PCR检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素基因

目的:检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素基因谱携带情况,探讨与食物中毒发病相关的金黄色葡萄球菌基因类型。方法:取食品中检出的金黄色葡萄球菌进行分离培养鉴定,通过PCR技术检测样本18种不同型的肠毒素基因的携带情况,并进行统计学分析。结果:食品中检出的金黄色葡萄球菌肠毒素基因有较高的阳性检出率,主要检出sea、seb、sei、seg、sel、sem、sen等基因,其中sea基因检出率最高,达到77.27%;sei、seg、sem、sen基因具有相关性,检出率为9.09%;seb、sel基因的检出率为4.55%。结论:在食品中主要检出金黄色葡萄球菌肠毒素sea、sei、seg、sem、sen、seb、sel等基因,其中,sei、seg、sem、sen基因的相关性还有待进一步深入研究。     

鉴定金黄色葡萄球菌的多重PCR方法

建立了一种快速鉴定和鉴别金黄色葡萄球菌的多重PCR方法。利用金黄色葡萄球菌的特异基因、耐甲氧西林基因和4种肠毒素基因nuc、mecA和sea、sec、sed、see建立6重PCR反应体系,并对PCR体系,引物浓度进行优化。6对PCR引物均能特异地扩出相应的目的基因。对47株金黄色葡萄球菌的检测结果与应用单重PCR鉴定结果完全一致。实验所建立的多重PCR方法能在一个反应体系中鉴定和鉴别金黄色葡萄球菌,为食品中金黄色葡萄球菌的快速检测提供了一种有效的检测手段。     

乳中金黄色葡萄球菌及其肠毒素的PCR检测

介绍了PCR技术在检测乳中金黄色葡萄球菌及其肠毒素方面的研究进展，并对其今后的发展方向和前景进行了展望。     

金黄色葡萄球菌B型肠毒素基因的克隆与测序

本文利用聚合酶链反应扩增出１６９ｂｐ的金黄色葡萄球菌Ｂ肠毒素基因片段,经过纯化后,通过Ｔ载体进行连接,转化,克隆出所需的质粒并进行测序,证明了ＰＣＲ扩增片段序列的正确性,为开展ＳＥＢ的研究和检测打下基础。     

食品中金黄色葡萄球菌多重PCR检测方法的研究

以耐热核酸酶基因nuc、纤维蛋白原结合蛋白基因clfA和SmaI限制性酶切片段特异序列为靶基因,设计筛选引物,建立并优化了检测金黄色葡萄球菌(Staphylococus aureus,SA)的多重PCR体系。采用10株SA和46株非SA验证了该多重PCR具有很好的特异性。PCR检测的灵敏度在DNA水平上达到1.197 3 ng。人工污染样品,当起始污染量为1.2个/g时,37℃增菌培养6 h即可检出。一共检测了43份样品,检出3份阳性样品,其中有2份阳性样品与传统方法一致,另外一份阳性样品用测序验证。作者建立的多重PCR方法可特异、快速地实现对SA的检测。     

食品中金黄色葡萄球菌肠毒素检测方法的研究进展

金黄色葡萄球菌肠毒素是引起人类疾病和细菌性食物中毒的主要致病因子,目前已知有10个血清型。在食品卫生检验工作中,曾有过多种检测肠毒素的方法,通过对各种检测方法的原理及特点的概述,介绍了各种方法的应用范围和优缺点。     

基于qPCR检测金黄色葡萄球菌3种肠毒素基因的方法研究

目的建立同时检测3种可引起食物中毒金黄色葡萄球菌肠毒素sea、seb、sec基因的方法。方法对GenBank中公布的sea、seb、sec基因序列进行分析,针对3种肠毒素基因分别设计3对特异性引物和探针,通过条件优化建立检测肠毒素sea、seb、sec基因的三重qPCR方法。结果该方法可以特异性检测到sea、seb、sec基因,而与其他病原菌或肠毒素基因无交叉反应;对肠毒素sea、seb、sec基因的最低检测量分别为10.2、1.63、9.4 copies/μL;组内和组间的变异系数均小于5%。结论该方法快速灵敏、准确可靠,为金黄色葡萄球菌肠毒素的快速检测及多重qPCR试剂盒的开发奠定基础。     

