无菌CaCl2溶液中,搅拌条件下室温固定1h,过滤,洗涤,干燥,得球状固定化脂肪酶。试验表明,此固定化酶具有良好的耐热性能,在60℃下加热固定化脂肪酶和游离脂肪酶1.5h,固定化酶活力仅损失30%,而游离脂肪酶的酶活只为原来的18%。固定化脂肪酶还有良好的可操作性,连续使用反应10次,固定化脂肪酶的酶活依然为初始酶活的95%。     

重组毕赤酵母发酵生产扩展青霉碱性脂肪酶的优化

通过毕赤酵母工程菌表达碱性脂肪酶,对表达条件进行了优化。先进行单因素实验,筛选出对碱性脂肪酶表达影响较大的4个因素:诱导时间、初始pH、甲醇添加量和接种量;在单因素实验的基础上设计四元线性回归实验,利用SPSS18数据处理软件进行数据优化,结果表明,诱导时间为96h、初始pH为6.0、甲醇添加量为0.5%、接种量为150mL时有最佳的表达效果,碱性脂肪酶活力为242.7U/mL。     

PVA-SA-活性炭共聚物固定脂肪酶的研究

以聚乙烯醇(PVA)-海藻酸钠(SA)-活性炭共聚物为载体,对脂肪酶进行固定化.研究了活性炭浓度、酶初始浓度、缓冲液pH值、吸附时间及温度对固定化酶的活性及蛋白载量的影响.结果表明:在聚乙烯醇(PVA)-海藻酸钠凝胶中加入1 g/dL活性炭制成复合凝胶球,在25 ℃、pH值5.5的条件下对30 mg/mL的酶液吸附12 h,所得吸附固定化脂肪酶的活性较好.吸附固定的脂肪酶较游离酶的最适作用温度升高10 ℃,最适作用pH范围变宽,且向碱方向偏移0.2个单位.     

圆弧青霉PG37碱性脂肪酶的研究

圆弧青霉突变株ＰＧ３７是一株高产碱性脂肪酶生产菌，摇瓶酶活为５０５２ｕ／ｍｌ，作者对ＰＧ３７发酵产酶工艺及脂肪酶的酶学特性等进行了系统的研究。结果表明圆弧青霉ＰＧ３７的摇瓶最适工艺条件为：装液量５０ｍｌ／５００ｍｌ三角瓶；摇瓶转速２５０ｒｐｍ；培养温度及时间分别为２８℃和９６小时；起始ｐＨ７．５；发酵过程中第３６、５４和７２小时洛流加０．４％棉籽油。ＰＧ３７肥肪酶的最适作用ｐＨ为１０．０－１０．５     

吸附-交联法固定化脂肪酶的研究

用X-5大孔树脂和戊二醛进行吸附交联固定脂肪酶,确定固定化脂肪酶的工艺条件为35℃下,用0.05mol/L的磷酸二氢钾/氢氧化钠缓冲溶液,控制体系pH为7.0,树脂与酶的最佳质量比为9∶1,在170r/min的恒温摇床上振摇吸附3h,用0.5mL0.12mol/L戊二醛交联处理2h后得到活性较高的固定化脂肪酶,固定化脂肪酶活力为631.8U/g,活力回收率为62.4%,半衰期大于15d。      

圆弧青霉产碱性脂肪酶的中试发酵

圆弧青霉PG3 7是碱性脂肪酶的高产菌 ,在摇瓶和 2 5L发酵罐小试的基础上进行 3M3发酵罐中试 .适合的发酵条件为 :发酵培养基 (% )　豆饼粉 3 .0 ,玉米浆 3 .0 ,磷酸氢二钾 1 .0 ,硫酸镁0 .1 ,大豆磷脂 0 .5,柠檬酸钠 0 .0 5,花生油 0 .2 ;发酵起始 pH值为 8.0 ,发酵温度 2 9± 1℃ ,接种量8%～ 1 0 % ,通风量 0 .8L/ (L·min) ,搅拌转速 2 4 0r/min ,发酵周期 72h ,期间于 3 0、4 2、54h分别各流加 0 .4 %花生油 .在上述条件下 ,圆弧青霉PG3 7发酵酶活达 2 0 0 0 μmol/ (min·mL)     

