乳品中β-内酰胺类抗生素快速检测试纸条研制

通过β-内酰胺类抗生素-载体蛋白偶联物的合成,单克隆抗体的制备与纯化,胶体金标记物的制备,β-内酰胺类抗生素单克隆抗体-胶体金标记物的制备并冻干到微孔试剂,样品吸收垫和反应膜的制备等研究过程,研制出乳制品中β-内酰胺类抗生素的快速检测试纸条。检测限分别为:青霉素G2μg/L、氨苄青霉素4μg/L、阿莫西林5μg/L、苯唑青霉素/邻青霉素/双青霉素均为6μg/L、头孢洛宁10μg/L、萘夫西林20μg/L、头孢喹肟20μg/L、头孢曲松25μg/L、头孢哌酮50μg/L、头孢噻呋90μg/L;本试纸条特异性好、假阳性率不高于3%、假阴性率为0,检测时间不超过15min,检测限量达到了我国和欧盟的要求,适用于乳品流通环节乳品中β-内酰胺类抗生素残留的检测。     

嗜热脂肪芽孢杆菌试管法检测牛乳中β-内酰胺类抗生素残留

采用嗜热脂肪芽孢杆菌试管法对牛乳中6种最为常见的β-内酰胺类抗生素残留进行检测,指出嗜热脂肪芽孢杆菌试管法为半定量检测法,对牛乳中β-内酰胺类抗生素残留具有较好的灵敏性.牛乳中青霉素G、氨苄青霉素、羟氨苄青霉素的检测限为6μg/kg,头孢氨苄的检测限为150μg/kg,苯唑青霉素的检测限为15μg/kg、头孢匹林的检测限为30μg/kg.在检测时间、操作难易程度上较BSDA法具有一定的优越性,可应用于牛乳中β-内酰胺类抗生素残留的检测.     

胶体金试纸条快速检测动物源性食品中头孢氨苄残留

头孢菌素类抗生素属于第二种类型的β-内酰胺类抗生素,其在动物源性食品中的残留问题引起普遍关注。为保障食品安全,实现对食品中头孢菌素类抗生素残留的快速检测,该研究利用金纳米颗粒标记头孢氨苄(cefalexin,CEX)兔多克隆抗体作为可视化信号探针,基于硝酸纤维素膜研制一种能够检测头孢菌素类抗生素的免疫层析检测试纸。试纸条以CEX包被原为检测线,以羊抗兔二抗为质控线,对试验条件进行优化后,所构建的试纸条在缓冲液体系中对CEX、头孢拉定(cefradine,RAD)和头孢羟氨苄(cefadroxil,CFR)的检测限分别可达到20、25、25μg/L。为验证方法的实用性,将一定浓度的CEX添加至虾肉、牛奶、牛肉、猪肉、生猪肝和熟猪肝6种常见的动物源性食品中进行添加回收测定。结果显示:经过简单的样品处理,所构建的试纸条在10 min内即可实现对目标物的快速可视化检测。该方法操作简便、快速,适用于大批量动物性食品中多种头孢菌素类残留的高通量筛查。     

液相色谱-串联质谱法测定禽蛋中β-内酰胺类药物残留

目的 建立了禽蛋中普鲁卡因青霉素、青霉素V、青霉素G、氨苄西林、氯唑西林、阿莫西林、头孢氨苄、头孢噻呋、头孢喹肟药物残留检测的液相色谱-串联质谱方法。方法 禽蛋用80%乙腈水溶液提取,PRiME HLB固相萃取小柱净化,用液相色谱-串联质谱测定,青霉素G-D7内标法定量。结果 在0.5-20μg/L的基质匹配标准溶液内9种β－内酰胺类药物均呈良好线性关系,相关系数均大于0.994。样品中9种β－内酰类药物的定量限为1μg/kg,在1μg/kg～10μg/kg的添加浓度范围内平均回收率为73%～96%,相对标准偏差(RSD)小于10%。本方法方便快捷准确,适于禽蛋中的9种β－内酰胺类药物残留检测。     

牛奶中泰乐菌素和替米考星的胶体金免疫层析法测定

建立一种快速、简便、同时针对牛奶中泰乐菌素和替米考星残留的检测方法.应用竞争抑制免疫层析原理,研制出泰乐菌素和替米考星胶体金试纸条,并对其性能进行了鉴定.结果表明,该试纸条对牛奶中泰乐菌素和替米考星的检测限分别为25 μg/L和50 μg/L.假阳性率低于5％,假阴性率为0,检测时间10 min,与其他大环内酯类抗生素无交叉反应.该方法操作简便、灵敏度高、特异性强,适用于乳品流通环节中泰乐菌素和替米考星残留的快速检测.     

