酶法水解麦胚蛋白及其产物的抗氧化活性研究

选择碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶5种蛋白酶对麦胚蛋白进行水解,并考察其水解产物的抗氧化活性。结果表明,中性蛋白酶为制备麦胚抗氧化肽的最适蛋白酶,其最佳水解条件为:底物质量分数4%,酶添加量6 000U/g,酶解温度50℃,pH值7.5,水解至270min时抗氧化活性最大。     

麦胚蛋白水解度与麦胚抗氧化肽活性关系

用固定化碱性蛋白酶水解冻干麦胚蛋白粉制备麦胚抗氧化肽,研究麦胚蛋白的水解度与抗氧化肽活性的关系。在单因素实验基础上,利用Box‐Behnken实验设计对影响因素进行优化试验和统计分析。结果显示,酶解麦胚蛋白的水解度和麦胚抗氧化肽的活性密切相关;响应面分析试验得到麦胚抗氧化肽对自由基清除率的回归方程,方程达到极显著水平,拟和度较高。固定化蛋白酶水解麦胚蛋白获取抗氧化肽优化工艺参数：pH值为9．0、酶解温度56℃和酶解时间230 min。在此条件下,麦胚蛋白的水解度为17．85％,抗氧化肽对自由基的清除率达到57．42％。     

酶解方式对核桃蛋白肽及其抗氧化活性的影响

分别采用7种蛋白酶对核桃蛋白进行单酶水解,并与双酶复合酶解进行比较,考察不同酶解方式对酶解产物水解度、短肽得率和抗氧化活性的影响。结果表明,碱性蛋白酶单酶酶解核桃蛋白,产物的水解度和短肽得率显著高于其它单酶处理,分别达到18.94%和76.37%,对DPPH自由基清除能力的IC50值仅为3.23mg/mL,抗氧化活性显著高于其它处理;将碱性蛋白酶分别与其它蛋白酶组合酶解,核桃蛋白酶解产物的水解度和短肽得率均有所提高,其中与木瓜蛋白酶组合处理的水解度可达28.36%,短肽得率可提高至85.62%。双酶酶解产物对提高清除DPPH自由基和羟自由基的活性不显著,碱性蛋白酶分别与中性蛋白酶、木瓜蛋白酶的组合可以显著提高酶解产物清除超氧阴离子自由基的活性。     

不同酶解法水解黑龙江小麦麦胚蛋白的抗氧化功能比较研究

通过采用四种不同蛋白酶对麦胚蛋白分别进行单酶水解、双酶同步水解和分步水解,以水解产物的水解度和抗氧化性为指标,比较研究麦胚蛋白的酶解方法与水解物的抗氧化功能的关系。结果表明：单酶水解时碱性蛋白酶的水解物抗氧化效果最好,DPPH 自由基清除率达到39.74%;双酶分步水解的效果优于双酶同步水解,其中先加碱性蛋白酶后加木瓜蛋白酶效果最好,DPPH 自由基清除率达到45.36%。因此选择先加碱性蛋白酶后加木瓜蛋白酶作为水解麦胚蛋白最佳工艺。     

双酶水解脱脂麦胚制备抗氧化肽工艺的研究

以脱脂麦胚为原料,利用中性蛋白酶和木瓜蛋白酶双酶水解制备具有抗氧化活性的麦胚肽。以水解度为考察指标,采用响应面法,对酶解工艺进行优化。实验结果表明双酶水解最佳条件是：[E]/[S]为0.03,温度在52℃,酶解2.2 h时,麦胚蛋白水解度达到最大值为17.26%。     

制备花生抗氧化肽的蛋白酶筛选研究

选用7种食品级蛋白酶水解花生蛋白,研究单一酶作用和双酶组合作用对水解产物水解度及体外抗氧化能力的影响,结果表明:除风味蛋白酶外,单一酶以及其他单酶两两组合对花生蛋白的水解程度都很小,其中碱性蛋白酶作用较好一些.风味蛋白酶单独作用以及与其他酶组合作用于花生蛋白,其水解度都很高,最高可达33.7%;以不同方法测定不同酶解产物的抗氧化能力表明,碱性蛋白酶作用产物抗氧化能力最强,双酶组合作用对水解产物的抗氧化能力影响不大,因此选用碱性蛋白酶做进一步酶解条件优化的研究.     

