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纳豆激酶分离纯化及纤溶活性研究 总被引:10,自引:0,他引:10
经过生理盐水浸提、(NH4)2SO4分级沉淀、Sephadex G-100凝胶层析等纯化步骤,从纳豆中获得层析纯的纳豆激酶,纯化倍数15.6,回收率10.2%,SDS-PAGE电泳显示为二个组分,分子量在29000左右。对其纤溶性质研究表明:纳豆激酶活性的最适pH为8.0,pH6~10溶液中40℃以下基本稳定,pH<5失去纤溶活性;模拟胃环境的酸性条件下,粗酶失去纤溶活性,而纳豆生理盐水浸提液纤溶活性保持25%;SDS-PAGE电泳显示,胰蛋白酶对纳豆激酶成分没有降解作用;体外溶栓作用表明,纳豆激酶溶解纤维蛋白的方式是直接溶解,而不是通过激活纤溶酶原。 相似文献
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纳豆激酶纤溶活性研究 总被引:3,自引:1,他引:3
通过制备纳豆提取液、纳豆激酶粗酶,对纳豆激酶纤溶活性进行研究。结果表明:纳豆激酶纤溶活性最适pH为8.0,pH6~10溶液中40℃以下基本稳定,pH<5失去纤溶活性;模拟胃环境的酸性条件下,粗酶失去纤溶活性,而纳豆浸提液纤溶活性保持25%;SDS-PAGE电泳显示,胰蛋白酶对纳豆激酶成分没有降解作用;体外溶栓作用表明,纳豆激酶溶解纤维蛋白的方式是直接溶解,而不是通过激活纤溶酶原。 相似文献
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通过硫酸铵分段沉淀、DEAE-32纤维素柱和SephadexG-75柱层析,从福寿螺(Ampullarum crossean)体内分离纯化出一种相对分子质量约为40kDa的纤溶活性蛋白,紫外光谱法测定表明,该蛋白具有纤溶作用,经SDS-PAGE电泳显示为一条带。研究表明,该蛋白作用最适pH为8.0,最适温度为59℃,热稳定性较好,金属离子Na+对酶的活力无影响,而K+、Mg2+、Ca2+可提高此蛋白酶的活力。采用平板法测定此蛋白酶的血纤维蛋白溶解活性,证明此酶具有强烈的纤溶活性。 相似文献
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通过硫酸铵分段沉淀、DEAE-32纤维素柱和SephadexG-75柱层析,从福寿螺(Ampullarum crossean)体内分离纯化出一种相对分子质量约为40kDa的纤溶活性蛋白,紫外光谱法测定表明,该蛋白具有纤溶作用,经SDS-PAGE电泳显示为一条带.研究表明,该蛋白作用最适pH为8.0,最适温度为59℃,热稳定性较好,金属离子Na+对酶的活力无影响,而K+、Mg2+、Ca2+可提高此蛋白酶的活力.采用平板法测定此蛋白酶的血纤维蛋白溶解活性,证明此酶具有强烈的纤溶活性. 相似文献
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罗伊氏乳杆菌DSM122460无细胞上清发酵液(cell-free supernatant,CFS)具有较高的胆固醇移除能力,经初步鉴定有效成分为蛋白质。通过超滤浓缩、硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose F.F阴离子交换层析进一步对该活性成分进行分离纯化。纯化后,其比活力达到61.6 U/mg,纯化倍数为32.4。经SDS-PAGE检测,样品达到电泳级纯,分子量约为60 ku。通过质谱鉴定初步认定该活性蛋白为一假设蛋白,其功能尚待进一步研究。 相似文献
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豆豉纤溶酶分离及其特性的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
采用硫酸铵分级沉淀、SephadexG-100凝胶过滤层析,从豆豉粗酶液中提取纤溶酶。分离后的纤溶酶样品在SDS-PAGE电泳中有一个活性峰呈单一条带,分子量为35kDa,活性回收率为22.5%,纯化倍数为11.7;另一活性峰呈三条带,需进一步分离。特性研究表明:在pH7.0左右,温度40℃时,酶活力最高;该纤溶酶不耐热,其纤溶活性可被Mn2+、Mg2+以及Na2SO3激活,Ca2+以及乙醇、明胶对酶活力具有较强的抑制作用;NaCl浓度低于10%,酶活力能够基本保持稳定。 相似文献