吸附-交联法固定化脂肪酶的研究

用X-5大孔树脂和戊二醛进行吸附交联固定脂肪酶,确定固定化脂肪酶的工艺条件为35℃下,用0.05mol/L的磷酸二氢钾/氢氧化钠缓冲溶液,控制体系pH为7.0,树脂与酶的最佳质量比为9:1,在170r/min的恒温摇床上振摇吸附3h,用0.5mL 0.12mol/L戊二醛交联处理2h后得到活性较高的固定化脂肪酶,固定化脂肪酶活力为631.8U/g,活力回收率为62.4%,半衰期大于15d.     

酶法合成果糖棕榈酸酯的研究

以正己烷与丁酮组成的混合溶剂体系,以Novozym 435固定化酶为催化剂,以果糖和棕榈酸为反应底物合成糖酯.研究不同溶剂比例对反应的影响,及在最佳溶荆体系中对反应条件的优化摸索,实验结果表明:当丁酮在混合溶剂中的体积含量为80%(logP=0.74),pH为7.5、反应温度为50℃、果糖与棕榈酸的摩尔比为1:1.5、酶浓度为15 g/L 时,产物转化率可达到85%.     

糖类物质对固定化脂肪酶的保护作用

探讨脂肪酶在固定化过程中,几种糖类物质对酶活的保护作用.采用壳聚糖涂层法固定化脂肪酶,加入不同种类的糖液,干燥后用橄榄油法检测脂肪酶的酶活力.在没有糖类物质作为保护剂的情况下,戊二醛浓度在7.5%、交联温度在25℃、pH值为8.0时获得的固定化酶活最高,加入0.5M浓度的糖溶液,可以有效提高固定化酶活力的回收率.糖类保护剂都可以在酶的固定化过程中有效保护酶活.     

固定化米黑根毛霉脂肪酶的制备工艺优化及其酶学性质北大核心CSCD

以海藻酸钠-羧甲基纤维素钠(CMC)为复合载体,戊二醛为交联剂,探究了包埋-交联法制备固定化米黑根毛霉脂肪酶的最佳工艺条件,并对固定化米黑根毛霉脂肪酶的酶学性质进行分析。结果表明,制备固定化米黑根毛霉脂肪酶的最佳工艺条件为海藻酸钠质量分数2.5%、CMC质量分数1.5%、脂肪酶液浓度800 U/mL、CaCl_(2)质量分数5%、戊二醛质量分数0.03%、交联固定化时间30 min,在此条件下固定化米黑根毛霉脂肪酶的酶活力为245.58 U/g,与游离脂肪酶相比,固定化脂肪酶热稳定性和pH稳定性均有所提高。交联剂戊二醛的添加可以提高固定化脂肪酶的操作稳定性和储存稳定性,在重复使用7次后相对酶活力保持在57.39%,在4℃下存放7周后相对酶活力为61.89%。包埋-交联法制备的固定化米黑根毛霉脂肪酶具有更好的稳定性和适应性,为实现植物油酶法酯化脱酸工业化生产提供参考。     

酶法合成棕榈酸马铃薯淀粉酯

以马铃薯原淀粉和棕榈酸为原料,在无溶剂体系下,以LipozymeTLIM为催化剂合成棕榈酸淀粉酯。考察了脂肪酶添加量、底物配比、反应时间、反应温度对淀粉酯合成的影响。确定了最适反应条件为脂肪酶添加量为6%(干淀粉),淀粉棕榈酸质量比为3:10,反应时间60h,反应温度65℃,产物取代度可达0.0351。对产品进行淀粉-碘复合物吸收光谱和红外光谱检测,证明合成了棕榈酸淀粉酯。     