脱脂米糠抗氧化肽的制备工艺研究

为了得到脱脂米糠抗氧化肽的最佳制备工艺,研究了胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶酶解脱脂米糠蛋白的进程特性以及不同的酶解条件对脱脂米糠抗氧化肽活性的影响。从5种蛋白酶中筛选出最合适的酶,通过单因素实验考察了底物浓度、加酶量、pH、温度以及时间对酶解产物水解度和ABTS自由基清除率的影响,在单因素实验的基础上,以酶解产物的ABTS自由基清除率为响应值,进行Box-Behnken中心组合实验。结果表明:选用碱性蛋白酶制备脱脂米糠抗氧化肽效果最好;最佳酶解工艺条件为加酶量1.8%、温度50℃、时间276 min、pH9.0、底物浓度5%;在最佳酶解工艺条件下,所得脱脂米糠抗氧化肽对ABTS自由基清除率可达71.85%。     

麦胚抗氧化肽水解用酶的筛选研究

研究了中性蛋白酶AS1.398、Neutrase及碱性蛋白酶Alcalase、Proleather FG-F、Protease S水解麦胚蛋白的进程特性,考察了5种蛋白酶水解物的体外抗氧化活性。结果表明,碱性蛋白酶Proleather FG-F是制备麦胚抗氧化肽的最适水解酶,其酶解物清除超氧阴离子自由基(O2-.)的能力最强,IC50为1.33mg/mL;其酶解物中相对分子质量小于1000的组分所占比例最高,达到68.28%。     

麦胚蛋白双酶酶解物的制备及其体外醒酒活性的研究

为充分利用麦胚资源,制备具有醒酒作用的麦胚肽,本研究以Na_2CO_3预处理过的麦胚为原料,以肽得率(TCA-PSI)、水解度(DH)及乙醇脱氢酶(ADH)激活率为指标,研究了碱性蛋白酶(Alcalase)、中性蛋白酶(Neutral)双酶分步酶解工艺及酶解物的醒酒活性。结果表明,双酶分步酶解的最优工艺条件为麦胚蛋白质量分数为3.5%,Alcalase添加量4 000 U/g,Neutral添加量1000 U/g,所得酶解物的TCA-PSI、DH、ADH激活率分别为:75.49%、65.18%、68.37%。表明麦胚蛋白双酶酶解物可以显著提高ADH的活力,具有较好的体外醒酒活性。     

不同酶对藜麦蛋白肽制备的影响及其抗氧化活性研究

本实验以藜麦蛋白为原料,采用碱性蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶分别对藜麦蛋白进行水解,制备藜麦蛋白肽。通过单因素实验对五种酶水解制备的藜麦蛋白肽以蛋白水解度、DPPH自由基清除能力、·OH自由基清除能力、ABTS+自由基清除能力、·O2-自由基清除能力为测定指标,研究五种蛋白酶对藜麦蛋白的水解能力和抗氧化活性影响,选出效果相对较佳的酶水解工艺。综合各指标的结果表明,碱性蛋白酶和复合蛋白酶水解能力较强,制备的藜麦蛋白肽抗氧化活性较其他两种酶更好。碱性蛋白酶和复合蛋白酶最佳酶解工艺分别为:酶与底物比0.5%(w/w),底物与水为1∶25(w/v),水解温度50℃,水解时间5h,pH10.0;酶与底物比0.5%(w/w),底物与水为1∶25(w/v),水解温度55℃,水解时间5h,pH8.0。本研究为藜麦蛋白的后期的深加工利用提供一定理论依据。     