应用酶联免疫法快速检测乳品中β-内酰胺类抗生素残留

建立乳品中β-内酰胺类抗生素残留酶联免疫快速检测方法。应用氨苄青霉素抗体,通过人工制备了氨苄青霉素(Amp)和辣根过氧化物酶(HRP)的结合物Amp-HRP,建立直接ELisa竞争法检测β-内酰胺类抗生素,确定了各种β-内酰胺类抗生素的检出限,并对检测条件进行了优化。检测了已知阴性和阳性的生鲜牛乳样品,结果表明对于阴性和阳性牛奶样品的检测未出现假阳性或者假阴性结果。该方法检测结果准确可靠,可广泛应用于检测乳品中β-内酰胺类抗生素残留的检测。     

LC-MS/MS测定动物源食品中10种β-内酰胺类抗生素残留

采用高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定动物源食品中青霉素G、青霉素V、阿莫西林、氨苄西林、苯唑青霉素、萘夫西林、双氯西林、哌拉西林、头孢氨苄、头孢唑林等10种β-内酰胺类抗生素残留量,以青霉素G-D7为内标。样品用磷酸盐缓冲溶液提取(鸡蛋和牛奶样品提取后用乙酸锌和亚铁氰化钾沉淀蛋白),然后提取液用正己烷除脂,经PEP-2固相萃取柱净化,采用高效液相色谱-串联质谱测定,内标法定量。在相应浓度范围内,10种β-内酰胺类抗生素线性系数R2均大于0.99,检测限为0.25~2.0μg/L。在低、中、高3个浓度水平下,10种β-内酰胺类抗生素在不同基质中的回收率均在80%~120%之间,相对标准偏差小于10%。该方法可以满足不同基质的动物源食品中上述10种β-内酰胺类抗生素的测定需求。     

胶体金免疫层析试纸条在猪尿β-兴奋剂多残留检测中的应用

本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,并对β-兴奋剂单克隆抗体进行标记。通过棋盘滴定法和单因素实验确定最佳的实验参数,研制出能同时检测多种β-兴奋剂的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,本方法对克伦特罗的灵敏度最高,检测线性范围(IC20~IC80)为0.31~4.52μg/L,IC50为1.18μg/L,检出限(LOD,IC10)为0.14μg/L,猪尿样品无需处理,直接检测,单个样品检测时间只需8 min;与沙丁胺醇、马布特罗、溴布特罗、氯丙那林、西马特罗等β-兴奋剂类药物都有交叉,能实现β-兴奋剂的多残留检测。对阴性猪尿的加标回收实验中,试纸条批内实验回收率在83.6%~102.2%之间,试纸条批间实验回收率在84.2%~101.5%之间,且相对标准偏差均在10%以内,与ELISA、HPLC/MS法的对比实验表明,该试纸条能应用于猪尿中β-兴奋剂多残留的定量检测。     

青霉素结合蛋白的重组表达及其在β-内酰胺类抗生素检测中的应用

目的 获得重组表达纯化的青霉素结合蛋白(penicillin binding proteins, PBPs),研究其在β-内酰胺类抗生素检测中的应用。方法 以来源于肺炎链球菌Streptococcus pneumoniae R6的PBP2x蛋白为对照,以PBP1a蛋白作为目标受体,研究其与β-内酰胺类抗生素的亲和作用。结果 经纯化后的重组蛋白PBP2x和PBP1a检测头孢噻呋、青霉素G、氨苄青霉素、喷沙西林、阿莫西林的半抑制浓度(inhibitory concentration, IC50)都在7.02 ng/mL以下,明确了PBP1a和PBP2x具有β-内酰胺类抗生素结合能力。结论 该研究为开发新的基于PBPs蛋白检测β-内酰胺类抗生素的免疫学方法奠定了基础。     

液相色谱-串联质谱法测定水产品中β-内酰胺类抗生素的残留

建立了同时测定水产品中,6种β-内酰胺类抗生素药物残留的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测方法.样品经乙腈-水(15∶2,v∶v)混合液提取,HLB固相萃取柱净化.以乙腈-0.01mol/L醋酸铵溶液(pH4.5)作为流动相,C18色谱柱进行分离,电喷雾正离子多反应监测模式进行检测.方法检测限为0.2～2.0μg/kg,加标回收率为80.8％～92.9％,相对标准偏差为2.6％～9.1％(n=9).该方法准确、灵敏、简便,适用于水产品中6种β-内酰胺类抗生素残留的测定.     