固定化脂肪酶催化制备甘油三酯型鱼油

以固定化脂肪酶作为催化剂,以甘油和鱼油乙酯为原料进行酯交换反应制备甘油三酯型鱼油。通过单因素试验考察了酶种类、真空度、反应温度、加酶量对酯交换反应的影响,并采用正交试验对酯交换反应条件进行了优化。结果表明：固定化脂肪酶催化制备甘油三酯型鱼油的最佳反应条件为Novozym 435脂肪酶作为催化剂、真空度500 Pa、反应温度50 ℃、加酶量2%、反应时间15 h,在该条件下产物中甘油三酯含量达到78%,经过分子蒸馏后甘油三酯含量达到82.08%;脂肪酶重复使用15次,酯交换反应后产物中甘油三酯含量仍能达到74%。     

根霉脂肪酶发酵优化和酶性质的研究

对少根根霉发酵条件进行了优化.对比了二十余种碳源和氮源,正交实验选出根霉产脂肪酶的最优培养基:全脂豆粉4%,MgSO4 0.1%,K2HPO4 0.5%,(NH4)2SO4 0.2%,花生油1%,pH自然.特别对复合氮源进行了研究,有机复合氮源效果不大,有机氮源和无机氮源复合可获得较高的酶活.在温度26.5℃,转速130r/min,装液量70～100mL,上述培养基条件下,发酵酶活力最高单位315 U/mL.另外考察了酶的基本性质,利用该株菌产脂肪酶催化合成单甘酯取得良好的效果,说明该株少根根霉脂肪酶有良好的1,3位置专一性和催化活性.     

sn-2二十二碳六烯酸甘油单酯的酶法合成

以甘油三酯型鱼油为原料,利用天然DHA相对富集于甘油酯2位的特点,以1,3-特异性固定化脂肪酶催化制备Sn-2二十二碳六烯酸甘油单酯(Sn-2 DHA-MAG)。建立了"格氏反应-薄层色谱-高效液相色谱"联用以Sn-2位DHA含量为标准筛选最佳反应原料的方法,随后考察了反应体系,硼酸浓度,反应温度和反应时间等因素以优化反应条件。结果表明,以优选的甘油三酯型鱼油为原料,50 mg/m L硼酸乙醇溶液∶鱼油∶固定化脂肪酶Lipozyme TL IM质量比等于40∶80∶18构建反应体系,在常温下反应4 h,反应产物减压蒸馏后,经硅胶柱层析纯化,所得Sn-2二十二碳六烯酸甘油单酯的纯度达90%以上。     

固定化脂酶催化合成生物柴油的研究

探讨了酶法制备生物柴油的过程,通过脂肪酶酯化和醇解两种工艺路线合成生物柴油的试验研究,考察了反应条件如醇油比、催化剂用量、反应温度、反应时间等对酯化率和产品纯度的影响.试验表明,采用分批加入甲醇的酯化工艺,酯化率可以达到95%以上;采用醇解工艺菜籽油酯化率达95%以上,产品经GC分析其纯度可达98%以上,固定化酶的半衰期至少达100 d.     

固定化脂肪酶催化酯交换合成生物柴油研究

以苯乙烯为单体,二乙烯苯为交联剂,过氧化苯甲酞为引发剂,明胶为分散剂,采用悬浮聚合法制备St-DVB-CBA三元共聚高分子微球,将其作为固定化脂肪酶载体,通过共价结合法进行脂肪酶固定化,探讨固定化脂肪酶催化大豆油酯交换反应活性。实验结果表明:固定化脂肪酶在醇油摩尔比为3∶1,分三次加入;固定化酶加入量15wt.%(油重);反应时间24 h;反应温度40℃;正己烷加入量15wt.%(油重);水分含量4wt.%(油重);转化率最高,可达90.08%;固定化脂肪酶重复使用时显示出较好稳定性和催化活性。