麦胚蛋白酶解物的溶解性研究

利用中性蛋白酶、木瓜蛋白酶对麦胚蛋白的溶解特性进行改善。系统研究了底物浓度、酶浓度、酶解时间、pH、温度等工艺条件对麦胚蛋白酶解物的溶解特性的影响。试验结果表明：中性蛋白酶的水解度以及水解产物的溶解度优于木瓜蛋白酶。在底物浓度10％,中性蛋白酶浓度1．0％,酶解时间2．5h,pH6．5,温度35℃条件下麦胚蛋白水解度1．40％,溶解度58．7％,比酶解前溶解度24．3％有较大提高。     

山羊乳酪蛋白酶解工艺及抗氧化性研究

为了制备山羊乳酪蛋白活性肽,选用中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶,采用对比和正交试验方法,研究了山羊乳酪蛋白单酶和复合酶的酶解工艺,测定了山羊乳酪蛋白的总肽键摩尔数,优选出了山羊乳酪蛋白的酶解工艺参数。结果表明：山羊乳酪蛋白的总肽键摩尔数为8.5379 mmol/g。单酶中胰蛋白酶和中性蛋白酶对山羊乳酪蛋白的水解度较大,木瓜蛋白酶较小。胰蛋白酶对山羊乳酪蛋白适宜的酶解工艺：加酶量2500 U/g,pH 7.5,50 ℃下酶解2 h。中性蛋白酶和胰蛋白酶复合以及中性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶三种酶复合的水解度较大,其水解度、平均肽链长度和平均相对分子量分别为17.34%、21.16%,5.77、4.73和692、567 u。     

麦胚蛋白水解物抗氧化活性及其作用模式

采用中性蛋白酶水解麦胚蛋白0.5～6 h,测定水解物的DH(degree of hydrolysis)、硫代巴比妥酸值(TBARS值)、POV值(Prroxide value)、Cu2+螯合能力、二苯代苦味肼基自由基清除能力(DPPH自由基)。结果表明,麦胚蛋白水解度随着水解时间的延长而增加;水解物5 h与未水解的蛋白及0.02%VC相比,在大豆卵磷脂脂质氧化体系(Liposome体系)中具有较强的抑制脂质氧化的能力,还具有较强的Cu2+螯合能力和清除自由基能力,未水解的蛋白具有较弱的抗氧化能力;通过对未水解的麦胚蛋白及不同浓度蛋白水解物的抗氧化指标测定和分析,认为水解物的抗氧化活性与蛋白本身的结构、肽链长短及氨基酸残基有关。     

不同酶切方式引发大豆蛋白构象变化及功能特性评价

本研究以枯草杆菌碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、枯草杆菌中性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解大豆分离蛋白产物为研究对象,借助十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外吸收光谱、荧光光谱、红外光谱解析不同酶切条件下蛋白产物构象变化,并对其乳化性及抗氧化活性等功能特性进行评价。结果表明：酶解促进蛋白解折叠,内部氨基酸暴露,并受到酶切方式的影响;菠萝蛋白酶酶解作用范围宽泛,疏水性氨基酸浓度达到最大值(27.10±0.08)%,氨基酸存在微环境发生改变,形成柔性结构单元,其乳化性及抗氧化性都得到明显改善,为具有最佳功能特性的酶解蛋白;酶特异性作用位点导致酶解作用程度较低的枯草杆菌碱性蛋白酶、枯草杆菌中性蛋白酶、胃蛋白酶及胰蛋白酶水解产物功能特性均高于未处理样品。值得注意的是,水解程度最低的胰蛋白酶水解产物呈现优异乳化稳定性,这是因为大豆中胰蛋白酶抑制剂抑制蛋白过度水解,提升蛋白溶解度同时,肽段长度适宜稳定包裹油滴。     