食品中金黄色葡萄球菌及肠毒素的检测方法

食品中金黄色葡萄球菌及肠毒素的常规检测方法包括传统的微生物分离培养及生化鉴别,肠毒素的免疫学检测等。本文简要介绍了各种方法及其原理和优缺点。     

PCR法检测原料乳中金黄色葡萄球菌肠毒素A基因型

通过建立PCR方法来检测原料乳中金黄色葡萄球菌肠毒素A基因型,优化其退火温度并验证了其敏感性、特异性.结果表明此方法在退火温度为58.7℃时扩增效果较为理想;灵敏度为1.357 pg/μL;以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、嗜热链球菌、志贺氏菌、沙门氏菌的基因组DNA为模板作为特异性检测对照组并分别进行PCR扩增反应,结果为阴性.同时对采集的乳样进行检测,乳房炎乳样中检测出了金葡菌肠毒素A基因,正常乳中没有检测出金葡菌,初步判断乳房炎是由金葡菌引起的.     

利用简并引物检测金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因

通过设计简并引物建立一种PCR技术同步快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素A和B基因的方法。根据金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因编码序列,设计一对特异性简并引物SEAB来扩增靶基因片段,长度分别为105bp和135bp,通过对金黄色葡萄球菌肠毒素A、B菌株和4株对照菌株进行PCR检测,评价该引物的特异性;对金黄色葡萄球菌肠毒素B的DNA系列10倍稀释,对其灵敏性进行PCR检测。结果显示,金黄色葡萄球菌肠毒素A和B菌株的DNA检测结果呈阳性,4株对照菌株的检测结果呈阴性,通过基因测序证实了PCR产物的特异性,SEB的DNA最低检测浓度为3.58ng,整个检测过程不超过20h。建立了一个特异、快速灵敏的在同一条件下,金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因的PCR检测方法。     

实时荧光定量PCR技术在金黄色葡萄球菌检测中的应用

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是主要的食源性致病菌之一。实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术是近年来广泛应用于食源性致病菌的快速检测方法,具有特异性强、灵敏度高等特点。本文综述了Real-time PCR技术原理、分类及其在检测食品中金黄色葡萄球菌的应用,并对其应用前景进行了展望。      

多重实时荧光定量PCR快速检测婴幼儿奶粉中沙门氏菌、克罗诺杆菌和金黄色葡萄球菌

目的建立多重实时荧光定量PCR(multiplex quantitative real-time PCR,multiplex qPCR)快速检测奶粉中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和克罗诺杆菌3种常见致病菌的方法。方法筛选目标菌株的特异性引物与探针,优化反应体系,建立稳定的多重q PCR反应体系。通过阳性菌株加标的方式验证体系的特异性,并确定人工污染奶粉的检出限。结果各对引物探针对目标菌株均能扩增,多重实时荧光PCR未发现交叉反应,对17株非目标菌进行检测均未检出,人工污染奶粉中克罗诺杆菌和沙门氏菌的检出限均为10~3 CFU/mL,金黄色葡萄球菌的检出限为10~4 CFU/mL。结论本研究方法可实现婴幼儿奶粉样品中3种致病菌qPCR高效率检测。     

辽宁省2018年食源性金黄色葡萄球菌脉冲场凝胶电泳分子分型及毒力基因的研究

目的 了解辽宁省食源性金黄色葡萄球菌的肠毒素分布情况及基因分型特征。方法 采用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis, PFGE)和肠毒素分型方法在不同角度和层次对2018年辽宁省内分离出的18株食源性金黄色葡萄球菌进行肠毒素检测与PFGE同源性分析。结果 PCR方法及酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)方法对肠毒素结果显示, 18株菌分别存在SEB、SEC、SED、SEH 4种肠毒素, PFGE聚类分析显示, 18株金黄色葡萄球菌相似系数在60.3%~100%之间。结论 金黄色葡萄球菌均可以用PFGE和PCR进行分型, 都具有较好地分型能力, 辨识度高, 对菌株有很好的溯源性。     