全自动固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法检测白酒生产用水中β-内酰胺类抗生素

建立了全自动固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法同时检测白酒生产用水中6种β-内酰胺类抗生素的检测方法。生产用水经过EDTA-McIlvaine缓冲溶液(pH4.0, 0.1 mol/L)调节pH值后,采用HLB固相萃取柱(60 mg/3 m L)净化。运用全自动固相萃取技术,能够连续处理60个样品的大体积水样。运用此前处理方法测得6种β-内酰胺类抗生素的检出限范围为0.02020～0.2679μg/L;定量限分别为0.0672～0.8929μg/L;加标回收率为78.4%～93.3%,相对标准偏差为2.31%～9.60%。结果表明,本方法能够快速、高效、灵敏的检测生产用水中的6种β-内酰胺类抗生素。     

牛奶中β-内酰胺类抗生素残留检测试剂盒的研制

以牛奶中残留的β-内酰胺类抗生素为检测目标,开发一种能快速检测其残留的试剂盒。利用嗜热脂肪芽孢杆菌BS 10208对酸和β-内酰胺类抗生素敏感的特点,优化其最优的生长条件,并制成在2.5 h内能发生显色反应的检测试剂盒。单因素结果表明,当菌液接种量5%、生长初始pH 8.0、培养温度55℃、蛋白胨添加量0.50%,其菌落数对数值分别为2.9、7.5、7.3、5.8。正交结果表明,在外加入0.5%蛋白胨营养肉汤中,接种5%种子液,在65℃恒温振荡器中培养24 h,其菌落数对数值为7.6。优化后检测试剂盒在2.5 h内能检测牛奶中β-内酰胺类抗生素残留,其各项参数为:反应体积为0.5 mL,1.5%琼脂,0.01 g/L溴甲酚紫浓度,BS 10208细胞总数为1.30×108 cfu,最适反应温度65℃,青霉素钠的限值为2～4μg/L。该试剂盒还能检测牛奶中残留的四环素类、磺胺类、大环内酯类、氨基糖苷类等抗生素。     

胶体金免疫层析法检测禽蛋中氯羟吡啶残留

目的 建立胶体金免疫层析法检测禽蛋中氯羟吡啶残留的分析方法。方法 在用间接竞争酶联免疫吸附法分析氯羟吡啶单克隆抗体灵敏度和交叉反应性的基础上,以胶体金标记单克隆抗体作为示踪标志物,以包被氯羟吡啶半抗原-卵清蛋白偶联物和羊抗鼠IgG的硝酸纤维素膜作为载体,制备了氯羟吡啶胶体金免疫层析试纸条。结果 氯羟吡啶单克隆抗体的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC₅₀)为1.6μg/L,与地克珠利、二硝托胺、尼卡巴嗪、磺胺喹噁啉、磺胺二甲嘧啶、癸氧喹酯、盐酸氨丙啉和盐酸氯苯胍8种药物均无交叉反应。制备的胶体金免疫层析试纸条肉眼判定禽蛋中氯羟吡啶的检出限为15μg/kg,灵敏度为98%、特异性为93%、假阴性率为2%、假阳性率为7%。结论 制备的试纸条具有操作简单、检测快速、成本低等优点,可用于大批量禽蛋样本中氯羟吡啶残留的初步筛选。     

超高效液相色谱串联质谱法测定乳制品中 10种青霉素类抗生素残留

目的建立同时测定乳制品中10种青霉素类抗生素残留的超高效液相色谱-串联质谱分析方法。方法样品经乙腈提取后,乙腈饱和正己烷除去脂肪,经0.22μm微孔滤膜过滤,用乙腈-水(含0.1%甲酸5mmol/L乙酸铵)为流动相,C18柱分离,20 min内梯度洗脱分离10种青霉素;电喷雾正离子模式电离(ESI+),多反应监测模式检测(MRM),外标法定量。结果在0.1~20μg/L浓度范围内,10种青霉素类药物在各种乳制品基质中均有良好的线性关系,线性相关系数均0.999;液体乳最低检测限为0.2μg/kg~1.0μg/kg,乳粉的最低检测限1.0μg/kg~5.0μg/kg;方法回收率在70.2%~108.2%,相对标准差为15%。结论该方法测定乳制品中10种青霉素药物的残留量简便、快速、准确,可以满足对青霉素类抗生素的监测要求。     