谷朊粉酶解条件的优化及其抗氧化活性的研究

以溶解性为指标,采用单酶(Alcalase 2.4 L)和双酶(Alcalase 2.4 L+Flavourzyme 500 MG)2种方法水解谷朊粉,在单因素试验的基础上通过正交试验,优化了单酶和双酶水解的最佳条件,并分析了最优酶解条件下得到的2种产物的抗氧化活性、相对分子质量分布及其氨基酸组成。结果表明,单酶和双酶水解物的最大溶解性分别达到了61.38%和82.21%。水解物质量浓度为3.0 mg/m L时,单酶水解物的还原力、DPPH自由基、超氧阴离子、羟自由基的清除率分别达到0.81、71.82%、56.83%和70.82%,而双酶水解物相应的指标分别达到1.01、85.33%、74.84%和84.33%。结果表明,双酶水解不仅能提高谷朊粉的溶解性,而且也能明显提高其抗氧化活性。双酶水解物中小分子肽(分子质量<1 500 u)和疏水性氨基酸的质量分数分别达到61.63%和33.74%,均高于单酶水解物,表明谷朊粉酶解物的抗氧化活性与小分子肽含量、疏水性氨基酸呈现正相关。     

固定化碱性蛋白酶制备麦胚降血压肽研究

采用中空壳聚糖作为载体,通过双功能试剂戊二醛作偶联剂,将碱性蛋白酶连接到中空壳聚糖,制备固定化碱性蛋白酶。研究固定化碱性蛋白酶的部分性质及水解麦胚蛋白质条件。实验结果显示,1.5% 戊二醛溶液活化的壳聚糖偶联1mg 碱性蛋白酶,酶催化相对活性可达90%;固定化酶最适pH 值为9.5,最适反应温度约65℃,催化水解麦胚蛋白质的水解率达16.5% 约需10min;固定化酶与麦胚蛋白质的比达到1:5 时,一次性获取含降血压肽水解物质的得率为15.6%。     

羊肝蛋白酶解条件优化及酶解产物抗氧化活性研究

为优化羊肝蛋白酶解工艺条件及探讨其体外抗氧化活性,以水解度为评价指标,采用碱性蛋白酶酶解羊肝,在单因素试验基础上,通过响应面法优化羊肝蛋白的酶解工艺条件。结果表明,羊肝蛋白最佳酶解条件为酶解温度51 ℃、pH 8.5、酶解时间4.1 h、加酶量0.40%。在此条件下,进行3次验证试验,测得羊肝酶解液实际水解度为（40.31±0.24）%。体外抗氧化试验结果表明,羊肝酶解产物具有一定的抗氧化活性,其清除羟自由基（·OH）、超氧阴离子自由基（O2-·）和DPPH自由基的IC50值分别为17.01 mg/mL、13.21 mg/mL和10.42 mg/mL,并具有一定的还原能力。     

河套小麦胚芽源多肽的抗氧化活性研究

利用中性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶等酶解河套小麦胚芽蛋白获得多肽,测定其体外抗氧化能力,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）确定其多肽分布。结果表明,胚芽蛋白及多肽浓度与抗氧化能力呈正相关。不同浓度的中性蛋白酶酶解获得的多肽的抗氧化能力显著高于胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解获得的多肽（P<0.05）,其还原能力、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐（ABTS+）和1,1-二苯基-2-苦基苯肼（DPPH）清除率最高达（1.17±0.004）1.0 mg/mL、（84.82%±0.87%）1.5 mg/mL和（55.01%±0.01%）1.0 mg/mL,且其ABTS+和DPPH自由基清除率均显著高于胚芽蛋白（P<0.05）。另外,不同蛋白酶水解能力不同,其中胃蛋白酶的水解能力最大,中性蛋白酶水解能力最小;胚芽蛋白多肽的抗氧化能力与其分子量大小相关,但不一定蛋白多肽的分子量越小,其抗氧化效果越好。上述结果为进一步研究河套小麦胚芽抗氧化肽提供了一定的参考依据。