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豆豉纤溶酶Subtilisin FS33的提取纯化与鉴定 总被引:1,自引:1,他引:1
探讨了凝胶层析法提取纯化新型纤溶酶Subtilisin FS33的方法.芽胞杆菌(Bacillus subtilis)DC33发酵液或固态豆豉抽提液在30%~65%硫酸铵饱和度下分段盐析沉淀,再经DEAE-Sepharose FF、Phenyl Sepharose 6FF、Sephadex G-50连续凝胶层析纯化,得到电泳纯纤溶酶Subtilisin FS33,其最终纯化倍数和回收率分别达到34.6倍和13.0%,酶蛋白比活力达到15495U/mg.该酶在还原和非还原条件下SDS-PAGE电泳分析均呈现单一条带,分子量为30kDa:活性电泳FS33凝胶条带在纤维蛋白平板上也表现出强烈纤溶活性. 相似文献
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Rosario Martín Teresa García Bernab Sanz Pablo E Hernndez 《Journal of the science of food and agriculture》1992,58(3):447-449
Immunoadsorption chromatography has been used to isolate horse-specific soluble muscle proteins from crude horse protein extracts. Horse-specific polyclonal antibodies against soluble horse muscle proteins immobilised on a Protein A-Sepharose CL-4B matrix were used to adsorb the corresponding antigens. Analysis of the crude soluble horse muscle proteins by sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) showed the existence of 20 protein subunits in the gel. SDS-PAGE of the proteins recovered by affinity chromatography showed nine protein subunits, three of which were enriched after the immunopurification step. These affinity-recovered horse-specific soluble muscle proteins may be used as antigens in the development of monoclonal antibodies to detect and quantify horse meat in raw, unheated meat mixtures. 相似文献
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榆干离褶伞溶栓酶的纯化及酶学性质研究 总被引:1,自引:1,他引:1
采用离子交换层析、凝胶过滤层析及快速蛋白液相色谱等蛋白质分离纯化技术,从榆干离褶伞菌丝体中纯化一种溶栓酶,并探讨各种因子对榆干离褶伞溶栓酶活性的影响,观察溶栓酶对纤维蛋白及纤维蛋白原的水解特征和酰胺水解活性。实验结果表明,其分子质量约为50 ku,该酶的最适pH和最适温度为pH 6.0,35℃,并对tPA底物S-2288最敏感。Mn~(2+)和Mg~(2+)激活酶活性,而Cu~(2+),EDTA对酶活有抑制作用。该酶不仅直接水解纤维蛋白,还可以水解纤维蛋白原。榆干离褶伞很有潜力成为治疗血栓的新的药物来源。 相似文献