乳源性金黄色葡萄球菌肠毒素的检测与基因分型

通过检验各类乳制品收集了大量乳源性金葡菌菌株,应用酶联荧光免疫分析法对菌株的肠毒素进行检测分析,并进一步使用荧光定量PCR法对肠毒素基因进行分型.结果表明,乳源性金葡菌肠毒素的检出率与基因型分布均呈现一定显著特征,应用酶联荧光免疫分析法与荧光定量PCR法对肠毒素的检测结果总体无显著性差异.     

食源性MRSA双色荧光PCR检测方法建立

目的建立快速检测食源性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)Taqman探针双色荧光PCR方法。方法根据金黄色葡萄球菌种属鉴定nuc基因和MRSA决定因子mec A基因,设计合成引物探针,建立双色荧光PCR扩增体系。利用所建立的方法检测特异性及灵敏度。将金黄色葡萄球菌依次传代培养,检测不同代次的菌株验证方法的稳定性,并对实际样品分离株进行检测验证方法的可行性与实用性。结果该方法可准确并特异性检测出MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(methicillin-susceptible Staphylococcus aureus,MSSA),检测MRSA的nuc基因和mec A基因的灵敏度可达2.7×103 CFU/m L,不同代次的菌株的检测结果一致。结论本实验所建立的双色荧光PCR检测方法具有良好的特异性、灵敏度及稳定性,可用于快速检测食源性MRSA。     

金黄色葡萄球菌五种肠毒素基因PCR-DHPLC检测方法的建立

本文设计合成了5种肠毒素基因的特异性引物,对PCR的退火温度、DNA模板量进行优化,建立了5种肠毒素基因（SEA、SEB、SEC、SED、SEE）的聚合酶链式反应-变性高效液相色谱（PCR-DHPLC）检测方法,并测定方法的灵敏度和特异性。结果表明建立的PCR-DHPLC检测方法的特异性很好,灵敏度可达到100cfu/m L。PCR-DHPLC方法具有快速、准确、高通量等优点,在进出口食品中金黄色葡萄球菌肠毒素的检测上有很好的应用价值。      

基于纳米金标记的金黄色葡萄球菌可视化检测方法研究

目的 以纳米金为载体, 对金黄色葡萄球菌进行可视化检测。方法 将与金黄色葡萄球菌目标序列互补的DNA 1和DNA 2连接到纳米金上, 当体系中出现金黄色葡萄球菌目标序列时, 两条短链DNA就会与目标序列杂交, 使纳米金之间的距离拉近, 从而使纳米金发生团聚, 导致纳米金的颜色从酒红色变为蓝色。由于金黄色葡萄球菌目标序列浓度的不同, 从而引起纳米金之间团聚的程度不同, 纳米金就会相应的呈现出不同的颜色变化, 这样就可达到可视化检测的目的。结果 在最优实验条件下, 本方法在检测金黄色葡萄球菌目标序列时, 浓度在1~1000 pmol/L范围内呈现良好的线性关系, 检出限为0.5 pmol/L; 检测金黄色葡萄球菌时, 线性范围为30~9800 CFU/mL, 检出限为25 CFU/mL。结论 通过特异性和加标回收实验, 证明本方法可以用于实际样品的检测。     

Taqman探针实时PCR检测金黄色葡萄球菌的研究

建立了Taqman探针实时PCR方法,针对乳中携带sea基因的金黄色葡萄球菌进行检测。研究所设计的引物具有良好的特异性,而且Taqman探针实时PCR方法检测sea基因的灵敏度高,最低检出限为69 fg,并且该方法可在8 h内完成人工污染乳中金黄色葡萄球菌的检测,最低检出限为83 cfu/mL。研究所建立的方法具有特异性强、灵敏性高及操作简便等优点,适宜于牛乳中金黄色葡萄球菌污染的调查及监测。