谷物中玉米赤霉烯酮残留的胶体金免疫层析法测定

建立一种快速、简便、针对谷物中玉米赤霉烯酮残留的检测方法。应用竞争抑制免疫层析原理,研制出玉米赤霉烯酮胶体金试纸条,并对其性能进行了鉴定。结果表明,该试纸条对谷物中玉米赤霉烯酮的检测限为100μg/kg,灵敏度为99%,特异性为94%,假阴性率为1%,假阳性率为6%,检测时间为10 min。该方法操作简便、灵敏度高、特异性强,适用于现场快速检测谷物中的玉米赤霉烯酮。     

LC-MS/MS测定牛奶中六种青霉素类抗生素残留

目的建立一种用LC-MS/MS快速测定牛奶中6种青霉素类抗生素残留的方法。方法选择青霉素G-D7为内标,样品经乙腈沉淀蛋白,SPE柱净化、浓缩,有效地去除杂质。经高效液相色谱C18柱分离,选用含0·1%甲酸的水和乙腈作流动相,在26min内,在线梯度洗脱将6种青霉素类抗生素得以分离。结果方法检出限为青霉素G0·02ng/ml、青霉素V0·06ng/ml、苯唑西林0·04ng/ml、氯唑西林0·11ng/ml、奈夫西林0·02ng/ml、双氯唑西林0·19ng/ml,在0·2~2·0ng/ml线性范围内,相关系数r为0·991,回收率大于90%,方法精密度为4·87%。结论该方法准确可靠,重复性好,灵敏度高。可适用于牛奶中多组分β-内酰胺类抗生素的确认和准确定量检测,能满足各国对上述β-内酰胺类抗生素的最低检出要求。     

胶体金免疫层析法快速检测动物组织中残留的喹乙醇

研制胶体金免疫层析法试纸条,用于动物源食品中喹乙醇药物残留的快速检测。将已制备纯化过的喹乙醇多克隆抗体与胶体金结合产生的金标抗体喷涂在玻璃纤维垫上,并将包被抗原OLA-OVA和羊抗鼠二抗分别结合在硝酸纤维素膜上,组装成免疫层析快速检测试纸条,并检测试纸条的灵敏度、特异性、准确性和稳定性。将制备的试纸条用于检测猪肉和猪肝样品,结果表明本研究制备的试纸条可以在10min内完成检测,肉眼观察的最低检测限为0.05μg/m L,与其结构类似物卡巴氧、乙酰甲喹、3-甲基-喹噁啉-2-羟酸的反应交叉性小,该试纸条假阳性率小于5%,假阴性率为0,在干燥常温条件下保存6个月仍然有效。本实验研究的检测方法可应用于动物组织中喹乙醇的快速检测和现场筛查。     

动物源食品中β-内酰胺类抗生素多残留免疫分析方法研究进展

β-内酰胺类抗生素是指化学结构中含有β-内酰胺环的一类抗生素,主要包括青霉素类和头孢菌素类.由于其使用方法不当或不遵守休药期规定等原因给人类健康带来严重危害.本文介绍了动物源食品中β-内酰胺类抗生素的现有残留检测方法,以及实现多残留快速检测的实验思路,包括目标抗体的获得和检测技术的选择.     

一种快速检测氟喹诺酮类药物的胶体金试纸卡的研制

利用胶体金免疫层析技术研制了一种快速检测牛奶中的氟喹诺酮类药物试纸卡,并配合胶体金试纸卡读数仪使用.结果表明,该试纸卡对恩诺沙星、沙拉沙星、双氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、氟甲喹、达氟沙星的检测限为20 μg/L,对依诺沙星、恶喹酸的检测限为40 μg/L,检测时间为10 min,假阳性率和假阴性率均为0.该试纸卡能够准确、可靠、简便地检测牛奶中残留的氟喹诺酮类药物,适合大量样品的现场检测.     

基于信号增敏型试纸条三聚氰胺超灵敏检测方法

通过胶体金免疫层析技术建立一种能便捷、快速、特异检测食品中三聚氰胺的超灵敏快速检测技术。在传 统的基于竞争法层析试纸条的基础上增加一个增强垫组装成增敏型试纸条,在识别垫和增强垫上分别使用25 nm和 15 nm胶体金,使其在传统型试纸条的基础上对三聚氰胺的检测灵敏度大大提高。结果表明：增敏后的试纸条可在 10 min内实现食品中三聚氰胺的快速检测;实验条件下检测灵敏度为0.5 μg/L,是传统检测灵敏度10 μg/L的20 倍; 实际样品中检测范围为0.1～5 μg/L,检测灵敏度为1 μg/L,相比于传统检测灵敏度提高了5 倍。