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以植物乳杆菌KLDS1.0391的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增得到pfs基因,与Gen Bank中的序列对比发现同源性为99%。将目的基因与表达载体p QE-30连接,并将重组质粒p QE-30-pfs转化到E.coli M15中。异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白,经SDS-PAGE分析,在全菌体蛋白中含有一条明显的特异性蛋白条带,大小约为27.4ku。经Ni-NTA纯化系统纯化后,在SDS-PAGE凝胶电泳图上获得纯化产物的条带。结果表明,原核表达载体p QE-30-pfs构建成功,且Pfs蛋白在大肠杆菌中成功表达,采用Ni-NTA纯化系统成功纯化了重组蛋白Pfs,为体外合成AI-2(Autoinducer-2)奠定了基础。 相似文献
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为了解发芽过程中热稳定蛋白动态变化趋势,以澳麦为原料,模拟工业制麦条件,系统分析了麦芽制备过程中热稳定蛋白分布变化。通过在浸麦最后一天添加Mg2+、K+、赤霉素(GA3)调节蛋白酶酶活及分解。采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)电泳和考马斯亮蓝法(Bradford法),研究添加金属离子及赤霉素后热稳定蛋白分布及含量。结果表明,麦芽中热稳定蛋白分子质量主要分布在约40 ku和10 ku两个区域。经制麦后,40 ku分子质量蛋白质含量增加,10 ku附近蛋白质含量变化不明显。Mg2+和赤霉素添加降低了热稳定蛋白含量,K+有利于热稳定蛋白含量增加。 相似文献
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以鲜马鹿茸为原料,对比六种蛋白提取方法,依据提取蛋白量及SDS-PAGE电泳图谱确定鹿茸水溶性蛋白有效提取方法;模拟胃肠环境对提取的蛋白进行体外模拟消化研究,测定其体外胃肠消化稳定性及消化过程中游离氨基含量变化。结果表明:组成为100mmol/L Tris、6mol/L盐酸胍、0.02mol/L EDTA-2Na和1%胃蛋白酶抑制剂的提取液提取蛋白量最高,电泳条带多且清晰;蛋白在体外模拟胃、肠环境下消化5min后即迅速被分解,消化60min后即被分解为20ku以下的小分子量蛋白或多肽,消化2.5h后分子量主要分布在7823u及以下范围,在肠和胃肠连续消化过程中游离氨基含量随时间的延长而显著增加,这表明鹿茸水溶性蛋白较易被分解;模拟肠消化2.5h后游离氨基含量增加了一倍,显著大于胃消化中的增加量(p<0.01),这暗示着鹿茸水溶性蛋白更有利于肠消化。 相似文献
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干酪乳杆菌LCR 6013经10.00 mg/L的亚硝酸钠诱导和溶菌酶破壁,粗酶溶液分别经过30%和60%饱和硫酸铵溶液分级沉淀,沉淀被溶解和透析后分别得蛋白液Ⅰ和蛋白液Ⅱ,通过阴离子DEAE Sepharose Fast Flow和葡聚糖凝胶G-100层析柱分离纯化。蛋白液Ⅱ纯化得亚硝酸盐还原酶蛋白(NiR),在加入细胞色素C才能降解亚硝酸盐,LCR6013的每升发酵液得到0.54 mg活性酶蛋白,其NiR比酶活为1851.20 U/mg,得率为2.08%,纯化后其NiR比活力提高16倍,经SDS-PAGE电泳确定LCR6013 NiR的单体分子质量约为45 ku。同时,由蛋白液Ⅰ纯化的蛋白加入LCR6013的NiR中,表现降解亚硝酸盐的活力,经鉴定为电子供体蛋白(El D),经SDS-PAGE电泳确定LCR6013中ElD的单体分子质量约为13 ku,与细胞色素C的单体分子质量相同。LCR6013的ElD、细胞色素C、FeSO_4和Na_2SO_3分别协同NiR能在48 h内将75.00 mg/L的亚硝酸钠完全降解,而LCR6013的ElD和细胞色素C降解效果最好。 相似文献
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为了提高大豆分离蛋白(SPI)的起泡性,对SPI经alcalase有限水解产物中不同分子大小的肽段采用谷氨酰胺转移酶TGase进行交联。结果表明:TGase交联可有效提高SPI的起泡性,特别是显著地提高了其泡沫稳定性;MW﹥10 ku的大分子肽当加酶量为15 U/g底物且交联4 h时得到最佳的泡沫稳定性为88.5%;MW﹥10ku和MW﹤5 ku的大分子和小分子肽混合物当加酶量为50U/g(底物),交联时间为4 h、大分子与小分子肽摩尔比为1∶1时得到的最佳泡沫稳定性为60.3%;MW>10 ku的大分子肽交联产物的分子质量显著高于MW>10ku的大分子肽和MW<5 ku的小分子肽(摩尔比1∶1)交联产物的分子质量。 相似文献